微生物的实验室培养与应用上课

1、课题1 微生物的实验室培养1.提供营养和条件2.防止污染营养营养物质物质功功 能能主要来源主要来源培养微生物培养微生物的类型的类型碳源碳源提供提供 元元素的物质素的物质无机无机碳源：碳源：有机有机碳源：碳源：氮源氮源提供提供 元元素的物质素的物质无机无机氮源：氮源：有机有机氮源：氮源：COCO2 2、COCO3 32 2- -、HCOHCO3 3- -等等牛肉膏、蛋白胨等牛肉膏、蛋白胨等N N2 2、NHNH4 4、NONO3 3- -等等牛肉膏、蛋白胨、牛肉膏、蛋白胨、尿素等尿素等碳碳氮氮自养微生物自养微生物异养微生物异养微生物自养微生物自养微生物异养微生物异养微生物一一. .培养基：培养基

2、：微生物生存的环境和营养物质微生物生存的环境和营养物质1.1.基本成分：基本成分：思考：微生物思考：微生物“吃吃”什么什么？碳源、氮源、水、无机盐碳源、氮源、水、无机盐一一. .培养基：培养基：微生物生存的环境和营养物质微生物生存的环境和营养物质1.1.基本成分：基本成分：碳源、氮源、水、无机盐碳源、氮源、水、无机盐2.2.特殊营养特殊营养：某些氨基酸、维生素、碱基等某些氨基酸、维生素、碱基等（牛肉膏、蛋白胨中含有）（牛肉膏、蛋白胨中含有）3.pH3.pH、氧气、氧气的需求；的需求；4.4.种类种类：固体培养基固体培养基液体培养基液体培养基有有无无 凝固剂凝固剂琼脂琼脂按物理性质可分成按物理性

3、质可分成1.1.牛肉膏提供牛肉膏提供 磷酸盐、维生素等磷酸盐、维生素等营养物质；营养物质；2.2.蛋白胨提供蛋白胨提供 维生素等维生素等营养物质；营养物质；3.3.以上配方配制的是以上配方配制的是 （物理性质）的培养基。（物理性质）的培养基。4.4.牛肉膏蛋白胨培养基培养的是牛肉膏蛋白胨培养基培养的是 型的微生物；型的微生物；1000ml1000ml牛肉牛肉膏膏蛋白蛋白胨胨培养基的配方培养基的配方H2O 定容至定容至1000mlNaCl 5g蛋白胨蛋白胨 10g牛肉膏牛肉膏 5g琼脂琼脂20.0g异养异养碳源、氮源、碳源、氮源、碳源、氮源、碳源、氮源、固体固体实例分析实例分析耐高温需保持干燥的

4、耐高温需保持干燥的 物品，物品，160170 12小时小时接种环、接种针等接种环、接种针等 金属用具金属用具7075、30min 80、15min100、56min消毒消毒灭菌灭菌定义定义方法方法较为较为温和温和理化方法，理化方法，杀死杀死部分有害菌体部分有害菌体（不不包括芽孢、孢子）包括芽孢、孢子）强烈强烈的理化方法，的理化方法，杀死杀死所有微生物所有微生物（包括（包括芽孢、孢子芽孢、孢子）煮沸消毒法煮沸消毒法巴氏消毒法巴氏消毒法化学药剂化学药剂紫外线紫外线灼烧灭菌灼烧灭菌干热灭菌干热灭菌酒精、氯气、石炭酸等酒精、氯气、石炭酸等高压蒸汽灭菌高压蒸汽灭菌培养基，培养基，100KPa、121、1

5、530min二二. .无菌技术：无菌技术：防止外来杂菌的污染防止外来杂菌的污染1.1.消毒与灭菌：消毒与灭菌：请你判断以下材料或用具是否需要消毒或请你判断以下材料或用具是否需要消毒或灭菌。灭菌。（1 1）培养细菌用的培养基与培养皿）培养细菌用的培养基与培养皿（2 2）玻棒、试管、烧瓶和吸管）玻棒、试管、烧瓶和吸管（3 3）实验操作者的双手）实验操作者的双手（4 4）接种环、接种针）接种环、接种针（5 5）外植体）外植体灭菌灭菌灭菌灭菌消毒消毒超净工作台超净工作台消毒消毒灭菌灭菌一一. .培养基：培养基：1.1.基本成分：基本成分： 、 、 、 。2.2.除上述基本成分，还要满足微生物对除上述基

