实验二通课-2013-4ppt课件

1、一、抗酸染色一、抗酸染色 (2.5(2.5学时学时) ) 每人一张玻片。每人一张玻片。二、肠道致病菌的分离培养二、肠道致病菌的分离培养 (1.5(1.5学时学时) ) SS SS培养基：培养基：8 8个个 粪便标本：粪便标本：8 8管管 粪便标本：大肠杆菌和乙型副粪便标本：大肠杆菌和乙型副伤寒沙门菌伤寒沙门菌第二次实验课内容第二次实验课内容3 3个）个）三、细菌的分布与消毒三、细菌的分布与消毒 (1学时学时) 手指消毒：酒精、碘酒、新洁尔灭手指消毒：酒精、碘酒、新洁尔灭1. 1. 空气中细菌的检查空气中细菌的检查 普通平板：普通平板：1 1个个2. 2. 咽喉部细菌的检查咽喉部细菌的检查 血平

2、板：血平板：2 2个个 3. 3. 手指消毒前后的细菌学检查手指消毒前后的细菌学检查 普通平板：普通平板：4 4个个 三三. . 细菌的分布与消毒细菌的分布与消毒 一一. . 抗酸染色抗酸染色 二二. . 肠道致病菌的分离培养肠道致病菌的分离培养 一、实验目的一、实验目的1.掌握抗酸染色的操作方法。掌握抗酸染色的操作方法。2.熟悉抗酸染色的原理。熟悉抗酸染色的原理。抗抗 酸酸 染染 色色 v分枝杆菌的细胞壁内含有大量的脂质，主要是分分枝杆菌的细胞壁内含有大量的脂质，主要是分枝菌酸，它包围在肽聚糖的外面，所以分枝杆菌枝菌酸，它包围在肽聚糖的外面，所以分枝杆菌一般不易着色，要通过加热和延长染色时间

3、来促一般不易着色，要通过加热和延长染色时间来促使其着色。但分枝菌酸与染料结合后，很难被酸使其着色。但分枝菌酸与染料结合后，很难被酸性脱色剂脱色，故名抗酸染色。性脱色剂脱色，故名抗酸染色。v齐齐- -尼氏抗酸染色法是在加热条件下使分枝菌酸与尼氏抗酸染色法是在加热条件下使分枝菌酸与石炭酸复红结合成牢固复合物，用石炭酸复红结合成牢固复合物，用3%3%盐酸酒精处盐酸酒精处理也不脱色。当再用碱性美蓝复染后，分枝杆菌理也不脱色。当再用碱性美蓝复染后，分枝杆菌仍然为红色，而其它细菌及背景中的物质为蓝色。仍然为红色，而其它细菌及背景中的物质为蓝色。二、实验原理二、实验原理 细菌：卡介苗 染液：石炭酸复红液、3

4、%盐酸酒精、碱性美蓝溶液 其它：接种环、酒精灯、载玻片，玻片夹等三、实验材料三、实验材料1 1、细菌涂片的制备、细菌涂片的制备 涂片涂片 枯燥枯燥 固定固定 2 2、染色、染色1 1初染：用玻片夹夹持涂片标本，滴加石炭酸复红初染：用玻片夹夹持涂片标本，滴加石炭酸复红2-2-3 3滴，在火焰高处滴，在火焰高处2 210cm10cm徐徐加热，切勿沸腾，徐徐加热，切勿沸腾，出现蒸汽即暂时离开，加热出现蒸汽即暂时离开，加热3 35min5min，若染液蒸发，若染液蒸发减少，应再加染液，以免干涸，待标本冷却后用水减少，应再加染液，以免干涸，待标本冷却后用水冲洗。冲洗。2 2脱色：脱色：3%3%盐酸酒精脱

5、色盐酸酒精脱色30s30s1min1min；用水冲洗。；用水冲洗。3 3复染：用碱性美蓝溶液复染复染：用碱性美蓝溶液复染1min1min；用水冲洗后用吸；用水冲洗后用吸水纸吸干。水纸吸干。四、方法与步骤与革兰染色的区别）四、方法与步骤与革兰染色的区别） 五、实验结果五、实验结果 未染色未染色 初染后初染后 脱色后脱色后 复染后复染后初染初染脱色脱色复染复染石石炭炭酸酸复复红红盐酸酒精盐酸酒精碱性美蓝碱性美蓝 结核杆菌呈红色，常堆积成团，排列无序，偶呈分枝结核杆菌呈红色，常堆积成团，排列无序，偶呈分枝状生长。背景及非抗酸性细菌呈蓝色。状生长。背景及非抗酸性细菌呈蓝色。 六、本卷须知六、本卷须知

