动物细胞融合wose

1、动物细胞融合和单克隆抗体动物细胞融合和单克隆抗体学习目标 了解细胞融合的原理、过程和意义了解细胞融合的原理、过程和意义 理解单克隆抗体制备的过程和应用理解单克隆抗体制备的过程和应用重点难点重点难点1.1.学习重点：学习重点： 单克隆抗体的制备和应用单克隆抗体的制备和应用2.2.学习难点：学习难点： 单克隆抗体的制备过程单克隆抗体的制备过程 温故而知新温故而知新植物细胞杂交植物细胞杂交（马铃薯番茄）（马铃薯番茄）融合融合的原的原生质生质体体ABAB再再生生出出细细胞胞壁壁植物细胞的融合植物细胞的融合杂杂种种细细胞胞AB杂杂种种植植株株脱脱分分化化愈愈伤伤组组织织再再分分化化植物组织培养植物组织培

2、养原生质体原生质体B原生质体原生质体A去去 壁壁去去 壁壁人人工工诱诱导导植物细胞植物细胞A植物细胞植物细胞B三、动物细胞融合三、动物细胞融合1.1.概念：概念： 动物细胞融合也称细胞杂交，是指动物细胞融合也称细胞杂交，是指两个或两个或多个多个动物细胞结合形成动物细胞结合形成一个一个细胞的过程。细胞的过程。 融合后形成的融合后形成的单核细胞单核细胞，称为杂交细胞。，称为杂交细胞。2 2、基本原理：、基本原理：细胞膜的流动性细胞膜的流动性 (植物原生质体融合植物原生质体融合)物理法：物理法：化学法：化学法：生物法：生物法： 灭活的病毒灭活的病毒 例如：仙台病毒例如：仙台病毒3、诱导方式、诱导方式

3、灭活的病毒颗粒黏附于细胞表面灭活的病毒颗粒黏附于细胞表面细胞膜被病毒颗粒穿通细胞膜被病毒颗粒穿通细胞膜连接细胞膜连接细胞融合，形成杂种细胞细胞融合，形成杂种细胞（细胞膜具有一定的流动性）（细胞膜具有一定的流动性）生物法：生物法： 灭活的病毒灭活的病毒（丧失感染性、保留抗原结构）（丧失感染性、保留抗原结构）. .过程：过程：细胞膜的细胞膜的流动性流动性和和植物细胞植物细胞全能性全能性细胞膜细胞膜的流动的流动性性抗体由什么细胞产生？抗体由什么细胞产生？其化学本质是什么？其化学本质是什么？主要分布在哪里？主要分布在哪里？B B淋巴细胞受抗原刺激后，可以产生特异性抗体。淋巴细胞受抗原刺激后，可以产生特

4、异性抗体。动物在免疫反应过程中，体内产生特异性抗体种类可达百动物在免疫反应过程中，体内产生特异性抗体种类可达百万种以上，每种抗体对特定的抗原具有特异性免疫作用。万种以上，每种抗体对特定的抗原具有特异性免疫作用。但但每一个淋巴细胞只分泌一种特异性抗体每一个淋巴细胞只分泌一种特异性抗体。、在体外，、在体外，一个淋巴细胞是不可能无限增殖的。一个淋巴细胞是不可能无限增殖的。从从血血清清中中分分离离抗抗体体该方法制备抗体的特点：该方法制备抗体的特点： 产量低、纯度低，且抗体的特异性差。产量低、纯度低，且抗体的特异性差。多多种种效效应应B细细胞胞动动物物体体内内多多种种抗抗体体抗抗原原 自主阅读自主阅读P

5、52：传统的抗体的生产方法及缺陷是什么？：传统的抗体的生产方法及缺陷是什么？、单克隆抗体、单克隆抗体McAb（概念）（概念） 由单个由单个B B淋巴细胞经过淋巴细胞经过无性繁殖无性繁殖（克隆），形（克隆），形成基因型相同的细胞群，这一细胞群所产生的成基因型相同的细胞群，这一细胞群所产生的化学化学性质单一、特异性强的抗体性质单一、特异性强的抗体称为单克隆抗体。称为单克隆抗体。 那么，如何那么，如何大量获得化学性质单一、特异大量获得化学性质单一、特异性强的抗体性强的抗体？（即？（即单克隆抗体单克隆抗体）二、单克隆抗体制备二、单克隆抗体制备一个一个B B淋巴细胞只分泌一种特异性抗体淋巴细胞只分泌一种

