

下载本文档
版权说明:本文档由用户提供并上传,收益归属内容提供方,若内容存在侵权,请进行举报或认领
文档简介
1、专题二微生物的培养与应用 知识点菌。为避免周围环境中微生物的污染,实验操作应在酒精灯火焰附近进2.1 微生物的实验室培养1. 培养基是人们按照微生物对营养物质的不同需求,配制出供其生长繁殖 的营养基质,是进行微生物培养的物质基础。2. 培养基按物理性质分为液体培养基(应用于工业或生活生产)、固体培养基(应用于微生物的分离和鉴定)和半固体培养基(常用于观察微生物的运动及菌种保藏等)。按成分分为合成培养基(用成分已知的化学物质配 制而成,成分种类比例明确,用于微生物的分离鉴定)和天然培养基(用 化学成分不明的天然物质配制而成,用于实际工业生产)。按用途分为选择培养基(加入某种化学物质,以抑制不需要
2、微生物生长,促进所需微生物 的生长)和鉴别培养基(根据微生物的特点,加入某种指示剂或化学药品, 来鉴别不同类别的微生物)。3. 培养基的化学成分包括:水、无机盐、碳源、氮源和生长因子等。碳源 包括C02 NaHCO 等无机碳源和糖类、石油、花生粉饼等有机碳源。异养 微生物只能利用有机碳源。 单质碳不能作为碳源。氮源包括 N2、NH3 N03- NH4 等无机氮源和蛋白质、氨基酸、尿素、牛肉膏、蛋白胨等有机氮源。只有固氮微生物才能利用 N24. 培养基还需满足 pH、特殊营养物质和氧气的要求。例:培养乳酸杆菌需 添加维生素;培养霉菌需将 pH 调至酸性;培养细菌需将 pH 调至中性或微 碱性;培
3、养厌氧型微生物需提供无氧的条件。5. 无菌操作技术包括:对实验操作的空间、操作者的衣着和手,进行清 洁和消毒。将用于微生物培养的器皿、接种用具和培养基等器具进行灭行。实验操作时应避免已经灭菌处理的材料用具与周围的物品相接触。6. 消毒与灭菌的区别是:消毒指使用较为温和的物理或化学方法仅杀死物体表面或内部一部分对人体有害的微生物(不包括芽抱和抱子),包括煮沸消毒法,巴氏消毒法(酒精、氯气、石炭酸)和紫外线消毒法。灭菌指使用强烈的理化因素杀死物体内外所有的微生物, 包括芽抱和抱子, 包括灼 烧灭菌、干热灭菌、高压蒸汽灭菌。7. 灭菌方法:接种环、接种针、试管口等使用灼烧灭菌法;玻璃器皿、 金属用具
4、等使用干热灭菌法,所用器械是干热灭菌箱;培养基、无菌水 等使用高压蒸汽灭菌法,所用器械是高压蒸汽灭菌锅;表面灭菌和空气 灭菌等使用紫外线灭菌法,所用器械是紫外灯 。8. 制作牛肉膏蛋白胨固体培养基(1)方法步骤:计算、称量、溶化、灭菌、倒平板。(2)倒平板操作的步骤包括:将灭过菌的培养皿放在酒精灯火焰旁的桌面上,右手拿装有培养基的锥形瓶,左手拔出棉塞。将锥形瓶的瓶口迅 速通过火焰(灼烧灭菌,防止瓶口的微生物污染培养基)。将培养皿打开一条稍大于瓶口的缝隙,再将锥形瓶中的培养基(约1020mL 倒入培养皿,立即盖上培养皿的皿盖。等待平板冷却凝固然后,将平板倒过来放置,使培养皿盖在下、皿底在上(目的
5、:使培养基表面的水分更好地挥发, 又可以防止皿盖上的水珠落入培养基,造成污染)。9. 倒平板时若不慎将培养基溅在皿盖与皿底上,则这个平板不能用来培养 微生物,原因是空气中的微生物会在皿盖与皿底上生长。10. 纯化大肠杆菌的原理是:用平板划线法和稀释涂布平板法接种,使聚集 在一起的微生物分散成单个细胞,从而能在培养基表面形成单个的菌落(生 态学上称种群),以达纯化菌种的目的。11. 平板划线操作时第一步以及每次划线之前都要灼烧接种环的原因是:前者避免接种环上可能存在的微生物污染培养物,后者杀死上次划线残留在 环上的菌种,使菌种逐渐变少以便得到单个菌落。在划线操作结束时,仍然需要灼烧接种环的原因是
