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文档简介
1、实验六 丝状真菌生长的测定一、 实验目的学习和掌握丝状真菌生长测定的三种方法。二、 实验原理通过三种测定方法观察丝状真菌的生长,验证丝状真菌顶端延长生长 的机理。蜜环菌菌丝顶端区域,顶端原丫 质膜凹入部位,即为泡粪与原牛 质膜的融合细胞质的泡囊起源r高尔基体,高尔基体、核.内质网一起存在丁亚顶端部位。1970年,Grove等人提出了菌丝顶端生长的泡囊假说:一.菌丝顶端生长的泡囊学说卵菌纲接合菌纲何隔真菌内尿网-3菌丝顶端泡囊排列的上 耍类羽二.菌丝顶端生长的机制泡囊作用的三垂性:1.运输细胞壁溶解酚去破坏原來壁 组成之间的键;2.运输新的壁物质,并在壁合成酚 的作用下并入细胞壁中,增加了 壁的
2、面积;3.在生长期间增加了原生质膜的农 面积顶端生长被认为是细胞壁水解、壁 的合戊和壁的膨压Z间的动力平衡三、顶端生长的驱动力对细胞质流、微管和电位势梯度的研究都支持和解释了泡囊移动现彖。第一,细胞质的流动驱使和带动泡囊移向顶端;笫:,泡囊借助丁顶端和亚顶端区域之间水的电位势梯度而驱动:第三,在菌丝细胞中,微管与蔼丝生长方向 卜行,内此,可能微管运输泡喪 到菌丝顶端,如果菌丝顶端细胞有顶体的话,町能先运输到顶体部位,然后 由顶体直接运动这些泡囊到质膜。:沱色彩忆倉坊 谜的涪烷聯/% SS的合成歸空2 Z皿胞5!生长的序怠囚A佥席豆虫土熔毎 P 鸽也与生“氏之合B.BJRfflaXWOlKKff
3、i C-etrs&DKiaJQMAxmiD.M*分血.E _个t?s一、直线生长的测定直线生长的测定目前主要应用下述三种方法:(一)菌丝生长的测定这-方法是将待测菌株点于培养基平板的中心,生长 i 泄时间后,将平板置 于显微镜台上,同时校对所用显微镜的目镜测傲尺,并计算每格的长度。在 菌落边缘选择单根I對丝的顶端在低倍镜下聚焦。然后将口镜测微尺与菌丝平行, 并选择菌丝丿始出现侧枝的部位与冃镜测微尺上的条划线亟合,这个点即为 “参照心:”O每隔一定时间测量一次菌丝工长的长度,观察数次后,根据时间 和顶端延长生长的长度划一条生长曲线,并求出生长速度(毫米/小时)。图5-14菌丝生长测定的示
4、意图(二)菌落生长速度的测定测怎菌落的半径或直径來表示生长的快慢足比较简便的方法。怎期测量一个 歯落,能够看出貞菌生长的过程和变化。肉为它不是一种很准确的方法,日询常 用来作为初步测定。常用的方法是将待测菌株点种于培养基平板上,每隔淀时间测星菌落的半 径或厲径。如以时间和生氏量作曲线,在泄限度内生K量与时间成氏线关系。(三)直线生长速率的测定这一方法使用并不广泛。它是在“U”形培养管中进行的。培养管长40厘 米,内径约1.3厘米,在两端5厘米处弯成45角,如图所示。在培养管中加入适星的溶化的琼脂培养基,达到培养管白径的半,两端加 棉塞后灭菌。凝I古I后从端接种,然后按时测定生长距离,并计算生长
5、率。图5-15 U形培养管示意图二、测定菌丝干重法菌体干重法:液体培养貞菌的生氏期完成后,过滤菌丝、洗涤、离心、烘 、称量I連。这种测定法比较直接而町靠,但仅适用于菌体浓度较高的样品, 而且要求样品中不含有菌体以外的其它干物质。菌体湿重法:也可以來用测定菌丝湿巫法,把烘干步骤省去。但无论测定 干亟或湿大都用于工业发酵过程的检测。真菌的生长还可用间接的方法测怎,如全氮杲和核糖咳酸的分析,一般干 曲菌丝体含氮屋是4.5-8.5%,核糖核酸是20-4.0%。另外,还町以分析培养基 中糖的消耗童、氧的吸收量等作为测眾生K量的指标。这些方法大都是工业生 产中所采用的方法。四、实验内容:菌丝顶端延长生长的
6、测定1.配制PDA培养基,商压灭菌备用2.制备PDA培养基平板,在平板中心点接黑根密,于28C培养15h左右。3.用显微镜的镜台测微尺來校对冃镜测微尺。镜台测微尺100格共Klmm,每 格为10pm,标定H镜测微尺上每小格表示多少pm。4.将黑根帝板放登显微镜台I:,在菌落边缘选择单.根菌丝边缘,在低倍镜 下聚焦。5.将口镜测微尺与菌丝平行,并选择菌丝开始出现侧枝的位置与日镜测微尺上 的一条划线重合,这个点即为“参照点”。6.每隔一定时间(分钟)测量-次菌的生长K度。7.观察/丄次后,根据时间和延氏生长的氏度绘制延心生长曲线,并求出生K速 度(mm/h):LX10-3X60S=厂 =mm/hS:速度L:长度(pm)t:时间(min)五、实验报告I:述方法要求严格按操作规程及时观察,认真记录,在报告中分别绘制心长曲线, 计算出生长速度。六、思考题1.丝状真菌牛长量的测定与细菌、酵母菌单
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