6、特异性抗体骨髓瘤细胞（癌细胞）能无限增殖骨髓瘤细胞（癌细胞）能无限增殖杂种细胞杂种细胞动物细胞培养技术动物细胞培养技术、设计方案：、设计方案：动物细胞融合动物细胞融合单克隆单克隆抗体抗体既能产生特异性抗既能产生特异性抗体，又能大量繁殖体，又能大量繁殖单克隆抗体的制备思考思考讨论讨论1 、注射抗原的目的是什么、注射抗原的目的是什么?2 2、单克隆抗体制备时需选哪两种细胞融合？、单克隆抗体制备时需选哪两种细胞融合？ 诱导融合方法？诱导融合方法？3 3、考虑细胞两两融合会有几种融合结果？、考虑细胞两两融合会有几种融合结果？ 4 4、如何筛选出杂交瘤细胞？杂交瘤细胞有哪些特点？、如何筛选出杂交瘤细胞？

7、杂交瘤细胞有哪些特点？5 5、选出的杂交瘤细胞都能产生、选出的杂交瘤细胞都能产生所需的所需的特异性抗体吗？特异性抗体吗？6 6、如何、如何筛选出产生筛选出产生所需的所需的特异性抗体的杂交瘤细胞？特异性抗体的杂交瘤细胞？7 7、两次筛选的目的各是？、两次筛选的目的各是？8 8、如何培养杂交瘤细胞得到大量的单克隆抗体？、如何培养杂交瘤细胞得到大量的单克隆抗体？ 两种方法的优点？两种方法的优点？9、此过程运用到哪些生物学技术？、此过程运用到哪些生物学技术？动物细胞融动物细胞融合技术合技术BB 、B瘤瘤 、瘤瘤、瘤瘤 、B 、瘤瘤只有杂交瘤只有杂交瘤细胞才能活细胞才能活动物细胞培养动物细胞培养3.3.

8、制备过程制备过程获得产生相应抗体的获得产生相应抗体的B淋巴细胞淋巴细胞杂交瘤细胞：杂交瘤细胞：即能迅速大量增即能迅速大量增殖，殖，又能产生专又能产生专一的抗体一的抗体能产生所需特定抗体能产生所需特定抗体的杂交瘤细胞的杂交瘤细胞培养条件简单，培养条件简单，无需配置培养液无需配置培养液能在短时间内产能在短时间内产生大量的单克隆生大量的单克隆抗体抗体能产生特定所需抗能产生特定所需抗体的杂交瘤细胞体的杂交瘤细胞杂交瘤细胞杂交瘤细胞请用箭头把以下代表单克隆抗体制备过程步骤的请用箭头把以下代表单克隆抗体制备过程步骤的图解的字母按正确顺序连接起来。顺序是？图解的字母按正确顺序连接起来。顺序是？ 4 4、单克

9、隆抗体的特点和应用、单克隆抗体的特点和应用与常规抗体相比，单克隆抗体与常规抗体相比，单克隆抗体特异性强，特异性强，灵敏度高，产量高灵敏度高，产量高。应用：应用：特点：特点：可用于作为诊断试剂：有准确，高效，快速的优点可用于作为诊断试剂：有准确，高效，快速的优点可用于疾病治疗可用于疾病治疗可用于运载药物可用于运载药物“生物导弹生物导弹”单克隆抗体药物单克隆抗体药物1 1、科学家用小鼠骨髓瘤细胞与某种细胞融合，、科学家用小鼠骨髓瘤细胞与某种细胞融合，得到杂交细胞，经培养可产生大量的单克隆得到杂交细胞，经培养可产生大量的单克隆抗体，与骨髓疤细胞融合的是（抗体，与骨髓疤细胞融合的是（ ） A.A.经过

10、免疫的经过免疫的B B淋巴细胞淋巴细胞 B.B.没经过免疫的没经过免疫的T T淋巴细胞淋巴细胞C.C.经过免疫的经过免疫的T T淋巴细胞淋巴细胞 D.D.没经过免疫的淋巴细胞没经过免疫的淋巴细胞A2.动物细胞融合的目的中最重要的是动物细胞融合的目的中最重要的是-（ ）A.克服远缘杂交不亲和克服远缘杂交不亲和 B. 制备单克隆抗体制备单克隆抗体 C.培育新品种培育新品种 D.生产杂种细胞生产杂种细胞3.动物细胞融合与植物体细胞杂交的比较中，正确的是动物细胞融合与植物体细胞杂交的比较中，正确的是（ ）诱导融合的方法完全相同诱导融合的方法完全相同 B.所用的技术手段基本相同所用的技术手段基本相同 C. 所采用的原理完全相同所采用的原理完全相同 D. 都能形成杂种细胞都能形成杂种细胞 AD4. 单克隆抗体制备过程中培育的杂交细胞是单克隆抗体制备过程中培育的杂交细胞是-（ ）A.由小鼠