培养基母液配制

1、培养基母液配制培养基配制通常先根据各组分性质，配制成较浓的母液（母液浓度为培养基浓度的若干倍如50 或 100 倍），贮存在冰箱中备用，以后配制培养基时根据用量量取。 由于培养基成分较多，如果每配制一次即进行多次称量（不少成分用量较微），不仅会造成较大的误差，而且会增加工作量，因而配制母液可使培养基配制方便准确。配制大量成分母液通常为原培养基浓度的20、 50 或 100 倍，倍数不宜过高。MSW养基母液及培养基配方法参考表 2。大量成分母液经常将CaCl2 - 2H2O单独配制保存，以免长期贮存发生沉淀。若将全部大量成分配在一起时，为防止在混合时发生沉淀，须在各药品充分溶解后，按表中化合物出

2、现顺序混合，氯化钙最后加入，以免与硫酸镁形成沉淀. 大量成分称量溶解后，在1000 ml 容量瓶中定容，然后移入磨口瓶中，贴上标签，置于普通冰箱（4）贮存。微量元素母液配制时，由于培养基中微量元素用量甚微，浓度为 l ， 所以母液浓度宜为原培养基配方中用量的100 倍。 一般将微量元素分别称量溶解，定容在 1000 ml 容量瓶中后贮存在一个细口瓶中，但也有将KI 分别配制，单独贮存在棕色瓶中。配好后，贴上标签，贮存于4冰箱。培养基中的铁盐母液一般单独配制。目前常用的铁盐为硫酸亚铁和乙二胺四乙酸二纳的螯合物。称取Na2-EDTA g, FeSO4 2H2O g,分别溶解（可加热）,然后混合定溶

3、于1000 ml 容量瓶中。转入细口瓶，贴上标签，4冰箱中保存。氨基酸和维生素等有机成分母液可配制时，母液浓度通常为原培养基配方的50 倍（或100）。常用氨基酸和维生素为水溶性物质，可用蒸馏水溶解，但叶酸要先用少量稀碱或稀氨水溶解，然后用重蒸馏水定容。配制好后，转入细口瓶，贴上标签，-20 （或4）冰箱中保存。植物生长调节物质如生长素类和细胞分裂素类可以根据需要，灵活设计其浓度，一般为、或1 mg/l。如配mg/l NAA母液，称25 mg NAA溶于50 ml 重蒸储水，或50 mg的NAA®溶于100 ml重蒸储水中。IAA要用棕色瓶暗中贮 存，以免光照分解。常用植物生长调节物

4、质和维生素特征见表3。生长素为醇溶性物质，配制时，应用少量95%酒精或稀碱溶解，然后用重蒸馏水溶解定容；细胞分裂素应先用少量1 N NaOH或HCl溶解，然后用重蒸储水定容。配制好的母 液放置在4c普通冰箱中备用。这些母液保存时间不宜过长，当出现沉淀、浑浊 及霉菌团时，应重新配制。椰乳中因含有许多种细胞分裂素物质，如 KT类似物(9-B-D-ribofuranosylzeatin )、玉米素及玉米素核糖花等， 有时可与细胞分 裂素相互代替。采集到椰子时，应检查其汁液(保证没有变质)，煮沸，滤纸过 滤掉蛋白，高温高压消毒，贮存在-20 C下备用。有时可直接加入培养基。酵母 提取液也一般也现用现配

5、，称量酵母粉后，加热至沸腾 30分钟，过滤去渣。四、实验步骤1、大量元素母液的配制各成分按照表1培养基浓度含量扩大 10倍用天平称取，用 蒸储水分别溶解，按顺序逐步混 合。后用 蒸储水定容到1000ml的容量瓶中，即为10倍的大量元素母液。到入细口瓶，贴 好标签保存于冰箱中。配制培养基时，每配1L培养基取此液100ml。表1 MS培养基大量元素母液制备丁 P药品名称培加基浓度(mg/L)扩大10称量(mg)1NH4NO31650165002KNO31900190003CaCl2 - 2H2O44044004MgSO4 7H2O37037005KH2PO41701700注意：(1)配制大量元素母

6、液时，某些无机成分如Ca2+、SO42、Mg2+和H2P04 一等在一起可能发生化学反应，产生沉淀物。为避免此现象发生，母液配制时要用纯度高的重蒸储水溶解， 药品采用等级较高的分析纯，各种化学药品必须先以少量重蒸储水使其充分溶解后才能混合，混合时应注意先后顺序。特别应将Ca2+、SO42一、Mg2十和H2PO4-等离子错开混合，速度宜慢，边搅拌边混合。(2)CaCl2 - 2H2O要在最后单独加入，在溶解 CaCl2 2H2O时，蒸储水需加热沸腾，除去水 中的CO2以防沉淀。另外，CaCl2 - 2H2O放入沸水中易沸腾，操作时要防止其溢出。2、微量元素母液的配制MS养基的微量元素无机盐由7种

