艾滋病实验室质量管理与控制

1、检测流程一览病人病人填写检测申请单填写检测申请单并抽取血样并抽取血样样本接收区样本接收区u接收检测申请单及血样u检查样本质量u检查检测申请单u样本编号、登记检测实验室检测实验室u样本编排、登记u样本制备、检测u检查并核对检测结果u填写检测结果表格u检查检测结果表格u检测结果留档医护人员医护人员病人病人检测结果的管理检测结果的管理u转送清单u接收检测结果u将检测结果放入病人的病历转送样本及转送样本及检测申请单检测申请单检测结果检测结果发送发送门诊门诊实验室实验室门诊门诊转送到转送到实验室实验室转送清单转送清单一、质量保证（QA) 1、行政支持 将艾滋病检测实验室的建设、发展和质量管理纳入地方卫生

2、行政规划，保证实验室负责人和主要技术人员队伍的稳定，保证实验室建筑和设备需要，给予充足的经费支持，并进行经常性监督检查。2、人员培训及其评价 检测技术人员需经过上岗培训和在岗持续培训。上岗培训内容至少应包括：艾滋病检测相关基础知识，艾滋病相关检测技术及管理要求，实验操作，质量保证与质量控制，生物安全。要求掌握相关专业知识和技能，能独立熟练地操作，并经考核合格，持证上岗。在岗持续培训指在工作中要根据需要接受复培训，确证实验室技术人员每年至少1次，筛查实验室技术人员至少每2年1次，除接受检测基本培训内容外，要求了解相关技术、质控及安全要求的新进展。 实验室在使用新方法前，须对技术人员进行培训，获得

3、资格后方可开展相应工作。 检测人员应分为检验人、复核人、签发人。复核人、签发人应具备对检测过程进行分析和解决问题的能力。3、环境条件艾滋病筛查中心实验室及艾滋病筛查实验室 （1）、建筑条件 实验室或检测区域应分为清洁区、半污染区和污染区，应符合二级生物安全实验室（BSL-2）要求。 （2）、仪器设备条件 配备艾滋病病毒抗体筛查试验所需设备，至少包括酶标读数仪、洗板机、普通冰箱、水浴箱（或温箱）、离心机、加样器（仪）、消毒与污物处理设备、实验室恒温设备、安全防护用品和生物安全柜。艾滋病检测点 （1）、建筑条件 需有艾滋病检测区域或专用实验台，能开展简便、快速检测。 （2）、设备条件 需配备快速试

4、验所必须的物品，包括普通冰箱、消毒与污物处理设备、一次性消耗品、安全防护用品。注：HCV，HBV及梅毒等血清学检测在满足实验室管理要求和保证生物安全的条件下，可以与HIV检测共享空间和设备，应避免交叉污染。 4.标本采集、运送和处理 5、检测方法和试剂的选择 所用试剂必须是经国家食品药品监督管理局注册批准、批批检合格、在有效期内的试剂。 应使用可靠的检测方法，参比实验室和确证中心实验室应对新方法进行评估。应选择敏感性高、特异性好的试剂，参比实验室定期组织国家级艾滋病诊断试剂临床质量评价。确证中心实验室定期组织对本省内使用的试剂进行评价，或在招标前对拟投标试剂进行质量评价，根据评价结果选择质量好

5、的试剂，并对中标试剂进行质量监督。 各实验室更换试剂批号时，应进行平行试验，即新批号试剂在测定质控品（已知结果）时能够获得与原试剂相同的结果。所有试剂盒须严格按要求条件保存。试剂盒拆封时，要记录拆封时间。6、设备维护与校准 实验室应设立常用仪器的维护及校准制度，以保证检测工作正常运转。必须经国家法定部门定期（每年至少1次）校准的仪器至少包括：酶标仪/洗板机，加样器，温度计，高压灭菌器 。加样器、温湿度计须经计量部门校准。必要时可根据需求每12个季度进行期间核查。其他精密仪器及出具实验结果的仪器，如生物安全柜，全自动蛋白印迹仪，CD4细胞测定仪、病毒载量测定仪、耐药检测仪、离心机等也必须定期（每

