植物生长调节物质对甘蓝下胚轴愈伤组织培养试验

1、江苏农林职业技术学院毕业设计（论文）不同植物生长调节物质对甘蓝下胚轴愈伤组织诱导的影响专 业 生物技术及应用学生姓名张鑫班 级06生物技术及应用学 号 2104026指导教师走刚完成日期成绩评议学号 2104026 姓名 张鑫题目不同植物生长调节物质对甘蓝下胚轴愈伤组织诱导的影响指导教师建议成绩：评阅教师建议成绩：答辩小组建议成绩：院答辩委员会评阅意见及评定成绩：答辩委员会主任签字（盖章）： 年 月 日毕业设计（论文）任务书姓名张金金学号2104026班级06生物技术及应用题目不同植物生长调节物质对甘蓝卜-胚轴愈伤组织诱导的影响i ( i) 三 1 P z以M助基本培养基，添加不同激素配比的细

2、胞分裂素KT和生长素2,4-D 。根据植物生长调节物质种类和配比不同配制六种培养基对甘蓝下胚轴进行愈伤组织的诱导和分化，分析实验结果，探讨植物生长调节物质对愈伤组织的诱导和分化的影响重点研究问题不向激素配比的细胞分裂素KT和生长素2,4-D对甘直下胚轴进行愈伤组织的诱导和分化的影响3 号 主7;1 .无国操作技术2 .外植体选择3 .母液配制4 .组织培养条件的控制号 爹I 白是1 .在接种过程中可能出现污染问题，以及在组织培养过程中出现玻璃化或褐化的 问题.2 .细胞分裂素和生长素的比例不同对愈伤组织诱导的影响。3 . KT和2,4-D对愈伤组织生根的影响。丰 4 If 晅指导教师签字：年

3、月 日指导教师意见对论文的简短评价:1 .指出论文存在的问题及错误2 .对创造性工作评价3 .建议成绩优 良 中 及格 不及格指导教师签字年 月 日评阅教师意见对论文的简短评价:1 .指出论文存在的问题及错误2 .对创造性工作评价3 .建议成绩优 良 中 及格 不及格评阅教师签字年 月 日答辩小组评议意见学号 2104026 姓名 张鑫题目不同植物生长调节物质对甘蓝下胚轴愈伤组织诱导的影响答辩小组意见:1、对论文的评价2 .建议成绩等级优 良 中 及格 不及格3 .需要说明的问题答辩小组长签字年 月 日不同植物生长调节物质对甘蓝下胚轴愈伤组织诱导的影响江苏农林职业技术学院06 生物技术及应用张

4、鑫摘要：以MS培养基为基础，添加植物生长调节物质生长素和细胞分裂素，对甘蓝下胚轴进行愈伤 组织培养，分析生长素和细胞分裂素在愈伤组织培养过程中，对愈伤组织的诱导和生长的影响，为植物愈伤组织培养提供参考。关键词：生长素；细胞分裂素；愈伤组织；组织培养Different Plant Growth Regulators on Brassica hypocotyl callus inductionBiotechnology 06 (2) classes Zhang XinAbstract ： MS-based medium, add the plant growth regulators auxin

5、and cytokinin, on the cabbage hypocotyl callus tissue culture for analysis of auxin and cytokininin the processof callus tissue culture of callus Induction and growth of, for callus tissue culture plants for reference.Key words: auxin ； cytokinin ； callus ； tissue culture目录1 弓I百32 材料与方法3夕卜植体的获取3植物生长

6、调节物质的选择3培养基配制4诱导愈伤组织培养4实验观察43 结果和分析5不同激素组合和配比对愈伤组织发生的影响5不同激素组合和配比对愈伤组织根分化的影响54 小结5参考文献7致谢8不同植物生长调节物质对甘蓝下胚轴愈伤组织诱导的影响江苏农林职业技术学院06 生物技术及应用张鑫摘要：以MS培养基为基础，添加植物生长调节物质生长素和细胞分裂素，对甘蓝下胚轴进行愈伤组织培养，分析生长素和细胞分裂素在愈伤组织培养过程中，对愈伤组织的诱导和生长的影响，为植物愈伤组织培养提供参考。关键词：生长素；细胞分裂素；愈伤组织；组织培养Plant Growth Regulators on Brassica hypoc

7、otyl callus induction Biotechnology 06 (2) classes Zhang XinAbstract ： MS-based medium, add the plant growth regulators auxin and cytokinin, on thecabbage hypocotyl callus tissue culture for analysis of auxin and cytokinin in the process of callus tissue culture of callus Induction and growth of, fo