6、及时杀死接种环上残留的菌种,避免细菌污染 环境和感染操作者。在灼烧接种环之后,要等其冷却后再进行划线的原因 是避免接种环温度太咼而杀死菌种。12. 涂布平板操作的步骤包括:将涂布器浸在盛有酒精的烧杯中。取少 量菌液,滴加到培养基表面。3将沾有少量酒精的涂布器在火焰上引燃,待酒精燃尽后,冷却810s。4用涂布器将菌液均匀地涂布在培养基表面。13. 菌种的保存:频繁使用,临时保存接种到固体斜面培养基,在4C下保存。长期保存菌种用甘油管藏的方法。2.2 土壤中分解尿素的细菌的分离与计数1. 尿素是重要的农业氮肥, 不能直接被植物吸收。 土壤中有一类细菌能合 成脲酶,将尿素分解成氨,被植物吸收利用。尿
7、素最初是从人的尿液中发 现的。2. 实验室中微生物筛选的原理是: 人为提供有利于目的菌株生长的条件(包括营养、温度、PH 等),同时抑制或阻止其他微生物生长。3. 在微生物学中,将允许特定种类的微生物生长,同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基,称作选择培养基。例如,培养基中不加入有机物 可以选择培养自养微生物;培养基中不加入氮元素,可以选择培养能固氮 的微生物;加入高浓度的食盐可选择培养金黄色葡萄球菌等。4. 测定微生物数量的常用方法有稀释涂布平板法和显微镜直接计数。5. 稀释涂布平板法常用来统计样品中活菌的数目。原理是:当样品的稀释 度足够高时,培养基表面生长的一个菌落,来源于样品稀释液
8、中的一个活 菌。统计平板上的菌落数,就能推测出样品中大约含有多少活菌。为了保 证结果准确,一般选择 3-5 个菌落数在 30300 的平板进行计数,并取平 均值。6. 统计的菌落数往往比活菌的实际数目低,原因是当两个或多个细胞连在 一起时,平板上看到的只是一个菌落,因此,统计结果一般用菌落数而不 是活菌数来表示。7. 设置对照的主要目的是排除实验组中非测试因素对实验结果的影响, 提 高实验结果的可信度。对照实验是指除了被测试的条件以外,其他条件都 相同的实验,其作用是比照试验组,排除任何其他可能原因的干扰,证明 确实是所测试的条件引起相应的结果。8. 实验设计包括实验方案,所需仪器、材料、用具
9、和药品,具体的实施步 骤以及时间安排等的综合考虑和安排。9. 土壤取样:铲去表层土,在距地表约38cm 的土壤层从富含有机物、潮湿、pH7 的土壤中取样。10. 样品的稀释程度将直接影响平板上生长的菌落数目。在实际操作中,通常选用一定稀释范围(细菌一般选用 104、105、106;放线菌一般选用 103、104、105;真菌一般选用 102、103、104)的样品液进行培养,以保证获 得菌落数在 30300 之间、适于计数的平板。11. 不同种类的微生物,往往需要不同的培养温度和培养时间。细菌 30-37C1-2 天;放线菌 25-28C5-7 天;霉菌 25-28 C 3-4 天。12. 每
10、隔 24 小时统计一次菌落数目, 选取菌落数目稳定时的记录作为结果,这样可以防止因培养时间不足而导致遗漏菌落的数目。一般来说,在一定 的培养条件下(相同的培养基、唯独及培养时间),同种微生物表现出稳定的菌落特征(形状、大小、隆起程度和颜色基本一致)13. 每克样品中的菌落数=(C/V)XM (C:某一稀释度下平板上生长的平均菌落数;V 涂布平板时所用的稀释液的体积(ml); M 代表稀释倍数)14. 在以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂,培养某种细菌后,女口果 PH 升高,指示剂变红,可初步鉴定该种细菌能分解尿素为氨。2.3 分解纤维素的微生物的分离1. 纤维素是一种由葡萄糖首尾相连而成
11、的高分子化合物,是地球上含量最 丰富的多糖类物质。棉花是自然界中纤维素含量最高的天然产物,木材、 作物秸秆等也富含纤维素。2. 纤维素酶是一种复合酶,一般认为它至少包括三种组分,即C1 酶、CX酶和葡萄糖苷酶,前两种酶使纤维素分解成纤维二糖,第三种酶将纤维二糖分解成葡萄糖,为微生物的生长提供营养。3. 当在含有纤维素的培养基中加入刚果红时, 它能与培养基中的纤维素形 成红色复合物。当纤维素被纤维素酶分解后,刚果红-纤维素的复合物就 无法形成,培养基中会出现以纤维素分解菌为中心的透明圈,根据是否产 生透明圈就可以来筛选纤维素分解菌,这种方法叫做刚果红染色法。4. 刚果红染色法筛选纤维素分解菌的原
