肌酸磷酸激酶同功酶(CK-MB) DGKC速率法

1、项 目肌酸磷酸激酶同功酶（CK-MB）方 法DGKC速率法目 录1. 检测原理2. 标本采集与处理2.1 受检者的准备2.2 静脉采血2.3 抗凝剂2.4 标本处理3. 试剂3.1 试剂3.2 校准血清3.3 试剂、校准血清的稳定性4. 仪器5. 操作6. 计算7. 操作性能7.1 精密度7.2 准确度7.3 灵敏度7.4 可报告范围7.5 特异性7.6 干扰8. 参考值9. 临床意义附录A: 参数1. 检测原理试剂中加入抑制CK-M的抗体，它能完全抑制CK-M亚基的活性而不影响CK-B亚基的活性，所得结果乘以2即得CK-MB的活性。 CK肌酸磷酸 + ADP - 肌酸 + ATPHKATP

2、+ 葡萄糖 - 葡萄糖-6-磷酸 + ADPG6PDH葡萄糖-6-磷酸 + NADP+- 6-磷酸葡萄糖酸 + H+ + NADPH2本采集与处理2.1 受检者的准备：病人空腹12h，不饮酒24h后采集血样。体检对象抽血前应有两周的的正常状况。孕妇应在产后或终止哺乳3个月后检验。此外，有无服用影响的药物以及采血的季节都应做相关记录。2.2 静脉采血：除非是卧床的病人，一般在采血时取坐位。体位影响水分在血管内外的分布，会影响测试项目的浓度。在采血前至少应静坐5分钟，一般从肘静脉取血，使用止血带的时间不超过1分钟，穿刺成功后立即松开止血带。2.3 抗凝剂：血浆使用肝素或EDTANa2（1mg/mL

3、）作为抗凝剂。2.4 标本处理：血标本室温放置30min45min后离心分离血清或血浆，在两小时内检测完毕；如两小时内不能检测完毕，将离心分离血清或血浆置洁净试管加盖2-8保存。3试剂3.1 试剂：本科使用湖南永和阳光科技有限责任公司CK-MB试剂盒，为液体双试剂，各组分如下： 组 成R1:R2=4:1混合后溶液的浓度咪唑缓冲液:100mmol/L PH=6.7醋酸镁10mmoll/LN-乙烯半胱氨酸（NAC） 20mmol/LEDTA 2mmol/LNADP 2mmol/L葡萄糖-6-磷酸脱氢酶（G-6-PDH）1500U/L己糖激酶（HK） 2500U/L抑制CK-MM的人抗体 2000U

4、/L葡萄糖20mmol/L肌酸磷酸30mmol/L二腺苷-5-磷酸 10umol/LAMP 5mmol/LADP 2mmol/L 3.2：校准血清使用湖南永和阳光科技有限责任公司提供的CKMB校准血清。校准频次：空白定标：每日需做试剂空白定标。全点定标：试剂换批号使用时或质控结果超过规定的2SD范围，需要全点定标。3.3 试剂、校准血清的稳定性：原包装试剂储存在2-8至标签所示失效日期。18-22稳定28天，试剂应避免污染。当试剂空白吸光度高于0.5时，试剂按照失效处理。CKMB校准血清在2-8储存至标签所示失效日期，复溶后-20保存，可稳定一个月，只可冻融一次，避免反复冻融。参见校准血清说明

5、书。4仪器KONELAB 30型号仪器。性能：波长340nm，仪器测定吸光度的灵敏度应达到0.001ABS以上。5操作样品为血清或肝素/EDTA抗凝血浆。本法为速率法。参数见后附，附录A。试剂参数设置、定标操作以及样本检测常规操作，见仪器操作规程。6计算A/minVt1000 CK-MB(U/L) = - = A/minFeVsd式中：A/min 每分钟吸光度变化率； e 18.5 摩尔吸光系数；Vt 反应液总体积（ml）； d 1 比色杯光径（cm）；1000 变化因数； Vs 标本体积（ml）；7操作性能7.1 精密度：批内CV0.55%，批间CV4.51%。7.2 准确度：检测结果的相对

6、不准确度10%。7.3 灵敏度：肌酸磷酸激酶同功酶浓度为：500U/L时，吸光度变化率A340nm/min为0.0540.066。7.4 可报告范围：血清与试剂用量之比为1:25时，测定上限为1000U/L。7.5 特异性：测量值在给定值的90%-110范围内。7.6 干扰：内源性干扰物溶血为1000mg/ml、脂血2000mg/ml、黄疸30mg/ml、抗坏血酸300mg/ml对测试结果无明显影响。8参考值024U/L9临床意义肌酸激酶同工酶在诊断急性心肌梗塞时有特异性，结合心肌酶图谱，有助于心肌梗塞的诊断。在急性心肌梗塞胸痛发作后，血清CPKMB上升，24小时达高峰，至48小时消失，若CP

7、KMB再度上升，提示有心肌梗塞复发。 血清CK-MB测定的最重要意义在于诊断急性心肌梗塞。急性心肌梗塞胸痛发作后46小时，病人血清CK-MB先于总活性开始升高，1236小时达峰值；多在72小时内恢复正常。其最高值达对照组4.922倍以上。如果梗塞后34天，CK-MB仍持续不降，表明心肌梗塞仍在继续进行，如果已下降的CK-MB再次升高则提示原梗塞部位病变扩展或有新的梗塞病灶；如果胸痛患者在48小时内尚未出现CK-MB升高，或小于总活性的2%，即可排除急性心肌梗塞的诊断。临床上常以CK-MB超过CK总活性的3%（离子交换柱层析法）或10%（免疫抑制法）作为急性心肌梗塞的诊断依据。用CK-MB诊断急性心肌梗塞时必须注意无论是CK-MB的绝对活性或占总活性百分率