5HPLC各个部件基本原理综述

1、HPLC原理介绍Leo.xuLeo.xureserviorinjectorpumpcolumndetectorData systemreserviorinjectorpumpcolumndetectorData systemreserviorinjectorpumpcolumndetector流动相脱气流动相脱气吹氦脱气法吹氦脱气法加热回流法加热回流法抽真空脱气法抽真空脱气法超声波脱气法超声波脱气法在线真空脱气法在线真空脱气法溶剂过滤头的清洗溶剂过滤头的清洗1.取下过滤头放在取下过滤头放在(1:4,V/V)的硝酸溶液烧杯中的硝酸溶液烧杯中超声清洗超声清洗15分钟分钟;2.取出后用蒸馏水超声清洗

2、取出后用蒸馏水超声清洗10分钟分钟;3.用吸球吹出过滤头中的液体用吸球吹出过滤头中的液体;4.再用蒸馏水超声清洗再用蒸馏水超声清洗10分钟分钟;5.用吸球吹净过滤头中的水份用吸球吹净过滤头中的水份;6.将过滤头重新插入溶剂瓶中将过滤头重新插入溶剂瓶中(正相系统注意将正相系统注意将过滤头烘干过滤头烘干)泵体材料耐腐蚀泵体材料耐腐蚀泵腔的体积要小，泵腔的体积要小，以便快速更换以便快速更换溶剂溶剂能在高压下连续能在高压下连续工作工作, ,耐压耐压40-40-50MPa. cm50MPa. cm2 2压力平稳，无压力平稳，无脉冲脉冲高压输液泵高压输液泵输出流量稳定，输出流量稳定，重复性高重复性高, ,

3、输出输出流量范围宽流量范围宽高压输液泵高压输液泵恒流泵恒流泵恒压泵恒压泵注射型泵注射型泵往复型泵往复型泵双泵头往复双泵头往复式柱塞泵式柱塞泵双柱塞往复双柱塞往复式串联泵式串联泵往复型泵工作原理图双泵头往复式柱塞泵1- 1-流动相入口流动相入口; ;2,3-2,3-带有单向阀的带有单向阀的泵头泵头; ;4- 4-脉冲缓冲器脉冲缓冲器; ;5- 5-偏心轮偏心轮; ;6- 6-活塞活塞; ;7- 7-电动机电动机; ;8- 8-单向阀单向阀; ;9- 9-至进样口至进样口双柱塞往复式串联泵1- 1-贮液罐贮液罐; ;2- 2-泵泵I( I(柱塞柱塞I);I);3- 3-单向阀单向阀; ;4- 4-

4、阻尼器阻尼器; ;5- 5-泵泵II(II(柱塞柱塞II);II);6- 6-至色谱柱至色谱柱; ;为什么为什么要冲洗要冲洗泵头呢泵头呢? ?1- 1-低压计量泵低压计量泵; ;1A,1B-1A,1B-时间比例电磁时间比例电磁阀阀; ;2- 2-微处理机微处理机; ;3- 3-混合器混合器; ;4- 4-高压输液泵高压输液泵; ;5- 5-至色谱柱至色谱柱6- 6-反馈控制器反馈控制器; ;7- 7-混合室混合室; ;8- 8-流量计信号流量计信号; ;9- 9-混合溶剂出口混合溶剂出口高高压压梯梯度度低低压压梯梯度度1- 1-程序控制器程序控制器; ;2- 2-溶剂溶剂A;A;3- 3-溶剂

5、溶剂B;B;4- 4-高压泵高压泵A;A;5- 5-高压泵高压泵B;B;恒流泵中气泡的排除打开放空阀打开放空阀, ,按仪器前面板的按仪器前面板的“PURGE”PURGE”功能键功能键, ,用大流量溶剂冲洗系统直到流出的液体连续用大流量溶剂冲洗系统直到流出的液体连续, ,证证明气泡已经排除明气泡已经排除; ;如果用如果用”冲洗冲洗”状态仍不能吸液状态仍不能吸液, ,可以用吸耳球或可以用吸耳球或注射器在排液口抽吸注射器在排液口抽吸, ,直至液体流出直至液体流出; ;如果仍然无液体流出如果仍然无液体流出, ,可能是阀球阀座粘连可能是阀球阀座粘连, ,取出单取出单向阀向阀, ,向单向阀两端分别吹气向单

6、向阀两端分别吹气, ,一通一堵为正常一通一堵为正常, ,两两端均堵说明阀球座粘连端均堵说明阀球座粘连, ,需清洗阀球阀座需清洗阀球阀座.5 5重新连接色谱柱，设定适当流速，当流动相流出重新连接色谱柱，设定适当流速，当流动相流出约约3030倍于色谱柱体积，并且检测器基线平衡后，倍于色谱柱体积，并且检测器基线平衡后，流动相更换完毕流动相更换完毕流动相的更换更换互溶流动相1 1将新流动相置于储液瓶中将新流动相置于储液瓶中2 2打开放空阀，启动泵使新的流动相从入空阀出打开放空阀，启动泵使新的流动相从入空阀出口流出口流出20ml20ml左右左右3 3关闭放空阀，然后将进样阀与色谱柱相连接端关闭放空阀，然

7、后将进样阀与色谱柱相连接端卸开，用小容器放置于过样阀的出口处卸开，用小容器放置于过样阀的出口处4 4启动恒流泵，让流动相从进样阀出口流出启动恒流泵，让流动相从进样阀出口流出10ml10ml左左右右流动相的更换换缓冲液流动相1 1用水更换色谱系统中缓冲液用水更换色谱系统中缓冲液2 2用水含水量量用水含水量量10%60%10%60%范围的溶剂冲洗色谱柱中范围的溶剂冲洗色谱柱中的盐的盐3 3用新流动相更换水或冲洗色谱柱溶剂用新流动相更换水或冲洗色谱柱溶剂进进样样装装置置停流进样装置六通阀进样装置自动进样器高效液相色谱检测器 紫外检测器紫外检测器 折光指数检测器折光指数检测器 电导检测器电导检测器 荧光检测器荧光检测器 蒸发激光检测器蒸发激光检测器可