12、理:刚果红(染料)可以与像纤维 素这样的多糖物质形成红色复合物,但并不和水解后的纤维二糖和葡萄糖 发生这种反应。5. 实验流程:土壤取样-选择培养(此步是否需要,应根据样品中目的菌 株数量的多少来确定)-梯度稀释将样品涂布到鉴别纤维素分解菌的培 养基上-挑选产生透明圈的菌落6. 为确定得到的是纤维素分解菌,需要进行发酵产纤维素酶的实验。纤维 素酶的测定方法,一般是对纤维素酶分解滤纸等纤维素后所产生的葡萄糖 进行定量的测定。7. 由于生物与环境的相互依存关系,在富含纤维素的环境中,纤维素分解 菌的含量相对提高,因此从这种土样中获得目的微生物的几率要高于普通 环境。8. 将滤纸埋在土壤中能使纤维素分解菌相对聚集,实际上是人工设置纤维 素分解菌生存的适宜环境。一般应将纸埋于深约 10cm 左右腐殖土壤中9. 刚果红染色法种类:一种是先培养微生物,再加入刚果红进行颜色反应; 另一种是在倒平板时就加入刚果红。前者的缺点是操作繁琐,加入刚果红 溶液会使菌落之间发生混杂;其优点是这样显示出的颜色反应基本上是纤维素分解菌的作用。方法二的优点是操作简便,不存在菌落混杂问题,缺 点是由于纤维素和琼脂、土豆汁中都含有淀粉类物质
温馨提示
- 1. 本站所有资源如无特殊说明,都需要本地电脑安装OFFICE2007和PDF阅读器。图纸软件为CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.压缩文件请下载最新的WinRAR软件解压。
- 2. 本站的文档不包含任何第三方提供的附件图纸等,如果需要附件,请联系上传者。文件的所有权益归上传用户所有。
- 3. 本站RAR压缩包中若带图纸,网页内容里面会有图纸预览,若没有图纸预览就没有图纸。
- 4. 未经权益所有人同意不得将文件中的内容挪作商业或盈利用途。
- 5. 人人文库网仅提供信息存储空间,仅对用户上传内容的表现方式做保护处理,对用户上传分享的文档内容本身不做任何修改或编辑,并不能对任何下载内容负责。
- 6. 下载文件中如有侵权或不适当内容,请与我们联系,我们立即纠正。
- 7. 本站不保证下载资源的准确性、安全性和完整性, 同时也不承担用户因使用这些下载资源对自己和他人造成任何形式的伤害或损失。
最新文档
- 教导主任个人工作总结6
- 行为礼仪规范
- 小学生自我安全保护教育
- 2024-2025学年高三核心突破(十一)(人文地理)(原卷)
- 防地震安全教育班会
- 2024年特许金融分析师考试难点解析试题及答案
- 解析考生真实反馈2024年特许金融分析师考试试题及答案
- 景观设计工作总结汇报
- 2024年特许金融分析师考试趋势试题及答案
- 2024年特许金融分析师考试案例讨论题试题及答案
- 2025年矿灯和自救器管理工职业技能鉴定参考试指导题库500题(含答案)
- 2025年网格员考试题及答案湖北
- 2025年博士思政面试题及答案
- 2025年上半年夏秋季山东省菏泽单县事业单位招聘征集普通高等院校本科毕业生29人入伍重点基础提升(共500题)附带答案详解-1
- 2025年安徽汽车职业技术学院单招综合素质考试题库含答案
- 小学生羽毛球课课件图片
- 2024年广东省广州市中考英语试题(解析版)
- 2024年铁岭卫生职业学院高职单招语文历年参考题库含答案解析
- 2024年哈尔滨应用职业技术学院高职单招职业技能测验历年参考题库(频考版)含答案解析
- 建筑消防设施维修保养采购申请
- 2024年04月四川国家开发银行四川分行春季实习生招考笔试历年参考题库附带答案详解
评论
0/150
提交评论