第二章紫外可见分光光度分析法ppt课件

1、第二章第二章 紫外紫外-可见分可见分光光度分析法光光度分析法第一节第一节 根本原理根本原理第二节第二节 紫外紫外-可见可见分光光度计分光光度计第三节第三节 显色与丈量显色与丈量条件的选择条件的选择第四节第四节 分光光度测分光光度测定方法定方法ultraviolet visible spectrophotometers第二章第二章 紫外紫外-可见分光光度分析可见分光光度分析法法一、概述一、概述二、紫外可见吸收光谱二、紫外可见吸收光谱三、分子吸收光谱与电三、分子吸收光谱与电子跃迁子跃迁四、光的吸收定律四、光的吸收定律第一节第一节 根本原理根本原理一、概述一、概述 基于物质光化学性质而建立起来的分析

2、方法称之为光化学分析法。 分为:光谱分析法和非光谱分析法。 光谱分析法是指在光或其它能量的作用下，经过丈量物质产生的发射光、吸收光或散射光的波长和强度来进展分析的方法。 吸收光谱分析吸收光谱分析发射光谱分析发射光谱分析分子光谱分析分子光谱分析原子光谱分析原子光谱分析概述概述: 在光谱分析中，根据物质对光的选择性吸收而建立起来在光谱分析中，根据物质对光的选择性吸收而建立起来的分析方法称为吸光光度法的分析方法称为吸光光度法, ,主要有主要有: : 红外吸收光谱：分子振动光谱，吸收光波长范围红外吸收光谱：分子振动光谱，吸收光波长范围2.52.51000 1000 m ,m ,主要用于有机化合物构造鉴

3、定。主要用于有机化合物构造鉴定。 紫外吸收光谱：电子跃迁光谱，吸收光波长范围紫外吸收光谱：电子跃迁光谱，吸收光波长范围200200400 nm400 nm近紫外区近紫外区 ，可用于构造鉴定和定量分析。，可用于构造鉴定和定量分析。 可见吸收光谱：电子跃迁光谱，吸收光波长范围可见吸收光谱：电子跃迁光谱，吸收光波长范围400400750 nm 750 nm ，主要用于有色物质的定量分析。，主要用于有色物质的定量分析。 本章主要讲授紫外可见吸光光度法。本章主要讲授紫外可见吸光光度法。二、紫外可见吸收光谱二、紫外可见吸收光谱 1 1光的根本性质光的根本性质 光是一种电磁波，具有波粒二象性。光的光是一种电

4、磁波，具有波粒二象性。光的动摇性可用波长动摇性可用波长、频率、频率、光速、光速c c、波数、波数cm-1cm-1等参数来描画：等参数来描画： = c = c ； 波数波数 = 1/ = 1/ = = /c /c 光是由光子流组成，光子的能量光是由光子流组成，光子的能量： E = h E = h = h c / = h c / PlanckPlanck常数：常数：h=6.626 h=6.626 10 -34 J 10 -34 J S S ) ) 光的波长越短频率越高，其能量光的波长越短频率越高，其能量越大。越大。 白光白光( (太阳光太阳光) )：由各种单色光组成的：由各种单色光组成的复合光复合

5、光 单色光：单波长的光单色光：单波长的光( (由具有一样能由具有一样能量的光子组成量的光子组成) ) 可见光区：可见光区：400-760 nm400-760 nm 紫外光区：近紫外区紫外光区：近紫外区200 - 400 nm200 - 400 nm 远紫外区远紫外区10 10 - 200 nm - 200 nm 真空紫外区真空紫外区 辐射区段辐射区段波长范围波长范围原子或分子的主要能级跃迁原子或分子的主要能级跃迁 射线射线 X射线射线 远紫外辐射远紫外辐射 紫外辐射紫外辐射 可见光可见光 近红外辐射近红外辐射 中红外辐射中红外辐射 远红外辐射远红外辐射 微波微波 无线电波无线电波 10-30.