6、本成分，还要满足微生物对 、 和和 的要求。的要求。3.3.培养基的种类培养基的种类 （含琼脂）（含琼脂） （不含琼脂）（不含琼脂）二二. .无菌技术：无菌技术：消毒消毒灭菌灭菌作用强度作用强度消灭微生物的数量消灭微生物的数量芽孢孢子能否消灭芽孢孢子能否消灭常用的方法常用的方法水水氮源氮源部分部分温和温和碳源碳源无机盐无机盐pHpH氧气氧气特殊营养物质（生长因子）特殊营养物质（生长因子）固体培养基固体培养基液体培养基液体培养基强烈强烈全部全部不能不能能能煮沸消毒法煮沸消毒法巴氏消毒法巴氏消毒法化学药剂化学药剂紫外线紫外线灼烧灭菌灼烧灭菌干热灭菌干热灭菌 . .高压蒸汽灭菌高压蒸汽灭菌小小 结结

7、单个单个或少数菌体或少数菌体2.2.特征：特征：大小、形状、光泽度、颜色、透明度等。大小、形状、光泽度、颜色、透明度等。1.1.定义：定义：三三. .菌落菌落固体固体培养基上培养基上大量繁殖大量繁殖子细胞群体子细胞群体四四. .大肠杆菌的纯化培养大肠杆菌的纯化培养：制备牛肉膏蛋白胨固体培养基制备牛肉膏蛋白胨固体培养基分散成单个细胞分散成单个细胞, ,形成单个菌落形成单个菌落操作步骤：操作步骤： 计算、称量、溶化、灭菌、计算、称量、溶化、灭菌、倒平板倒平板平板冷凝后，为什么要将平板倒置？平板冷凝后，为什么要将平板倒置？平板冷凝后，皿盖上会凝结水珠，凝固后平板冷凝后，皿盖上会凝结水珠，凝固后的培养

8、基表面的湿度也比较高，将平板倒的培养基表面的湿度也比较高，将平板倒置，既可以使培养基表面的水分更好地挥置，既可以使培养基表面的水分更好地挥发，又可以防止皿盖上的水珠落入培养基，发，又可以防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染。造成污染。四四. .大肠杆菌的纯化培养大肠杆菌的纯化培养：制备牛肉膏蛋白胨固体培养基制备牛肉膏蛋白胨固体培养基纯化大肠杆菌：纯化大肠杆菌：平板划线法：平板划线法：菌种菌种划划3 3个平板个平板1 1个不划线个不划线1.1.接种：接种：接种环接种环防止划破培养基防止划破培养基（重复实验）（重复实验）（空白对照）（空白对照）6 6支试管，分别加入支试管，分别加入9ml9ml无菌

9、水无菌水1ml1011ml1021ml1031ml1041ml1051ml106稀释涂布平板法稀释涂布平板法：a.a.梯度稀释菌液梯度稀释菌液：菌液菌液微量微量 移移液器液器稀释涂布平板法稀释涂布平板法：a.a.梯度稀释菌液梯度稀释菌液：b.b.涂布平板涂布平板：不超过不超过0.1ml0.1ml各梯度分别涂布各梯度分别涂布3个平板个平板1 1个不涂布作空白对照个不涂布作空白对照滴滴灼灼试试涂涂稀稀释释10103 3倍倍稀稀释释10104 4倍倍稀稀释释10105 5倍倍合作探究合作探究1.1.锥形瓶的瓶口通过火焰的目的是什么？锥形瓶的瓶口通过火焰的目的是什么？2.2.取菌种前灼烧接种环的目的是

