大实验三米曲霉固体发酵制曲ppt课件

1、大实验三大实验三 米曲霉固体发酵制曲米曲霉固体发酵制曲 1 1、学习固体发酵工艺、学习固体发酵工艺 2 2、制备米曲霉固体曲，测定蛋白酶活力、制备米曲霉固体曲，测定蛋白酶活力 实验目的要求实验目的要求实实 验验 原原 理理实实 验验 步步 骤骤1、制备麸皮固体培育基：、制备麸皮固体培育基：25g麸皮，加麸皮，加15ml水加水量水加水量40%60%，拌匀；，拌匀；装茄瓶。装茄瓶。 2、灭菌：、灭菌：0.1Mpa 灭菌灭菌2030min，冷却至室温。，冷却至室温。 已培育好的米曲霉孢子斜面一支，参与约已培育好的米曲霉孢子斜面一支，参与约10ml无菌水，无菌水，洗下孢子，制成孢子悬液。洗下孢子，制成

2、孢子悬液。 留意：勿使孢子飘落实验室留意：勿使孢子飘落实验室 3、制备孢子悬液菌种：、制备孢子悬液菌种：实验步骤 (continued)实验步骤 (continued)每茄瓶参与孢子悬液每茄瓶参与孢子悬液2ml2ml，抖动茄瓶，使孢子悬液与麸，抖动茄瓶，使孢子悬液与麸皮培育基混匀。皮培育基混匀。 4 4、接种：、接种：28培育培育4天天其间，于接种其间，于接种2448h左右抖动茄瓶翻曲一次左右抖动茄瓶翻曲一次察看记录菌丝生长及孢子构成情况察看记录菌丝生长及孢子构成情况5 5、培育：、培育：实验步骤 (continued)另一次实验另一次实验实验步骤 (continued)6 6、蛋白酶活力测定

3、：、蛋白酶活力测定： 1 1粗酶液制备：粗酶液制备：向一茄瓶中参与无菌水约向一茄瓶中参与无菌水约100ml100ml，浸泡固体曲，浸泡固体曲1h1h；过滤得；过滤得粗酶液。粗酶液。 2 2倒平板：倒平板：融化酪蛋白明胶双基质固体培育基，每人倒一平板。融化酪蛋白明胶双基质固体培育基，每人倒一平板。 实验步骤 (continued)3 3打孔：打孔：打孔器经酒精熄灭灭菌后，每平板打打孔器经酒精熄灭灭菌后，每平板打1 13 3孔，并在酒精灯孔，并在酒精灯火焰上稍稍加热打孔处，使孔周围的培育基微融，然后平火焰上稍稍加热打孔处，使孔周围的培育基微融，然后平放冷却。放冷却。 4 4加样：加样：往孔内参与粗

4、酶液适量约往孔内参与粗酶液适量约100ul100ul，可设对照。，可设对照。 实验步骤 (continued)5 5培育反响：培育反响：将加样后的平板小心平端放入将加样后的平板小心平端放入3030培育箱，放置培育箱，放置2020小时左右。小时左右。 6 6察看结果：察看结果：可直接察看透明圈有无、测定透明圈直径；也可向平板可直接察看透明圈有无、测定透明圈直径；也可向平板滴加少量滴加少量10%10%三氯乙酸，以加强察看效果。三氯乙酸，以加强察看效果。 实验结果实验结果 实验报告实验报告1 1、实验原理、方法步骤、结果及分析、实验原理、方法步骤、结果及分析 2 2、思索题、思索题准准 备：备：1、

5、10%三氯乙酸三氯乙酸 2 2、双基质固体培育基、双基质固体培育基 以对应的以对应的L-RL-R组配制，每组配制，每L-RL-R组配组配400ml400ml，分装，分装3 3瓶瓶 配方：配方：10g10g干酪素，干酪素，10g10g明胶，明胶，18g18g琼脂，琼脂，1000ml1000ml， pH7.0 pH7.0 配法：干酪素先用配法：干酪素先用0.2N NaOH0.2N NaOH溶解，倒入热水中加热搅拌至溶解，倒入热水中加热搅拌至完全溶解；适量完全溶解；适量1N HCl1N HCl调至调至pH7.0pH7.0；参与明胶和琼脂，继续；参与明胶和琼脂，继续加热至完全融化。加热至完全融化。 附：大实验四附：大实验四“苏云金芽孢杆菌苏云金芽孢杆菌Bacillus thuringiensis; B.t杀虫剂液体摇瓶发酵方案设计杀虫剂液体摇瓶发酵方案设计 研讨内容：研讨内容：1培育基组成对培育基组成对B.t芽孢构成的影响芽孢构成的影响 2通气情况对通气情况对B.t芽孢构成的影响芽孢构成的影响 以实验小组为单位，根据研讨内容自行