6、1 nm 0.110 nm 10200 nm 200400 nm 400760 nm 0.762.5 m 2.550 m 50300 m 0.3mm1 m 11000 m原子核反应原子核反应原子内层电子跃迁原子内层电子跃迁分子中原子的中壳层电子能级跃迁分子中原子的中壳层电子能级跃迁分子中原子外层价电子能级跃迁分子中原子外层价电子能级跃迁分子中原子外层价电子能级跃迁分子中原子外层价电子能级跃迁分子中涉及氢原子的振动能级跃迁分子中涉及氢原子的振动能级跃迁分子中原子的振动能级和分子转动能级跃迁分子中原子的振动能级和分子转动能级跃迁分子转动能级跃迁分子转动能级跃迁分子转动能级跃迁分子转动能级跃迁磁场诱

7、导核自旋能级跃迁磁场诱导核自旋能级跃迁电磁波谱分区表电磁波谱分区表2. 2. 物质对光的选择性吸收及吸收曲线物质对光的选择性吸收及吸收曲线M + 热M + 荧光或磷光 E = E2 - E1 = h 量子化 ；选择性吸收; 分子构造的复杂性使其对不同波长光的吸收程度不同； 用不同波长的单色光照射，测吸光度 吸收曲线与最大吸收波长 max；M + h M * 光的互补：蓝光的互补：蓝 黄黄基态基态 激发态激发态E1 E E2白色白色620760nm590620nm400430nm560590nm500560nm480500nm430480nm红红黄黄绿绿橙橙青青青蓝青蓝紫紫蓝蓝吸收曲线的讨论：吸

8、收曲线的讨论： 1同一种物质对不同波长光的吸光度不同一种物质对不同波长光的吸光度不同。吸光度最大处对应的波长称为最大吸收波长同。吸光度最大处对应的波长称为最大吸收波长max 2不同浓度的同一种物质，其吸收曲线不同浓度的同一种物质，其吸收曲线外形类似外形类似max不变。而对于不同物质，它们的不变。而对于不同物质，它们的吸收曲线外形和吸收曲线外形和max那么不同。那么不同。 3吸收曲线可以提供物质的构造信息，并作为物质定性分析的根据吸收曲线可以提供物质的构造信息，并作为物质定性分析的根据之一。之一。 4不同浓度的同一种物质，在某一定波长下吸光度不同浓度的同一种物质，在某一定波长下吸光度 A 有差别

9、，在有差别，在max处吸光度处吸光度A 的差别最大。此特性可作为物质定量分析的根据。的差别最大。此特性可作为物质定量分析的根据。 5在在max处吸光度随浓度变化的幅度最大，所以测定最灵敏。吸收处吸光度随浓度变化的幅度最大，所以测定最灵敏。吸收曲线是定量分析中选择入射光波长的重要根据。曲线是定量分析中选择入射光波长的重要根据。3.3.紫外紫外可见分子吸收光谱与电子跃迁可见分子吸收光谱与电子跃迁 物质分子内部三种运动方式：物质分子内部三种运动方式： 1 1电子相对于原子核的运动电子相对于原子核的运动 2 2原子核在其平衡位置附近的相对振动原子核在其平衡位置附近的相对振动 3 3分子本身绕其重心的转

10、动分子本身绕其重心的转动 分子具有三种不同能级：电子能级、振动能级和转动能级分子具有三种不同能级：电子能级、振动能级和转动能级 三种能级都是量子化的，且各自具有相应的能量三种能级都是量子化的，且各自具有相应的能量 分子的内能：电子能量分子的内能：电子能量Ee Ee 、振动能量、振动能量Ev Ev 、转动能量、转动能量ErEr 即即 E EEe+Ev+ErEe+Ev+Er evr evr 能级跃迁能级跃迁 紫外紫外- -可见光谱属于电子可见光谱属于电子跃迁光谱。跃迁光谱。 电子能级间跃迁的同时电子能级间跃迁的同时总伴随有振动和转动能级间总伴随有振动和转动能级间的跃迁。即电子光谱中总包的跃迁。即电

11、子光谱中总包含有振动能级和转动能级间含有振动能级和转动能级间跃迁产生的假设干谱线而呈跃迁产生的假设干谱线而呈现宽谱带。现宽谱带。讨论：讨论：11 1转动能级间的能量差转动能级间的能量差ErEr：0.0050.0050.050eV0.050eV，跃迁，跃迁产生吸收光谱位于远红外区。远红外光谱或分子转动光谱；产生吸收光谱位于远红外区。远红外光谱或分子转动光谱；12 2振动能级的能量差振动能级的能量差EvEv约为：约为：0.050.05eVeV，跃迁产，跃迁产生的吸收光谱位于红外区，红外光谱或分子振动光谱；生的吸收光谱位于红外区，红外光谱或分子振动光谱；13 3电子能级的能量差电子能级的能量差EeE