6、年1次）校准，可请生产厂家校准。 设备维护及使用记录（1）、酶标读数仪、洗板机 每个工作日核对滤光片波长，检查洗板机管道是否通畅，是否有漏液现象。定期清洁仪器表面，保护光学零件不沾灰尘。定期（每月至少1次）检查洗板机洗涤时各孔是否与相应的冲洗头对位良好；负压是否符合规定要求。定期（每年至少1次）检查、清洗滤光片，如果出现破裂或霉点须更换；根据仪器内具有的校准程序或使用校准板，对滤光片的精密度进行校准并保留记录。 实验过程中发现异常情况，应随时进行处理，可根据使用情况更换必要的部件。 （2）、移液器 定期（每年至少1次）校准，发现异常情况应随时进行校准。标定方法包括有色溶液光谱分析法、称量校准法

7、、同位素计数法以及使用配套校准盒等。校准多道移液器时，必须保证每一个加样头都能够连续、准确地加样。移液器的精密度应在厂家说明书规定的范围内。 （3）、冰箱和孵育箱 每天检查和记录冰箱温度，每个工作日检查记录孵育箱温度，并做好记录。使用经过计量部门校准合格的温度计测量冰箱和孵育箱的实际温度，根据不同规格冰箱和冻存样品性质对温度要求不同，用于冷冻核酸和抗原检测的血浆、淋巴细胞和病毒上清适宜在-70冰箱，要求冰箱温度低于-65；保存抗体检测样品及考核盘适宜在-20冰箱，要求冰箱温度低于-15；放置要求4保存的试剂盒的冰箱温度应在28；用于培养的孵育箱温度误差应小于1 。（4）其他仪器 CD4T淋巴细

8、胞测定仪，病毒载量测定仪，离心机，全自动蛋白印迹仪，生物安全柜，高压灭菌器等，每次使用前检查仪器是否处于正常运转状态，并做好记录。使用过程中或使用后检查发现问题，应及时报告，并请专业公司进行维修，直至运转正常。实验耗材 实验室需选购质量优良的耗材，以保证检测工作安全和结果的可靠性，并定期（每批次）或在更换产品时对耗材进行质量评价。 7、文件和文件管理 （1）、 标准操作程序 (SOP) 艾滋病实验室要建立覆盖主要工作内容的SOP文件，应至少建立以下SOP（10个） ：（1）样品的接收、登记、处理、保存和运输；（2）检测方法和步骤；（3）试剂使用和保存；（4）仪器的使用维护和校准；（5）质量控制

9、要求及程序；（6）结果解释与报告；（7）保密程序；（8）实验室数据、相关文件记录与保存；（9）不确定样品追踪和处理；（10）实验室安全防护及实验室的清理和消毒。 确证中心实验室SOP文件至少应包括：满足确证和筛查实验室SOP文件，并包括：阳性样品库管理；省级实验室网络质量保证及质量控制实施程序；省级试剂质量评价方案；实验室现场督导、检查和考核方法；供应品采购程序。 SOP 的应包括的内容 （1）标题和编号；（2）编写和修订日期；（3）编写和修订人员姓名；（4）方法、目的和应用范围；（5）检测设备；（6）试剂及有效期；（7）安全防护相关步骤；（8）结果的解释和报告；（9）附录，包括相关的附加文件

10、如标准表格、设备和试剂盒说明书等。 由各岗位工作人员起草，实验室主任审定，每年修订一次。修订应该在实验室主管人员（技术负责人）的领导下进行。所有工作人员要在所从事工作的SOP文件上签名表示已经阅读并掌握了有关内容。 实验过程中应严格执行标准操作程序（SOP），不得擅自修改。 （2）实验原始记录 应按实验要求，设计试验操作原始记录表，标明空白对照、阳性对照、阴性对照、外部对照以及待检样品的位置，便于指导实验人员加样。要注明试剂盒厂家、测定方法、批号、效期、操作人员和复核人员姓名及检测日期。 （3）、结果报告 分析结果及发出检测报告前，应注意须在试剂盒及外部质控品结果满足要求的前提下，对样品进行分