10、什么？取菌种前灼烧接种环的目的是什么？ 3.3.除第一次划线外，其余划线前都要灼烧接种环？除第一次划线外，其余划线前都要灼烧接种环？消灭瓶口的杂菌，防止杂菌感染培养基。消灭瓶口的杂菌，防止杂菌感染培养基。消灭接种环上的微生物消灭接种环上的微生物目的是消灭接种环上残留菌种目的是消灭接种环上残留菌种4.4.取菌种和划线前都要求接种环冷却后进行，目的是？取菌种和划线前都要求接种环冷却后进行，目的是？5.5.在第在第1 1次划线后都从上次划线末端开始的目的是？次划线后都从上次划线末端开始的目的是？防止高温杀死菌种防止高温杀死菌种因划线后线条末端细菌的数目比线条起始处要少，因划线后线条末端细菌的数目比线

11、条起始处要少，每次从上一次划线的末端开始，能使细菌的数目随每次从上一次划线的末端开始，能使细菌的数目随着划线次数的增加而逐步减少，这样最终就能得到着划线次数的增加而逐步减少，这样最终就能得到由单个细菌繁殖而来的菌落。由单个细菌繁殖而来的菌落。合作探究合作探究四四. .大肠杆菌的纯化培养大肠杆菌的纯化培养：制备培养基制备培养基： （培养基的名称）（培养基的名称） 纯化大肠杆菌：纯化大肠杆菌：1.1.接种的方法：接种的方法： 、 。平板划线法平板划线法稀释涂布平板法稀释涂布平板法2.2.培养：培养：将将接种后接种后的培养基和一个的培养基和一个未接种未接种的培养基的培养基放入放入3737恒温箱中培养

12、恒温箱中培养12h12h24h24h后，后，观察并记录观察并记录五五. .菌种的保藏：菌种的保藏：1.1.临时保藏：临时保藏：试管固体斜面培养基上试管固体斜面培养基上442.2.长期保存：长期保存：菌种易被污染、变异菌种易被污染、变异甘油管藏甘油管藏1ml1ml甘油甘油1ml1ml菌液菌液 2020牛肉膏蛋白胨固体培养基牛肉膏蛋白胨固体培养基一、如何从土壤中分离出能分解尿素的细菌？一、如何从土壤中分离出能分解尿素的细菌？1.1.利用以利用以 作为唯一作为唯一 源的源的 （类型）（类型）培养基培养基培养土壤中的微生物。培养土壤中的微生物。2.2.纯化培养，可选择的方法：纯化培养，可选择的方法：

13、、 。3.3.鉴定培养：用到加入鉴定培养：用到加入 试剂的试剂的 （类型）培养基。（类型）培养基。二、测定微生物数量的方法：二、测定微生物数量的方法： 、 。1.1.稀释涂布平板法也叫做稀释涂布平板法也叫做 。 2.为什么统计菌落数可以代表原微生物的数量？这个数据是否精确？为什么统计菌落数可以代表原微生物的数量？这个数据是否精确？菌落是由原来的单个微生物繁殖而成的。菌落是由原来的单个微生物繁殖而成的。3.平板划线法可以用于统计微生物数量吗？平板划线法可以用于统计微生物数量吗？菌落数一般少于原活菌数菌落数一般少于原活菌数不能不能4.显微镜直接计数法能否统计活菌数？显微镜直接计数法能否统计活菌数？

14、一般不行，但是血球计数板计数法计算酵母菌数量时，一般不行，但是血球计数板计数法计算酵母菌数量时，用用台盼兰染色剂台盼兰染色剂可以区分出死亡的酵母菌。可以区分出死亡的酵母菌。三、设置对照试验的目的：三、设置对照试验的目的：排除非测试因素对实验结果的影响，提高结果的可信度。排除非测试因素对实验结果的影响，提高结果的可信度。尿素尿素氮氮选择选择稀释涂布平板法稀释涂布平板法平板划线法平板划线法酚红指示剂酚红指示剂鉴别鉴别显微镜直接计数法显微镜直接计数法稀释涂布平板法稀释涂布平板法活菌计数法活菌计数法一、如何分离出能分解纤维素的细菌？一、如何分离出能分解纤维素的细菌？1.1.选择培养：选择培养： 利用以利用以 作为唯一作为唯一 源的源的 （类型）（类型）培养基培养基 培养土壤中的微生物。培养土壤中的微生物。 这一步的目