12、e较大较大1 120eV20eV。电子跃迁产。电子跃迁产生的吸收光谱在紫外生的吸收光谱在紫外可见光区，紫外可见光区，紫外可见光谱或分子的可见光谱或分子的电子光谱电子光谱讨论：讨论：1 4吸收光谱的波长分布是由产生谱带的跃迁能级间的能量差所决议，反映了分子内部能级分布情况，是物质定性的根据。1 5吸收谱带强度与分子偶极矩变化、跃迁几率有关，也提供分子构造的信息。通常将在最大吸收波优点测得的摩尔吸光系数max也作为定性的根据。不同物质的max有时能够一样，但max不一定一样；1 6吸收谱带强度与该物质分子吸收的光子数成正比，定量分析的根据。三、分子吸收光谱与电子跃迁三、分子吸收光谱与电子跃迁紫外紫

13、外可见吸收光谱可见吸收光谱 有机化合物的紫外有机化合物的紫外可见吸收光谱，是可见吸收光谱，是其分子中外层价电子跃迁的结果三种：其分子中外层价电子跃迁的结果三种：电子、电子、电子、电子、n n电子。电子。 分子轨道实际：一个成分子轨道实际：一个成键轨道必定有一个相应的反键轨道必定有一个相应的反键轨道。通常外层电子均处键轨道。通常外层电子均处于分子轨道的基态，即成键于分子轨道的基态，即成键轨道或非键轨道上。轨道或非键轨道上。 外层电子吸收紫外或可见辐射后，就从基态向激发态外层电子吸收紫外或可见辐射后，就从基态向激发态( (反键轨道反键轨道) )跃迁。主要有四种跃迁所需能量跃迁。主要有四种跃迁所需能

14、量大小顺序为大小顺序为：nn n n 11跃迁跃迁 所需能量最大，电子只需吸收远紫外光的能量才干发生跃迁。饱和烷烃的分子吸收光谱出如今远紫外区(吸收波长200nm200nm。这类跃迁在跃迁选律。这类跃迁在跃迁选律上属于禁阻跃迁，摩尔吸光系数普通为上属于禁阻跃迁，摩尔吸光系数普通为1010100 100 Lmol-1 cm-1Lmol-1 cm-1，吸收谱带强度较弱。分子中孤对电子和，吸收谱带强度较弱。分子中孤对电子和键同时存在时发生键同时存在时发生n n 跃迁。丙酮跃迁。丙酮n n 跃迁的跃迁的为为275nm max275nm max为为22 Lmol-1 cm -122 Lmol-1 cm

15、-1溶剂环己烷溶剂环己烷) )。生色团与助色团生色团与助色团生色团：生色团： 最有用的紫外最有用的紫外可见光谱是由可见光谱是由和和nn跃迁产跃迁产生的。这两种跃迁均要求有机物分子中含有不饱和基团。这生的。这两种跃迁均要求有机物分子中含有不饱和基团。这类含有类含有键的不饱和基团称为生色团。简单的生色团由双键键的不饱和基团称为生色团。简单的生色团由双键或叁键体系组成，如乙烯基、羰基、亚硝基、偶氮基或叁键体系组成，如乙烯基、羰基、亚硝基、偶氮基NNNN、乙炔基、腈基、乙炔基、腈基CNCN等。等。助色团：助色团： 有一些含有有一些含有n n电子的基团电子的基团( (如如OHOH、OROR、NHNH、N

16、HRNHR、XX等等) )，它们本身没有生色功能，它们本身没有生色功能( (不能吸收不能吸收200nm200nm的光的光) )，但当它们与生色团相连时，就会发生，但当它们与生色团相连时，就会发生nn共轭作用，加强共轭作用，加强生色团的生色才干生色团的生色才干( (吸收波长向长波方向挪动，且吸收强度添吸收波长向长波方向挪动，且吸收强度添加加) )，这样的基团称为助色团。，这样的基团称为助色团。红移与蓝移红移与蓝移 有机化合物的吸收谱带经常因引入取代基或改动溶剂使最大吸收波长max和吸收强度发生变化: max向长波方向挪动称为红移，向短波方向挪动称为蓝移 (或紫移)。吸收强度即摩尔吸光系数增大或减