8、r callus tissue culture plants for reference.Key words: auxin ； cytokinin ； callus ； tissue culture1 . 引言MS养基是是一种具有较高的无机盐浓度，能够满足组织生长所需的矿质营养，还能加速愈伤组织和培养物的生长1。由于配方中的离子浓度高，在配制、贮存和消毒等过程中，即使有些成分略有出入，也不会影响离子间的平衡。MS培养基的无机养分的数量和比例比较合适，足以满足植物细胞在营养上和生理上的需要。因此，一般情况下，不用再添加氨基酸、酪蛋白水解物、酵母提取物及椰子汁等有机附加物。和其它培养基的基本成分相

9、比， MSW养基中硝酸盐含量大，而且还有一定数量的 钱盐，因此培养基中含有大量氮、钾，这是它的显着特点。本试验以MS培养基为基础，添加不同种类和配比的植物生长调节物质，探寻它们在植物愈伤组织培养过程中，对外植体愈伤组织发生和根分化的作用和影响，为植物组培快繁技术提供参考。2 . 材料与方法外植体的获取选取健康饱满的甘蓝种子，在无菌条件下用70%勺酒精浸泡约30 s,取出种子用无菌水冲洗35次，再用 取汞浸？6消毒78min,倒出升汞，用无菌水洗涤45次后，接种 到含有15ml培养基(经过高压蒸汽灭菌，不加植物生长物质的 MS®养基)的试管中，置 于温度2230C,光照时间14h/ d

10、,光强3000lx的条件下培养。约14天后可获得无菌苗 2。植物生长调节物质的选择植物生长调节物质主要包括细胞分裂素和生长素，在试验中选取实验室最常用的细胞分裂素KT和生长素2, 4-Do KT能促进细胞的分裂和分化，延缓组织的衰老并增强蛋白质合成，经高温高压灭菌后性能仍然稳定；2 ， 4-D 生理活性强，诱导快，稳定性高3 ，在120c仍然稳定，有利于愈伤组织形成，但容易引起培养物突变4,使细胞老化，不利于根的形成。培养基配制以MS为基本培养基，添加不同激素配比的细胞分裂素 KT和生长素2,4-D。根据植物 生长物质种类和配比不同配制六种培养基（见表1）。在高压灭菌之前将pH用L氢氧化钠调至

11、，每只培养瓶分装15ml,经高压蒸汽灭菌处理后，冷却储藏于没有强光照射的专用柜 中备用5。表1不同培养基的差异培养基类型基本培养基激素种类和调控水平蔗糖（g/ L ）琼脂（g/ L ）KT (mg/L)2,4-D(mg/L)MS 1MS05307MS 2MS100307MS 3MS307MS 4MS307MS 5MS307MS 6MS0307诱导愈伤组织培养从步骤的试验中，选取苗龄为714天，生长整齐的无菌苗作为外植体，在超净工作 台上切除切除子叶和胚根，保留下胚轴，放在无菌滤纸上6。然后将下胚轴直接剪成0.5cm 左右的切断，接种到已配制好的 MS 1、MS 2、MS 3、MS 4 MS S

12、 MS 6中，每瓶接种三 到四个切断，每种培养基接种 3040瓶。将制备好的材料置于28c左右，光强20001X , 每日光照14h的环境中进行愈伤组织诱导培养70实验观察定期观察愈伤组织的生长情况，并详细记录接种材料生长、分化及污染情况。在培养7天时统计污染率，培养21天时统计愈伤组织的诱导率和根的分化率， 并称量愈伤组织的 生长量。出愈率二发生愈伤组织白下胚轴数目/接种下胚轴的总数目x 100%根分化率二分化根的下胚轴数目/接种下胚轴的总数目X 100%污染率= 亏染瓶数/接种瓶数X 100%愈伤组织生长量(g)=愈伤组织的总生长量/下胚轴的总数目在出愈率、根分化率、愈伤组织生长量的计算中

13、，不计算污染的下胚轴的数目8。3 .结果和分析在接种7天、21天后，观察实验材料并统计结果如下：表2甘蓝下胚轴诱导愈伤组织培养结果统计胚轴数目1口加个发生数生长量(g)出愈率(%发生数发生率(%污染数(%MS 19278%00MS 211895%2%9MS 39993%2%MS 48267%6%MS 59839%006MS 65813%3%表3甘蓝下胚轴诱导愈伤组织培养生长情况统计培养基愈伤组织发生根分化生长情况生长量质地与颜色发生情况MS 1不好F更色或褐色无无MS 2F浅绿色差很少MS 3良好最高乳更色或绿色差很少MS 4不好少更色或褐色差很少MS 5不好少原;色无无MS 6差很少淡绿色差

