叶绿体色素的提取分离理化质和定量测定ppt课件

1、 叶绿体色素的提取、分别、叶绿体色素的提取、分别、 理化性质和定量测定理化性质和定量测定刘洪庆刘洪庆单单 位：位： 植物生理学教研室植物生理学教研室一、实验目的一、实验目的 掌握叶绿素的理化性质及其定量测定方法，加掌握叶绿素的理化性质及其定量测定方法，加深学生对光合色素的理性、感性认识。深学生对光合色素的理性、感性认识。熟练掌握分光光度计的运用原理及其方法熟练掌握分光光度计的运用原理及其方法二、实验原理二、实验原理1. 1. 叶绿体色素提取、分别及理化性质叶绿体色素提取、分别及理化性质提取：叶绿体色素不易溶于水而溶于有机溶剂特性提取：叶绿体色素不易溶于水而溶于有机溶剂特性 -丙酮等有机溶剂提取

2、。丙酮等有机溶剂提取。色素分别：纸层析法分别。色素分别：纸层析法分别。荧光景象：察看荧光。荧光景象：察看荧光。取代反响：取代反响： 叶绿素中镁可被叶绿素中镁可被H+H+取代而构成褐色去镁叶绿素。取代而构成褐色去镁叶绿素。 去镁叶绿素遇铜那么成为铜代叶绿素。去镁叶绿素遇铜那么成为铜代叶绿素。皂化反响：皂化反响： 叶绿素可与碱起皂化反响而构成醇甲醇和叶绿叶绿素可与碱起皂化反响而构成醇甲醇和叶绿醇和叶绿酸的盐，产生的盐能溶于水醇和叶绿酸的盐，产生的盐能溶于水-分开叶绿素分开叶绿素与类胡萝卜素。与类胡萝卜素。2. 2. 定量测定定量测定n根据叶绿体色素提取液对可见光谱的吸收，利用分根据叶绿体色素提取液

3、对可见光谱的吸收，利用分光光度计在某一特定波长下测定其光密度，即可用光光度计在某一特定波长下测定其光密度，即可用公式计算出提取液中各色素的含量。公式计算出提取液中各色素的含量。n Ca=12.72D663 - 2.59D645 Ca=12.72D663 - 2.59D645 1 1 n Cb=22.88D645 - 4.67D663 Cb=22.88D645 - 4.67D663 2 2n 将将CaCa与与CbCb相加即得叶绿素总量相加即得叶绿素总量CTCT：n CT=Ca+Cb=20.2D645+8.05D663 CT=Ca+Cb=20.2D645+8.05D6633 3n 或：或：n CT

4、=(D652 CT=(D6521000)/34.5 (4)1000)/34.5 (4)三、实验资料三、实验资料n新颖的菠菜新颖的菠菜四、四、 实验步骤实验步骤1. 提取叶绿素提取叶绿素2纸层析分别景象察看纸层析分别景象察看3叶绿素荧光景象察看叶绿素荧光景象察看4H+和和Cu2+对叶绿素对叶绿素 中中Mg2+的取代作用的取代作用5皂化反响景象察看皂化反响景象察看绿黄色素分层景象绿黄色素分层景象五、定量测定n1定量用叶绿素提取液制备n2分光光度计测定n3实验数据及其处置分光光度计测定分光光度计测定六、实验结果察看及计算n1实验结果察看描画n n2计算组织中叶绿体色素含量n 用mg/g鲜重或干重表示n 公式n 叶 绿 素 的 浓 度 （ C）提 取 液 体 积 稀 释 倍 数样 品 鲜 重 （ 或 干 重 ）叶绿体色素含量=七、思索题n1叶绿素a、b在蓝光区也有吸收峰，能否用这一吸收峰波出息展叶绿素a、b的定量分析？为什么？n2用不含水的有机溶剂如无