17、小的景象分别称为增色效应或减色效应，如下图。四、光的吸收定律四、光的吸收定律 1.朗伯比耳定律 布格(Bouguer)和朗伯(Lambert)先后于1729年和1760年阐明了光的吸收程度和吸收层厚度的关系。Ab 1852年比耳(Beer)又提出了光的吸收程度和吸收物浓度之间也具有类似的关系。A c 二者的结合称为朗伯二者的结合称为朗伯比耳定律，其数学表达式为：比耳定律，其数学表达式为： 朗伯朗伯比耳定律数学表达式比耳定律数学表达式lcEAcm%11%11cmE%11cmE AlgI0/It)= b c 式中A：吸光度；描画溶液对光的吸收程度； b：液层厚度(光程长度)，通常以cm为单位； c

18、：溶液的摩尔浓度，单位molL； ：摩尔吸光系数，单位Lmolcm； 或: c：溶液的浓度，单位g100mL ：吸光系数，单位100mLgcm 与的关系为： M为摩尔质量 %1110cmEM透光度透光度( (透光率透光率)T)T透过度透过度T : 描画入射光透过溶液的程度描画入射光透过溶液的程度: T = I t / I0吸光度吸光度A与透光度与透光度T的关系的关系: A lg T 朗伯比耳定律是吸光光度法的实际根底和定量测定的根据。运用于各种光度法的吸收丈量； 摩尔吸光系数在数值上等于浓度为1 mol/L、液层厚度为1cm时该溶液在某一波长下的吸光度； 吸光系数 相当于浓度为1 g/100m

19、L、液层厚度为1cm时该溶液在某一波长下的吸光度。%11cmE2.2.摩尔吸光系数摩尔吸光系数的讨论的讨论 1吸收物质在一定波长和溶剂条件下的特征常数； 2不随浓度c和光程长度b的改动而改动。在温度和波长等条件一定时，仅与吸收物质本身的性质有关，与待测物浓度无关； 3可作为定性鉴定的参数； 4同一吸收物质在不同波长下的值是不同的。在最大吸收波长max处的摩尔吸光系数，常以max表示。max阐明了该吸收物质最大限制的吸光才干，也反映了光度法测定该物质能够到达的最大灵敏度。 摩尔吸光系数摩尔吸光系数的讨论的讨论5 5maxmax越大阐明该物质的吸光才干越强，用光度法测越大阐明该物质的吸光才干越强，

20、用光度法测定该物质的灵敏度越高。定该物质的灵敏度越高。105105：超高灵敏；：超高灵敏； =(6 =(61010104 104 ：高灵敏；：高灵敏； 2 2104 104 ：不灵敏。：不灵敏。6 6在数值上等于浓度为在数值上等于浓度为1mol/L1mol/L、液层厚度为、液层厚度为1cm1cm时该时该溶液在某一波长下的吸光度。溶液在某一波长下的吸光度。3.3.偏离朗伯偏离朗伯比耳定律的缘由比耳定律的缘由 规范曲线法测定未知溶液的浓度时，发现：规范曲线常发生弯曲尤其当溶液浓度较高时，这种景象称为对朗伯比耳定律的偏离。 引起这种偏离的要素两大类： 1物理性要素，即仪器的非理想引起的； 2化学性要

21、素。1物理性要素物理性要素 难以获得真正的纯单色光。难以获得真正的纯单色光。 朗朗比耳定律的前提条件之一是入射光为单色光。比耳定律的前提条件之一是入射光为单色光。 分光光度计只能获得近乎单色的狭窄光带。复合光可导分光光度计只能获得近乎单色的狭窄光带。复合光可导致对朗伯致对朗伯比耳定律的正或负偏离。比耳定律的正或负偏离。 非单色光、杂散光、非平行入射非单色光、杂散光、非平行入射光都会引起对朗伯光都会引起对朗伯比耳定律的偏离，比耳定律的偏离，最主要的是非单色光作为入射光引起最主要的是非单色光作为入射光引起的偏离。的偏离。 (2) (2) 化学性要素化学性要素 朗比耳定律的假定：一切的吸光质点之间不