7、化合物(除Fe )组成。微量元素用量较少，特别是 CuSO4 5H2OCoCl2 - 6H20 ,因此在配制中分微量I、n配制。按照表2,表3配方，用电光天平称量，其它同大量元素。配制培养基时，每配制1L培养基，取微量I 10ml, 微量n。表2MS培养基微量I的配制丁 P化合物名称培加基浓度(mg/L)扩大100倍称量(mg)1MnSO4 4H2O22302ZnS04 7H2O8603H3BO36204KI835Na2MoO 4 2H2()25表3MS培养基微量n的配制丁 p化合物名称培养基浓度(mg/L)扩大10000倍称量(mg)1CuSO4 5H2O2502CoCl2 - 6H2O25

8、0注意：使用电子 分析天平 时注意不要把药品撒到称盘上，用完以后，用吸耳球将天平内的脏物清理干净。3、铁盐母液的配制铁盐不是都需要单独配成母液，如柠檬酸铁，只需和大量元素一起配成母液即可。目前常用的铁盐是硫酸亚铁和乙二胺四乙酸二钠的螯合物，必须单独配成母液。 这种螯合物使用起来方便，又比较稳定，不易发生沉淀。配制方法同上，直接用蒸储水加热搅拌溶解，定容至 1L。配制培养基时，配制 1L取此液10ml。表4 MS铁盐母液的配制丁 P化合物名称培加基浓度(mg/L)扩大100倍称量(mg)1Na2-EDTA37302FeSO4 7H2O2780注意：在配制铁盐时，如果加热搅拌时间过短，会造成FeS

9、04和Na2-EDTA鳌合不彻底，此时若将其冷藏，FeSO4会结晶析出。为避免此现象发生，配制铁盐母液时，FeSO4和Na2-EDTA应分别加热溶解后混合，并置于加热 搅拌器上不断搅拌至溶液呈金黄色 (约加热20 - 30 min), 调pH值至5 .5 ,室温放置冷却后，再冷藏。4、有机母液的配制MS§养基的有机成分有甘氨酸、肌醇、烟酸、盐酸硫胺素和盐酸毗哆素。培养基中的有机成分原则上应分别单独配制。配制直接用蒸储水溶解，定容至1L,注意称量时用电子 分析天平。配制培养基时，每配 1L培养基取此液5ml。注意：由于维生素母液营养丰富， 因此贮藏时极易染菌。被菌类污染的维生素母液，

10、有效浓度降低， 并且易给后期培养造成伤害，不宜再用。避免此现象发生的方法是：配制母液时用无菌重蒸储水溶解维生素，并贮存在棕色无菌瓶中，或缩短贮藏时间。表5 MS培养基有机物质母液的制备丁 P化合物名称土口加基浓良(mg/L-)扩大200倍称量(mg)1甘氨酸24002肌醇100200003盐酸硫胺素(VB1)1004盐酸叱哆素(VB6)1005烟酸1005、激素母液配制植物组织培养中使用的 激素种类及含量需要根据不同的研究目的而定。一般激素母液的配制的终浓度以ml为好，需要注意的是：（1 ）配制生长素类，例如IAA、NAA、6BA,应先用少量95叱醇或无水乙醇充分溶解，或者用1mol/L的Na

11、OH§解，然后用蒸储水定容到一定的浓度。（2）细胞分裂素，例如KT,应先用少量95叱醇或无水乙醇加 34滴1mol/L的盐酸溶解, 再用蒸储水定容。（3）配制生物素，用稀氨水溶解，然后定容。注意：所有的母液都应保存在 04C冰箱中，若母液出现沉淀或霉团则不能继续使用。植物组织培养的必要条件录入时间：2011-7-19 13:59:05 来源：生技网（一）温度: 对大多数植物组织 2028c即可满足生长所需，其中 2627c最适合。（二）光：组织培养通常在散射光线下进行。光的影响可导致不同的结果。有些植物组织在暗处生长较好，而另一些植物组织在光亮处生长较好，但由愈伤组织分化成器官时，则每日必须要有一定时间的光照才能形成芽和根。有些次生物质的形成，光是决定三因素。（三）渗透压：渗透压对植物组织的生长和分化很有关系。在培养基中添加食盐、蔗糖、甘露醇和乙二醇等物质可以调整渗透压。通常 12个大气