11、析。试剂盒及外部质控品不合格，样品需要重新检测；复核人对检测结果进行仔细复核并对结果提出结论、签发人对试验结论进行审核、分析、总结、签字。 （4）、HIV标本的保存记录 包括HIV标本的类型、贮存量、贮存温度、贮存起始时间以及标本保管人、复核人姓名。 （5）样品登记和保存 收到样品后，建立唯一编码，及时登记有关信息，包括受检者姓名或代号、试管编号、性别、年龄、职业、送检单位、人群类别、检验结果、送检日期、报告日期、备注（必要时记录通信地址）等。HIV阳性样品的保存记录应包括HIV阳性样品的类型、贮存量、贮存温度、贮存起始时间以及样品保管人姓名。 （5）、 文件存档 实验原始记录表、打印数据、免

12、疫印迹试验的膜反应条带或其照片、检测记录表、样品登记、样品保存记录以及仪器设备维修和校准记录、人员培训记录等都应该妥善存档保存10年以上。最好同时使用计算机保存各种文件和记录 。二、质量控制（QC) 实验室内为达到质量要求的操作技术和活动，适用于得出检验结果所有的步骤和活动。 有些实验室工作人员仅注重画质控图， 这是一种“狭义的” 质控; 检验的全过程质控 (简称：全程质控) 是一种“广义的” 质控。 （室内质量控制和室间质量评价） 1、统计质量控制方法Levey-Jennings控制图方法 Westgard多规则控制方法 累计和方法 平均数和极差方法 趋势分析方法 利用病人数据分析方法 “即

13、刻法”质控方法（Grubbs） 2、开展质量控制（1）在试验质量要求的基础上进行质量）在试验质量要求的基础上进行质量控制的计划控制的计划（2）选择适当的质控规则和质控物个数）选择适当的质控规则和质控物个数（3）选择适当的质控物）选择适当的质控物（4）应用统计质量控制）应用统计质量控制（5）失控情况的处理）失控情况的处理3、质量控制方法的确定 应考虑使用何种质控物，分析多少个质控物，质控物放在何位置，应用何种质控规则，何时评价质控规则，以达到尽可能地降低假失控、假警告概率。 如果不只一种质控设计都能满足对质控目的的要求，则可根据成本或是否容易执行等因素来选择最佳方案。 质量控制方法的性能可用概率

14、计算或计算机模拟研究进行预测(功效函数图)。控制规则的使用(用功效函数图评价)1.单个规则:例如12S或1S.联合控制规则：例如12S与1S联合；12S与S与R4S联合；.Westgard多规则质控：1S与S与R4S 与S与X平均数和极差控制方法 1S与累积和联合规则质控规则与误差检出率假失控概率单个控制规则不能提供对随机误差和系统误差都好的灵敏度联合规则中一些规则对随机误差敏感，一些规则对系统误差敏感发展联合规则的方法如下：从考虑的控制规则中排除那些具有较高假失控概率的规则从余下的规则中选择至少一个规则对随机误差敏感，至少一个规则对系统误差敏感使用功效函数图评价这种联合规则的性能选择控制测定

15、值个数(N)，其将给出检出感兴趣误差的适当概率（可耐受的假失控概率：工业选择低至0.002的概率；临床检验中一般0.01-0.05的假失控概率是合理的） HIV抗体ELISA检验 质量控制的实践 （一）质控物的制备和保存（一）质控物的制备和保存 质控物的成分应与检测样本的质控物的成分应与检测样本的基质相似或相同，为减少基质效应，应基质相似或相同，为减少基质效应，应尽可能的模拟。尽可能的模拟。 1、内对照和外对照、内对照和外对照 2、制备、制备 3、保存、保存 4、外部对照质控物的使用 每一次实验必须使用外部对照质控血清，以便监控实验的精密度和稳定性，同时可以了解试剂盒的批间或板间差异，并可用于

16、统计质量控制。 5、外部对照质控物的质量要求 质控物的管间或瓶间变异必须小，并且质控物的成分应在稳定状态中。质控物应无菌，并不含有影响ELISA反应的防腐剂。 （二）、质控图的建立及应用 最常用的质控图是Levey-Jennings质控图，Westgard质控图。1、质控图参数 平均值、标准差、控制限质控物的平均值和标准差应建立在实验室常规质控物的平均值和标准差应建立在实验室常规使用方法对质控物重复测定的基础上。一般采使用方法对质控物重复测定的基础上。一般采用在不同批次检测取得至少用在不同批次检测取得至少2020个数据；如果仅个数据；如果仅做少量批次的检测，也至少做做少量批次的检测，也至少做5