14、很少不同激素组合和配比对愈伤组织发生的影响由上表（2）和表（3）可见，将甘蓝下胚轴接种到六种不同激素组合的培养基中，培 养21天后，观察试验结果，培养基 MS 1、MS 2 MS 3、MS 4 MS 5 MS 6都可以诱导 愈伤组织发生。在 MS 1、MS 2 MS 6三种只含一种激素，细胞分裂素 KT或生长素2,4-D 起调控作用的培养基上，愈伤组织生长量和出愈率都是同组水平中最低的。而在细胞分裂 素KT生长素2,4-D共同起调控作用的MS 3 MS 4 MS 5培养基上，愈伤组织生长量和出 愈率都是同组水平中最高的。表明在一定浓度范围内（在植物组织培养过程中生长素和细 胞分裂素使用浓度通常

15、为10 mg/L9）细胞分裂素和生长素配合使用，可以弥补彼此的缺 陷，有利于诱导愈伤组织发生和生长，使愈伤组织培养达到最佳的效果。激素水平在1mg/L10 mg/L MS 1、MS 2、MS 3培养基，比激素水平在 LL MS 4、MS 5 MS 6培养 基愈伤组织的生长量和出愈率高。说明激素水平在1mg/L10 mg/L之间更加有利于愈伤组织的发生和生长。在添加 mg/L KT和5mg/L 2,4-D,细胞分裂素和生长素比为1 ： 5,生 长素在组织培养过程起主导作用的 MS 3培养基上，和添加 mg/L KT和L 2,4-D ,细胞分 裂素和生长素比也为1 ： 5,生长素在组织培养过程起主

16、导作用的MS 4培养基上，愈伤组织生长量和出愈率都是同水平中最大。说明细胞分裂素和生长素配比为1 ： 5的培养基，更加有利于培养基有愈伤组织的发生和生长。不同激素组合和配比对愈伤组织根分化的影响试验结果表明，只有 MS 2、MS 3、MS 4 MS 6四种培养基有愈伤组织根的分化，且 分化率很低，MS1、MS5两种培养基则没有愈伤组织根的分化。说明这六种培养基中的激 素种类或配比不能很好的诱导愈伤组织根的分化。在生产实践中可以采用调整激素种类和 配比或进行继代培养的方法来促进愈伤组织根的分化，提高愈伤组织根的分化率。4 .小结激素可调控器官发生，但在不同组织中这些激素的内水平不同，因而对于某一

17、具体形态发生过程来说，它们所要求的外源激素的水平也有所不同10。 通过本次试验的结果表明：植物生长调节物质在愈伤组织培养中具有重要作用，细胞分裂素和生长素结合在一起使用最适合愈伤组织的生长和根的分化；在MS培养基基础上，加入细胞分裂素和生长素的不同种类和不同配比，对愈伤组织的发生和根的分化有不同程度的影响。MS3 培养基在此试验中采用细胞分裂素KT和生长素2,4-D组合，尤其是浓度在110 mg/L,且细胞分裂素和生长素比为1 ： 5的培养基上(愈伤组织的形成和分化，不仅与激素的绝对含量有关，而且还取决于细胞分素和生长素比例11)，愈伤组织发生和生长都很明显，但对根的分化作用却不明显。因此在以

18、后的植物组培实践中，可以选用其他种类的激素组合和浓度配比，或进行继代培养的方法进行诱导根的分化，提高愈伤组织根的分化和生长，以达到最佳的组培快繁效果。参考文献1 赵国凡 , 王兴理 . 植物组织培养概论. 大连 : 大连工学院出版社,19882 董建新等. 除虫菊愈伤组织的诱导和继代. 西北农林科技大学学报( 自然科学版),2004,32(3):773廖劲松,郭勇.微甘菊愈伤组织的诱导及培养研究.山东农业大学学报.2004 , 35(4)5215254刘忠荣，洪波.培养因素对菊花组织培养的影响.广西农业科学2004(1)19215 裘文达 , 曹孜义 . 植物组织培养实用技术. 北京 : 高等教育出版社,19896 杨增海 . 园艺植物组织培养. 北京 : 农业出版社,19877 李浚明 . 植物组织培养教程. 北京 : 北京农业大学出版社,20008 中国科学院上海植物生理研究所, 上海市植物生理学会