6、1 1、无菌操作、无菌操作2 2、染色时间要充分、染色时间要充分3 3、初染时加热勿沸腾勿干涸、初染时加热勿沸腾勿干涸二、肠道致病菌的分离培养二、肠道致病菌的分离培养 （88页）页） 一一. .肠道杆菌的生物学性状肠道杆菌的生物学性状 二二.S-S.S-S培养基的特性及用途培养基的特性及用途 三三. .分离培养方法分离培养方法 主要内容主要内容一一. .肠道杆菌的生物学性状肠道杆菌的生物学性状 埃希菌属：大肠埃希菌埃希菌属：大肠埃希菌沙门菌属：伤寒沙门菌沙门菌属：伤寒沙门菌 甲型、乙型副伤寒沙门菌甲型、乙型副伤寒沙门菌志贺菌属：痢疾志贺菌志贺菌属：痢疾志贺菌肠杆菌科重要菌属及代表菌种肠杆菌科重

7、要菌属及代表菌种1 1、相似的形态染色、相似的形态染色从形态上无法区别从形态上无法区别 乳糖发酵试验乳糖发酵试验 初步鉴别肠道致病菌和肠道非致病菌初步鉴别肠道致病菌和肠道非致病菌 肠道致病菌肠道致病菌 肠道非致病菌肠道非致病菌 多数不发酵乳糖多数不发酵乳糖 多数发酵乳糖多数发酵乳糖 2 2、活泼的生化反应、活泼的生化反应 -/+ - +伤寒杆菌伤寒杆菌 - - +痢疾杆菌痢疾杆菌 - 大肠杆菌大肠杆菌 硫化氢硫化氢 乳糖乳糖 葡萄糖葡萄糖 菌名菌名 三种细菌的生化反应三种细菌的生化反应 v胆盐抑制胆盐抑制G+,G+,枸橼酸钠和枸橼酸钠和煌绿能部分抑制大肠杆菌煌绿能部分抑制大肠杆菌, ,致病的沙

8、门菌和志贺菌能致病的沙门菌和志贺菌能大量生长。大量生长。v中性红指示剂和乳糖中性红指示剂和乳糖, ,中中性红遇酸变粉红。性红遇酸变粉红。v常用于肠道致病菌的分离常用于肠道致病菌的分离培养。培养。 二、二、S-SS-S培养基的特性及用途培养基的特性及用途细菌细菌 SSSS平板平板大肠杆菌大肠杆菌 粉红色大菌落粉红色大菌落痢疾杆菌痢疾杆菌 无色细小无色细小 半透明菌落半透明菌落伤寒杆菌伤寒杆菌 无色细小无色细小 半透明菌落半透明菌落 S-SS-S培养基中菌落特点：培养基中菌落特点： 大肠杆菌大肠杆菌痢疾杆菌痢疾杆菌v 将粪便标本以平板分区划线法接种到SS培v 养基。v (每个实验室8个SS平板，每

9、组做好标记，班长用胶布按班级绑好)v 放入37温箱中培养24小时。取出放4冰 箱中保存备用。三、分离培养方法三、分离培养方法三、细菌的分布与消毒三、细菌的分布与消毒1.1.细菌在自然界的分布细菌在自然界的分布 2.2.化学因素对细菌的影响化学因素对细菌的影响 1. 1. 空气中细菌的检查：空气中细菌的检查： （4242页，每个班页，每个班1 1个普通琼脂培养基）个普通琼脂培养基） 原理：空气中携带有微生物的气溶胶粒子在地心引力的作用原理：空气中携带有微生物的气溶胶粒子在地心引力的作用下，以垂直的自然方式沉降到琼脂培养基上。下，以垂直的自然方式沉降到琼脂培养基上。 方法：在室内选择一处放一个平皿

10、。打开皿盖，使培养基面方法：在室内选择一处放一个平皿。打开皿盖，使培养基面向上暴露在空气中向上暴露在空气中15min15min，即盖上皿盖，即盖上皿盖，3737倒置培养倒置培养2424小小时，观察结果。时，观察结果。每个班每个班2 2个血液琼脂培养基个血液琼脂培养基取血琼脂平板取血琼脂平板1 1块，打开平皿盖，将培养基面置于口腔前块，打开平皿盖，将培养基面置于口腔前10cm10cm处，受试者用力咳嗽几次；处，受试者用力咳嗽几次；盖上平皿盖，置盖上平皿盖，置3737温箱中倒置培养温箱中倒置培养24h24h后取出观察结果。后取出观察结果。2. 2. 咽喉部细菌的检查咽喉部细菌的检查 方法：取一普通琼脂培养基，方法：取一普通琼脂培养基，一部分写上一部分写上“前前”，另一部分，另一部分写上写上“后后”，然后将手指在写，然后将手指在写 有有“前的部分按一下，再将前的部分按一下，再将 手指用酒精进行消毒，待干手指用酒精进行消毒，待干 后，在写有后，在写有“后的部分按一后的部分按一 下。放入下。放入3737温箱培养温箱培养2424小小时后观察。时后观察。 （4646页，每个班页，每个班4 4个平皿）个平皿） 3. 3.手指皮肤消毒前后的细菌学检查手指皮肤消毒前后的细菌学检查实验报告内容：抗酸染色内容：抗酸染色一、原理一