17、 5个批次的检测，个批次的检测，每个批次中不少于每个批次中不少于4 4个质控物测定结果，以建立个质控物测定结果，以建立一个临时性的平均值和标准差，当达到一个临时性的平均值和标准差，当达到2020批次批次数据后，替代临时性的平均值和标准差。数据后，替代临时性的平均值和标准差。(NCCLS) (NCCLS) 2、质控规则及使用 实验室在报告实验结果之前必须评价质控数据，可通过图形记录的检查或由计算机审核结果来决定。目前许多质控规则已被采用，常用的是12S和13S规则。 质控规则（1）告警（12S）：当质控物的测定值超出 +2s范围时，系统处于告警状态，应予注意，是否可以继续检测需要进一步观察。若将

18、12S做失控标准，有较高的假失控概率，所以一般不采用。（2）失控（13S）：当质控物的测定值超出 +3s范围时，系统处于失控状态，本次实验结果不能被接受，可能是系统误差或外部对照滴度下降造成。(随机误差引起的可能性小于.) （3）位移：连续几次（7-10次）外部对照S/CO值都落在均值的一侧则称为位移，提示实验条件发生了较大的变化。 （4）趋势：连续几次（5-7次）外部对照S/CO值几乎按一个方向分布时称为趋势，通常由参数的缓慢改变引起。 质控规则的使用应检出随机误差和系统误差，即具有高的检出分析误差的能力，同时应具有较低的假失控概率。 考察试验系统的可靠性应采用多标准质控方案，多规则质控方法

19、能提高误差检出，并具有低的假失控概率。 3、质控图的分析及失控处理 实验室应建立质控图分析及失控情况处理程序。 当质控已计划并恰当地执行时，要求可靠的平均值和标准差用于计算质控限，将假失控概率降到最低。当出现失控时进行如重复质控测定或重新分析新的质控物不是最有效的方法，必须找出问题原因，找出解决故障的方法，并消除原因，防止将来出现同样的问题。 检验误差类型 1）随机误差：严密监测和控制，使其限制在临床允许的范围之内，并逐步使之缩小。 2）系统误差：要求尽快发现，及时校正。 3）过失误差：尽量消灭。质量控制的核心问题：在于努力分清误差类型。 图形分析及发现问题 1）曲线漂移： 2）趋势性变化：

20、3）周期性变化： 失控后处理 失控原因的查找过程并无固定模式，一般原理是由易到难，由近到远地查找 1）分析原始数据及初步估计失控原因： 2）对检测过程进行回顾分析： 3）选择性复查分析判断失控原因： 4）决定处理方法：初步分析防止检测失败的最有效的手段是开始实验前仔细核对程序，预先估计程序各步骤。如试剂使用前要平衡至室温，保证合适的孵育温度和时间，严格按试剂说明书操作等。如果以上都注意到了，但实验仍失败，以下建议可帮助发现问题。a.与技术人员一起复习操作指导书，仔细检查操作步骤中是否有遗漏或改变；b.核查试剂及各组分的失效期；c.核对孵育的温度和时间；d.加样器、洗扳机、酶标仪等是否正常，酶标

21、仪的波长是否准确，加样器和酶标仪是否校准；e.检查蒸馏水的质量； f.检查试剂是否被污染，贮存是否合适。 原始数据分析空白对照阴性对照阳性对照标准一致：无明显系统误差，失控原因在质控血清或该管操作造成的可能性较大分析同一瓶质控血清的其他项目测定是否也有结果异常有异常：质控血清本身问题无异常：该管操作有问题 不一致：该批检测中可能有系统误差，失控原因来自试剂仪器或操作等的可能性较大观察仪器检测其他项目的结果有无异常有异常：仪器原因无异常：试剂或操作等原因从质控图观察失控是否发生在渐变的基础上是渐变：由渐变的误差因素造成不是渐变：由突然发生的误差因素造成原因分析 引起位移的原因有：a.使用一批新批号的试剂；b.更换了新的试剂；c.孵育温度改变；d.新的技术人员（其加样技术也许不同）； e.仪器改变（如加样器等）。 引起趋势的原因有