22、发生相互作用；假定只需在稀溶液(c10 2 mol/L 时，吸光质点间能够发生缔合等相互作用，直接影响了对光的吸收。 故：朗伯比耳定律只适用于稀溶液。 溶液中存在着离解、聚合、互变异构、配合物的构成等化学平衡时。使吸光质点的浓度发生变化，影响吸光度。 例： 铬酸盐或重铬酸盐溶液中存在以下平衡： CrO42- 2H = Cr2O72- H2O 溶液中CrO42-、 Cr2O72-的颜色不同，吸光性质也不一样。故此时溶液pH 对测定有重要影响。(3)偏离比尔定律的其他要素偏离比尔定律的其他要素 1. 待测组分的浓度过高待测组分的浓度过高 2. 谱带宽度过大谱带宽度过大 3. pH值的影响值的影响

23、4. 杂质的影响杂质的影响 5. 光散射的影响光散射的影响第二章第二章 紫外紫外可见分可见分光光度法光光度法一、根本组成一、根本组成二、分光光度计的类型二、分光光度计的类型第二节第二节 紫外紫外可见分光可见分光光度计光度计仪器仪器 可见分光光度计仪器仪器 紫外-可见分光光度计一、根本组成一、根本组成光源单色器样品室检测器显示1. 1. 光源光源 在整个紫外光区或可见光谱区可以发射延续光在整个紫外光区或可见光谱区可以发射延续光谱，具有足够的辐射强度、较好的稳定性、较长的谱，具有足够的辐射强度、较好的稳定性、较长的运用寿命。运用寿命。 可见光区：钨灯作为光源，其辐射波长范围在3202500 nm。

24、 紫外区：氢、氘灯。发射185400 nm的延续光谱。 2.单色器 将光源发射的复合光分解成单色光并可从中选出一任波长单色光的光学系统。 入射狭缝：光源的光由此进入单色器； 准光安装：透镜或返射镜使入射光成为平行光束； 色散元件：将复合光分解成单色光；棱镜或光栅； 聚焦安装：透镜或凹面反射镜，将分光后所得单色光聚焦至出射狭缝； 出射狭缝。3. 3. 样品室样品室 样品室放置各种类型的吸收池比色皿和相应的池架附件。吸收池主要有石英池和玻璃池两种。在紫外区须采用石英池，可见区普通用玻璃池。4. 检测器 利用光电效应将透过吸收池的光信号变成可测的电信号，常用的有光电池、光电管或光电倍增管。5. 5.

25、 结果显示记录系统结果显示记录系统 检流计、数字显示、微机检流计、数字显示、微机进展仪器自动控制和结果处置进展仪器自动控制和结果处置二、分光光度计的类型二、分光光度计的类型1.1.单光束单光束 简单，价廉，适于在给定波优点丈量吸简单，价廉，适于在给定波优点丈量吸光度或透光度，普通不能作全波段光谱扫描，要光度或透光度，普通不能作全波段光谱扫描，要求光源和检测器具有很高的稳定性。求光源和检测器具有很高的稳定性。2.2.双光束双光束 自动记录，快速全自动记录，快速全波段扫描。可消除光波段扫描。可消除光源不稳定、检测器灵源不稳定、检测器灵敏度变化等要素的影敏度变化等要素的影响，特别适宜于构造响，特别适

26、宜于构造分析。仪器复杂，价分析。仪器复杂，价钱较高。钱较高。3.3.双波长双波长 将不同波长的两束单色光将不同波长的两束单色光(1(1、2) 2) 快束交替经过同快束交替经过同一吸收池而后到达检测器。产生交流信号。无需参比池。一吸收池而后到达检测器。产生交流信号。无需参比池。=1=12nm2nm。两波长同时扫描即可获得导数光谱。两波长同时扫描即可获得导数光谱。第二章第二章 紫外紫外-可见分光可见分光光度法光度法一、显色反响的选择一、显色反响的选择二、显色反响条件的选择二、显色反响条件的选择三、共存离子干扰的消除三、共存离子干扰的消除四、测定条件的选择四、测定条件的选择五、提高光度测定灵敏度五、

