高效液相色谱柱标准操作程序

1、高效液相色谱柱标准操作程序1目的规定高效液相色谱柱使用时的标准操作程序。2适用范围适用于化验室所使用的高效液相色谱柱。3职责3.1化验室负责制定本SOP。3.2经过相应培训的检验员方可使用高效液相色谱柱。 4文件内容4.1购买 (1) 化验室提出购买申请。 (2) 供应部负责购买。4.2验收 (1) 高效液相色谱柱购入后，保管员应检查其外观、标签是否完好无损，印刷是否清晰；测试报告中所提到的柱效是否符合需要，保存厂家色谱柱评价报告。（2）对新购入色谱柱进行柱效测试，并填写高效液相色谱柱柱效测试记录。 (3) 在每根色谱柱进行唯一性编号（即柱子编号），分别标记在柱盒和柱子上，编号由7位阿拉伯数字

2、和连字符“-”组成，首4位数字代表购买的年份，后三位数字代表流水号，年份和流水号之间用连字符“-”连接，例如2010-001代表2010年购买的第一根。 (4) 确认无误后，应填写高效液相色谱柱台帐上相关内容。4.3 使用 (1) 实验前，选择所要使用的色谱柱，填写高效液相色谱柱使用记录。一般一个品种一个检验项目固定一根色谱柱。实验前先将反相色谱柱用纯化水：有机相（甲醇或乙腈）为9：1冲洗2030分钟后换上流动相 ；正相色谱柱用异丙醇冲洗2030分钟，换上纯化水：有机相（甲醇或乙腈）为9：1冲洗2030分钟后换上流动相。 (2) 实验开始前先进行系统适用性试验，确定色谱柱的峰形、重复性、理论板

3、数、分离度、拖尾因子等参数是否符合实验要求。如因色谱柱原因无法达到系统适用性试验要求，可更换合适色谱柱,。更换的色谱柱必须要通过系统适用性试验要求才能用于实验。原色谱柱需进行柱效测试，评估可用性，并填写高效液相色谱柱柱效测试报告。4.4 实验结束后冲洗色谱系统。 (1) 反相色谱柱：如流动相含磷酸盐缓冲液，先用流速为1.0ml/min的纯化水冲洗色谱系统10分钟后再用流速为1.0ml/min的纯化水：有机相（甲醇或乙腈）为9：1冲洗60分钟后再用流速为1.0ml/min的有机相（甲醇或乙腈）冲洗30分钟；如流动相不含磷酸盐缓冲液，色谱系统先用流速为1.0ml/min的纯化水-有机相（甲醇或乙腈

4、）为9：1冲洗60分钟后再用流速为1.0ml/min的有机相（甲醇或乙腈）冲洗30分钟。 (2) 正相色谱柱：如流动相含磷酸盐缓冲液，先用流速为1.0ml/min的纯化水冲洗色谱系统10分钟后再用流速为1.0ml/min的纯化水：有机相（甲醇或乙腈）为9：1冲洗30分钟后，再用流速为0.5ml/min的异丙醇（色谱级）冲洗30分钟，再用流速为0.5ml/min的正己烷（色谱级）冲洗30分钟；如流动相不含磷酸盐缓冲液，色谱系统先用流速为1.0ml/min的纯化水-有机相（甲醇或乙腈）为9：1冲洗60分钟后，再用流速为0.5ml/min的异丙醇（色谱级）冲洗30分钟，再用流速为0.5ml/min的

5、正己烷（色谱级）冲洗30分钟。 (3) 拆下色谱柱，两端用柱螺帽拧紧后存放于色谱柱盒中。填写高效液相色谱柱使用记录及高效液相色谱系统适用性试验台账。 (4) 每一色谱柱使用后均应填写高效液相色谱柱使用记录及高效液相色谱柱系统适用性试验台账。高效液相色谱柱使用记录内容包括使用日期、使用者、样品名称、设备编号、流动相比例、柱温、流速、出峰时间、压力、流动相pH、实验情况、分析类型、进样次数、累计进样次数、冲洗溶剂及冲洗时间、贮存液及冲洗时间、归还者、归还日期。高效液相色谱柱系统适用性试验台账内容包括使用日期、样品名称、分析类型、设备编号、理论塔板数、分离度、拖尾因子，信噪比。4.5 色谱柱的保养色

6、谱柱的长期保存 反相柱可以储存于甲醇或乙腈中，正相柱可以储存于经脱水处理后的正己烷中，离子交换柱可以储存于含5%甲醇或含0.05%叠氮化钠的水中，并将色谱柱两端的堵头堵上，以免干枯，室温保存；如有厂家规定储存条件，按厂家规定执行。4.6 色谱柱可用性评估（1）根据高效液相色谱柱柱效测试记录评估色谱柱是否需要报废。（2）根据高效液相色谱柱系统适用性试验台账评估色谱柱是否需要更换。（3）根据高效液相色谱柱使用记录色谱柱的使用情况来评估色谱柱的使用寿命。4.7 报废 有以下情形之一，对色谱柱进行报废，并填写高效液相色谱柱台帐。 (1) 实验中发现峰形变坏（如出现肩峰或双峰），表明柱入口柱床塌陷； (2) 实验中发现峰形变宽，系统适用性试验不符合相关检验项目要求，改变流动相也无法改善； (3) 柱压超出仪器可承受压力； (4) 其他不符合系统适应性实验要求的情况。4.8注意事项 (1) 安装色谱柱时应使流动相流路的方向与色谱柱标签上箭头所示方向一致。 (2) 以硅胶为基质的各种键合相对酸和碱都敏感，一般pH使用范围为28。当流动相pH大于8时，应选用耐碱的填充剂；当流动相pH