实验七_稀释平板计数法及土壤中真菌的分离纯化)

1、实验七实验七 稀释平板计数法及土壤中真稀释平板计数法及土壤中真菌的分离纯化菌的分离纯化一、实验目的一、实验目的l掌握活菌计数的基本原理及方法l掌握从样品中分离目的微生物的原理及方法二、实验原理二、实验原理-稀释平皿计数法稀释平皿计数法l将微生物细胞充分稀释到单个分散，把这些单个分散的细胞均匀涂布在平皿培养基上，培养后长出的菌落肉眼可见，每个菌落都由原液中单个细胞发育而来，计算菌落数，通过公式可以求出单位原样品中的活菌数。l每ml(g)样品中的活菌数=（每皿菌落数平均值/取样体积）稀释倍数二、实验原理二、实验原理-土壤中真菌的分离纯化土壤中真菌的分离纯化l马丁孟加拉红-链霉素培养基马丁培养基孟加

2、拉红链霉素三、实验器材三、实验器材（一）培养基1、牛肉膏蛋白胨培养基2、马丁孟加拉红-链霉素培养基（二）其他1、无菌培养皿2、无菌吸管3、无菌水（三）仪器1、超净工作台2、玻璃刮铲3、酒精棉球四、实验步骤四、实验步骤-稀释平板计数法稀释平板计数法1 1、熔化培养基、熔化培养基2 2、倒平皿、倒平皿3 3、梯度稀释法稀释原菌样品、梯度稀释法稀释原菌样品四、实验步骤四、实验步骤4 4、涂平皿：、涂平皿： 选取选取1/101/106 6,1/10,1/107 7,1/10,1/108 8三个稀释度计数，每皿取三个稀释度计数，每皿取菌液菌液0.1ml0.1ml，用玻璃刮铲涂布均匀，每个稀释度做一，用玻

3、璃刮铲涂布均匀，每个稀释度做一个重复。个重复。5 5、3737倒置培养倒置培养2 2天天6 6、计数：、计数：每每ml原菌样品中微生物的活细胞数（菌落形成数，原菌样品中微生物的活细胞数（菌落形成数，CFU（同一稀释度平板上菌落平均数（同一稀释度平板上菌落平均数稀释倍数）稀释倍数）/原菌样品体积原菌样品体积（ml）菌落计数规则：菌落计数规则：（一）选择平均菌落数在（一）选择平均菌落数在30300间的平板间的平板1、只有一个稀释度符合，以该稀释度的、只有一个稀释度符合，以该稀释度的平均菌落数平均菌落数乘以稀释倍数报告；乘以稀释倍数报告；2、有两个稀释度符合，取决于二者比值（高稀释度的菌落数除以低稀

4、释、有两个稀释度符合，取决于二者比值（高稀释度的菌落数除以低稀释度的菌落数的值）：度的菌落数的值）： 1）若）若0.5比值比值2，以两稀释度的菌落数乘稀释倍数所得的值的均值报，以两稀释度的菌落数乘稀释倍数所得的值的均值报告。告。 2）若）若2比值或比值比值或比值 0.5，则取其中较少的菌落总数进行报告。，则取其中较少的菌落总数进行报告。（二）所有菌落数均不在（二）所有菌落数均不在30300间间以最接近以最接近30或或300的平均菌落数乘稀释倍数的平均菌落数乘稀释倍数1、若所有稀释度的菌落平均数均大于、若所有稀释度的菌落平均数均大于300，则按稀释倍数最高的平均菌，则按稀释倍数最高的平均菌落数乘

5、以稀释倍数报告；落数乘以稀释倍数报告；2、若所有稀释度的菌落平均数均小于、若所有稀释度的菌落平均数均小于30，则按稀释倍数最低的平均菌落，则按稀释倍数最低的平均菌落数乘以稀释倍数报告；数乘以稀释倍数报告；四、实验步骤四、实验步骤-从土壤里分离真菌从土壤里分离真菌1 1、熔化培养基、熔化培养基2 2、倒平皿、倒平皿3 3、捻碎土样，将土样溶解在、捻碎土样，将土样溶解在90ml90ml无菌水三角瓶中无菌水三角瓶中4 4、梯度稀释法稀释土样、梯度稀释法稀释土样10g90ml10-110-210-310-410-54 4、涂平皿：、涂平皿： 每个稀释度均需要涂布平皿，每皿取菌液每个稀释度均需要涂布平皿，每皿取菌液0.1ml0.1ml，用玻璃刮铲涂布均匀。用玻璃刮铲涂布均匀。5 5、28倒置培养倒置培养37天天6 6、观察并描述真菌菌落特征、观察并描述真菌菌落特征五、实验结果及分析五、实验结果及分析l稀释平皿计数法：稀释平皿计数法：稀释倍数106107108菌落数每每ml原菌样品中微生物的活细胞数（菌落形成数，原菌样品中微生物的活细