细胞培养常用试剂

1、动物细胞培养常用试剂介绍 Hanks液 D-Hanks液 PBS EDTA 胰蛋白酶 青霉素、链霉素Hanks液与D-Hanks液 Hanks液是常见的平衡盐溶液(BSS)之一。D-Hanks液则是无钙镁离子的Hanks液（也有资料认为除了不含钙镁离子之外也不含葡萄糖）。BSS与细胞生长状态下的pH值、渗透压及无菌状态一致，且配方简单，是组织培养基本用液，常用于配制培养基及其他用液，或洗细胞等，细胞在这种BSS中可生存几个小时。 Hanks液配方Hanks液（原液） 原液甲： NaCl 160g KCl 8g MgSO47H2O 2g MgCl26H2O 2g 上述试剂加入800ml双蒸水。溶

2、解。 CaCl2 2.8g溶于100ml双蒸水 上述二液混合，加双蒸水至1000ml，再加2ml氯仿防腐，4保存。 原液乙： Na2HPO412H2O 3.04g KH2PO4 1.2g 葡萄糖 20g 加入800ml双蒸水，溶解。 0.4%酚红溶液 100ml 上述二液混合，加双蒸水至1000ml，再加2ml氯仿防腐，4保存。 使用时甲，乙原液按下列比例配成 Hanks 液 使用液：原液甲1份、原液乙1份、双蒸水18份滤过，20min灭菌，放4冰箱保存，使用前用NaHCO3调整pH值。D-Hanks液配方 D-Hanks液 NaCl 4.5g KCl 0.2g NaHCO3 0.175g N

3、a2HPO412H2O 0.076g KH2PO4 0.03g 葡萄糖 0.5g 0.4%酚红 2.5ml 将上述成分依次溶解或加入到双蒸水中，最后加双蒸水定容至500ml，以5.6%NaHCO3调整 pH 值至7.4，4冰箱保存备用。 酚红在低pH值时呈现黄色,在pH6.6至8.0间会呈现橙色，在高pH值时呈现红色。 酚红只是起指示酸碱度的作用，有酚红较方便但没有也无妨。有人主张最好不用酚红，可能对细胞生长不利，有时也会影响一些检测结果。 此外酚红有雌激素样作用，所以如果做相关的实验最好不加。 对于Hanks与D-hanks液的配制，不同的文献有不同的配方 我们可以看到，两者最主要的区别就是

4、D-hanks液中没有钙镁离子。Hanks液与D-Hanks液用途上的比较 Hanks液是组织培养基本用液，常用于配制培养基及其他用液，或洗涤组织、细胞等。细胞在Hanks液中可以在一段时间内维持一定的活力。另外Hanks液还可以用于终止EDTA的作用。 配制胰酶液或者是胰酶/EDTA的基础液都是D-hanks 液，而不能使用Hanks液。 这是由于钙离子和镁离子会影响胰蛋白酶的活性，也会阻碍EDTA的作用。PBS 磷酸盐缓冲液 磷酸盐是生物化学研究中使用最广泛的一种缓冲剂，由於它们是二级解离，有二个pKa值，所以用它们配制的缓冲液，pH范围最宽： NaH2PO4： pKa12.12， pKa

5、27.21 Na2HPO4： pKa17.21， pKa212.32 配酸性缓冲液： 用 NaH2PO4，pH14， 配中性缓冲液： 用混合的两种磷酸盐，pH68， 配碱性缓冲液： 用 Na2HPO4，pH1012。 因为低温时钠盐难溶，钾盐易溶，一般情况下用钾盐比钠盐好（使用SDS-PAGE时除外）。PBS与Hanks液的用途区别 PBS：磷酸缓冲盐溶液具有pH缓冲作用的等渗盐溶液。多用于非活体。 Hanks：平衡盐溶液无机盐和葡萄糖浓度接近大部分动物（植物）细胞的水平，可作为动（植）物细胞短期培养（保存）。多用于活体。 Hanks液中盐成分较PBS复杂，且有葡萄糖，可为细胞提供简单的营养，

6、而PSB中只有磷酸根，钠，钾，氯离子，只是最简单的盐平衡缓冲液，不能为细胞提供暂时的营养。 其他缓冲系统 碳酸盐缓冲系统 一般细胞培养液的pH在7.0-7.4之间。由于碳酸盐pH缓冲系统是一种生理pH缓冲系统，大多数培养液用它来保持稳定的pH。为了维持稳定的pH，培养箱中的二氧化碳需要维持在2-10%之间，以保持培养液中溶解的二氧化碳的浓度。 HEPES缓冲系统 HEPES，即4-羟乙基哌嗪乙磺酸 HEPES在pH7.2-7.4之间有很强的缓冲能力，当透气的培养器皿被拿到二氧化碳培养箱外面的时候，由于空气中二氧化碳浓度很低，培养液中碳酸盐缓冲系统就会失去效果，这时候HEPES缓冲系统就能继续保持 pH的稳定。 EDTA与胰蛋白酶 EDTA，常用的阳离子螯合剂。 组织细胞间存在钙黏蛋白（一类Ca2+依赖的细胞黏着糖蛋白 ）。而EDTA可以通过螯合金属离子，破坏Ca2+或Mg2+依赖性的细胞黏着。 胰蛋白酶 水解细胞间的蛋白质，方便形成细胞悬液。 消化细胞时可以只使用胰蛋白酶，也可以胰蛋白酶