27、提高光度测定灵敏度和选择性的途径和选择性的途径第三节第三节 显色与丈量条件显色与丈量条件的选择的选择一、显色反响的选择一、显色反响的选择1.1.选择显色反响时，应思索的要素选择显色反响时，应思索的要素 灵敏度高、选择性高、生成物稳定、显灵敏度高、选择性高、生成物稳定、显色剂在测定波优点无明显吸收，两种有色物色剂在测定波优点无明显吸收，两种有色物最大吸收波长之差：最大吸收波长之差：“对比度，要求对比度，要求 60nm 60nm。2.2.配位显色反响配位显色反响 当金属离子与有机显色剂构成配合当金属离子与有机显色剂构成配合物时，通常会发生电荷转移跃迁，产生很强物时，通常会发生电荷转移跃迁，产生很强

28、的紫外的紫外可见吸收光谱。可见吸收光谱。3.3.氧化复原显色反响氧化复原显色反响 某些元素的氧化态，如Mn、Cr在紫外或可见光区能剧烈吸收，可利用氧化复原反响对待测离子进展显色后测定。 例如：钢中微量锰的测定，Mn2不能直接进展光度测定 2 Mn2 5 S2O82-8 H2O =2 MnO4 + 10 SO42- 16H+ 将Mn2 氧化成紫红色的MnO4后，在525 nm处进展测定。4.4.显色剂显色剂 无机显色剂：硫氰酸盐、钼酸铵、过氧化氢等几种。无机显色剂：硫氰酸盐、钼酸铵、过氧化氢等几种。 有机显色剂：种类繁多有机显色剂：种类繁多 偶氮类显色剂：本身是有色物质，生成配合物后，颜偶氮类显

29、色剂：本身是有色物质，生成配合物后，颜色发生明显变化；具有性质稳定、显色反响灵敏度高、选色发生明显变化；具有性质稳定、显色反响灵敏度高、选择性好、对比度大等优点，运用最广泛。偶氮胂择性好、对比度大等优点，运用最广泛。偶氮胂、PARPAR等。等。 三苯甲烷类：铬天青三苯甲烷类：铬天青S S、二甲酚橙等、二甲酚橙等二、显色反响条件的选择二、显色反响条件的选择1.1.显色剂用量显色剂用量 吸光度吸光度A A与显色剂用与显色剂用量量CRCR的关系会出现如下图的关系会出现如下图的几种情况。选择曲线变的几种情况。选择曲线变化平坦处。化平坦处。2.2.反响体系的酸度反响体系的酸度 在一样实验条件下，分别测定

30、不同在一样实验条件下，分别测定不同pHpH值条件下显色溶液的吸光度。选择曲线中值条件下显色溶液的吸光度。选择曲线中吸光度较大且恒定的平坦区所对应的吸光度较大且恒定的平坦区所对应的pHpH范范围。围。3.3.显色时间与温度显色时间与温度 实验确定实验确定4.4.溶剂溶剂 普通尽量采用水相测定，普通尽量采用水相测定，三、共存离子干扰的消除三、共存离子干扰的消除1.1.参与掩蔽剂参与掩蔽剂 选择掩蔽剂的原那么是：掩蔽剂不与待测组分选择掩蔽剂的原那么是：掩蔽剂不与待测组分反响；掩蔽剂本身及掩蔽剂与干扰组分的反响产物反响；掩蔽剂本身及掩蔽剂与干扰组分的反响产物不干扰待测组分的测定。不干扰待测组分的测定。

31、 例：测定例：测定Ti4Ti4，可参与，可参与H3PO4H3PO4掩蔽剂使掩蔽剂使Fe3+(Fe3+(黄色黄色) )成为成为Fe(POFe(PO)23-()23-(无色无色) )，消除消除Fe3+Fe3+的干扰；又如用铬天菁的干扰；又如用铬天菁S S光度法测定光度法测定Al3+Al3+时，参与抗坏血酸作掩蔽剂将时，参与抗坏血酸作掩蔽剂将Fe3+Fe3+复原为复原为Fe2+Fe2+，消，消除除Fe3+Fe3+的干扰。的干扰。2.2.选择适当的显色反响条件选择适当的显色反响条件3.3.分别干扰离子分别干扰离子四、测定条件的选择四、测定条件的选择1.1.选择适当的入射波长选择适当的入射波长 普通应该

32、选择普通应该选择maxmax为入射光波长。为入射光波长。 假设假设maxmax处有共存组分干扰时，那么应思索处有共存组分干扰时，那么应思索选择灵敏度稍低但能防止干扰的入射光波长。选择灵敏度稍低但能防止干扰的入射光波长。 2.选择适宜的参比溶液 为什么需求运用参比溶液？为什么需求运用参比溶液？ 测得的的吸光度真正反映待测溶液吸光强度。测得的的吸光度真正反映待测溶液吸光强度。 参比溶液的选择普通遵照以下原那么：参比溶液的选择普通遵照以下原那么： 假设仅待测组分与显色剂反响产物在测定波优点有吸假设仅待测组分与显色剂反响产物在测定波优点有吸收，其它所加试剂均无吸收，用纯溶剂水收，其它所加试剂均无吸收，

33、用纯溶剂水) )作参比溶液；作参比溶液； 假设显色剂或其它所加试剂在测定波优点略有吸收，假设显色剂或其它所加试剂在测定波优点略有吸收，而试液本身无吸收，用而试液本身无吸收，用“试剂空白试剂空白( (不加试样溶液不加试样溶液) )作参比作参比溶液；溶液；参比溶液的选择普通遵照以下原那么：参比溶液的选择普通遵照以下原那么： 假设待测试液在测定波优点有吸收，而显色剂等无吸假设待测试液在测定波优点有吸收，而显色剂等无吸收，那么可用收，那么可用“试样空白试样空白( (不加显色剂不加显色剂) )作参比溶液；作参比溶液； 假设显色剂、试液中其它组分在丈量波优点有吸收，假设显色剂、试液中其它组分在丈量波优点有

34、吸收，那么可在试液中参与适当掩蔽剂将待测组分掩蔽后再加显色那么可在试液中参与适当掩蔽剂将待测组分掩蔽后再加显色剂，作为参比溶液。剂，作为参比溶液。3.3.控制适宜的吸光度读数范围控制适宜的吸光度读数范围 不同的透光度读数，产生的误差大小不同：不同的透光度读数，产生的误差大小不同： lgT=bclgT=bc微分：微分：dlgTdlgT0.434dlnT = - 0.434T -1 dT =b dc0.434dlnT = - 0.434T -1 dT =b dc两式相除得：两式相除得： dc/c = dc/c = 0.434 / TlgT 0.434 / TlgT dT dT 以有限值表示可得：以

35、有限值表示可得： c/c = c/c =0.434/TlgT0.434/TlgTT T 浓度丈量值的相对误差浓度丈量值的相对误差c/cc/c不仅与仪器的透不仅与仪器的透光度误差光度误差T T 有关，而且与其透光度读数有关，而且与其透光度读数T T 的值也有关。的值也有关。 能否存在最正确读数范围？何值时误差最小？能否存在最正确读数范围？何值时误差最小？ 最正确读数范围与最正确值最正确读数范围与最正确值 设：设：T =1%T =1%，那么可绘出溶液浓，那么可绘出溶液浓度相对误差度相对误差c/cc/c与其透光度与其透光度T T 的关系的关系曲线。如下图：曲线。如下图： 当：当：T =1%T =1%

36、，T T 在在20%20%65%65%之间时，浓度相对误差较小，最正确之间时，浓度相对误差较小，最正确读数范围。读数范围。 可求出浓度相对误差最小时的透光度可求出浓度相对误差最小时的透光度Tmin为：为： Tmin36.8%, Amin0.434 用仪器测定时应尽量使溶液透光度值在用仪器测定时应尽量使溶液透光度值在T %=20T %=2065% (65% (吸光度吸光度 A =0.70 A =0.700.20)0.20)。第二章第二章 紫外紫外- -可见可见分光光度法分光光度法一、普通分光光度法一、普通分光光度法二、示差分光光度法二、示差分光光度法三、双波长分光光度法三、双波长分光光度法四、导数分光光度法四、导数分光光度法第四节第四节 分光光度测定方法分光光度测定方法一、普通分光光度法一、普通分光光度法1.1.单组分的测定单组分的测定 通常采用通常采用 A-C A-C 规范曲线法定规范曲线法定量测定。量测定。2.2.多组分的同时测定多组分的同时测定 假设各组分的吸收曲线互不假设各组分的吸收曲线互不重叠