甲流乙流病毒检测进展

1、 n 流感病毒属于流感病毒属于RNA病毒。流行性感冒是由甲（病毒。流行性感冒是由甲（A)、乙（、乙（B）、丙（）、丙（C）三型流感病毒引起，）三型流感病毒引起，n A型流感病毒常以流行形势出现，能引起世界性流感大流行，它在动物中广泛分布，并也能在型流感病毒常以流行形势出现，能引起世界性流感大流行，它在动物中广泛分布，并也能在动物中引起流感流行和造成大量动物死亡；动物中引起流感流行和造成大量动物死亡；n B型流感病毒常常引起局部暴发，不引起世界性流感大流行；型流感病毒常常引起局部暴发，不引起世界性流感大流行；n C型流感病毒主要以散在形式出现，主要侵袭婴幼儿，一般不引起流行。型流感病毒主要以散在

2、形式出现，主要侵袭婴幼儿，一般不引起流行。n 目前感染人的主要是甲型流感病毒中的目前感染人的主要是甲型流感病毒中的H1N1、H3N2亚型及乙型流感病毒中的亚型及乙型流感病毒中的Victoria和和Yamagata系。系。n 外周血常规外周血常规：白细胞总数一般不高或者降低，重症病例淋巴细胞计数明显降低：白细胞总数一般不高或者降低，重症病例淋巴细胞计数明显降低n 血生化血生化：部分病例出现低钾血症，少数病例肌酸激酶、天门冬氨酸氨基转移酶、丙氨酸氨基：部分病例出现低钾血症，少数病例肌酸激酶、天门冬氨酸氨基转移酶、丙氨酸氨基转移酶、乳酸脱氢酶、肌酐等升高。转移酶、乳酸脱氢酶、肌酐等升高。n （1）病

3、毒核酸检测病毒核酸检测：以：以RT-PCR（最好采用（最好采用real-time RT-PCR）法检测呼吸道标本（咽拭子、）法检测呼吸道标本（咽拭子、鼻拭子、鼻咽或气管抽取物、痰）中的流感病毒核酸。鼻拭子、鼻咽或气管抽取物、痰）中的流感病毒核酸。病毒核酸检测的特异性和敏感性最好病毒核酸检测的特异性和敏感性最好，且能区分病毒类型和亚型且能区分病毒类型和亚型n （2）病毒抗原检测病毒抗原检测（快速诊断试剂检测（快速诊断试剂检测）：快速抗原检测方法可采用胶体金和免疫荧光法。）：快速抗原检测方法可采用胶体金和免疫荧光法。由于快速抗原检测的敏感性低于核酸检测，因此对快速抗原检测结果的解释应结合患者流行由

4、于快速抗原检测的敏感性低于核酸检测，因此对快速抗原检测结果的解释应结合患者流行病史和临床症状综合考虑病史和临床症状综合考虑n （3）血清学检测血清学检测：检测流感病毒特异性：检测流感病毒特异性IgM和和IgG抗体水平。动态检测的抗体水平。动态检测的IgG抗体水平恢复期抗体水平恢复期比急性期有比急性期有4倍或以上升高有回顾性诊断意义倍或以上升高有回顾性诊断意义n （4）病毒的分离培养和鉴定病毒的分离培养和鉴定：属于金标准，在流感流行季节，流感样病例快速抗原诊断和免：属于金标准，在流感流行季节，流感样病例快速抗原诊断和免疫荧光法检测阴性的患者建议再做病毒分离疫荧光法检测阴性的患者建议再做病毒分离n

5、 病毒抗原检测病毒抗原检测（快速诊断试剂检测（快速诊断试剂检测）n 血清学检测血清学检测 （呼吸道病毒检测）（呼吸道病毒检测）n 1. 大夫留取标本，立即送检；大夫留取标本，立即送检；n 2. 检验科工作人员接收标本；检验科工作人员接收标本；n 3 检验科人员接收标本半个小时后在检验科门诊四楼窗口打化验单；检验科人员接收标本半个小时后在检验科门诊四楼窗口打化验单；n 咽喉拭子（推荐）咽喉拭子（推荐）：用灭菌过的棉签从口腔完全插入咽喉中，以咽后壁、上鄂、扁桃体发红：用灭菌过的棉签从口腔完全插入咽喉中，以咽后壁、上鄂、扁桃体发红 部位为中心，摩擦数次，采集粘膜表皮部位为中心，摩擦数次，采集粘膜表皮

6、n 鼻腔拭子鼻腔拭子：用灭菌过的棉签完全插入鼻腔中，摩擦鼻甲数次，采集粘膜表皮。：用灭菌过的棉签完全插入鼻腔中，摩擦鼻甲数次，采集粘膜表皮。n 鼻腔抽洗液鼻腔抽洗液：抽吸器的一侧的管子连接在抽吸泵上，另一侧的管子从外鼻孔完全插入鼻腔，：抽吸器的一侧的管子连接在抽吸泵上，另一侧的管子从外鼻孔完全插入鼻腔，启动抽吸泵采集鼻腔液在抽吸器中。将棉签浸入到鼻腔抽洗液，使标本沾到棉签上。启动抽吸泵采集鼻腔液在抽吸器中。将棉签浸入到鼻腔抽洗液，使标本沾到棉签上。n 注意：注意：应使用应使用泡沫或人造丝材质的泡沫或人造丝材质的棉签采集样本棉签采集样本!样本采集后应样本采集后应尽快送检，尽快送检，如果不能及时送

7、检，如果不能及时送检，应应室温室温储存在储存在密闭容器密闭容器中中，但但不可超过不可超过24小时，小时，样本处理和储运不合适，样本处理和储运不合适，可能会造成假阴性。可能会造成假阴性。采集用的棉签到检验科塔楼二楼领取。采集用的棉签到检验科塔楼二楼领取。n 普通甲流抗原（普通甲流抗原（H1N1及其亚型，及其亚型，H3N2及其亚型及其亚型，H5N1及其亚型，及其亚型，H9N2及其亚型，及其亚型，H7N3及及其亚型其亚型n 乙型流感抗原（乙型流感抗原（Brigit, B/R5 HongKong/5/72 Russia/69 Lee/40）n 方法方法：Flu检测试剂运用胶体金标记和免疫层析技术，检测

8、临床样本中的检测试剂运用胶体金标记和免疫层析技术，检测临床样本中的Flu抗原并以可视信抗原并以可视信号的方式直接显示结果。号的方式直接显示结果。n 原理原理：加入充分裂解的临床样本后，：加入充分裂解的临床样本后，Flu抗原在试剂条的前段与胶体金标记的抗原在试剂条的前段与胶体金标记的Flu抗体结合，抗体结合，形成抗原形成抗原-抗体复合物，该复合物在试剂膜上层析流动，经抗体复合物，该复合物在试剂膜上层析流动，经Flu单克隆抗体条带（单克隆抗体条带（FluA或或FluB测试线）时再次结合测试线）时再次结合Flu单克隆抗体，形成双抗体夹心，并显示紫红色条带。单克隆抗体，形成双抗体夹心，并显示紫红色条带

9、。n 阳性阳性 样本中含有样本中含有Flu抗原抗原,n 阴性阴性 样本中不含样本中不含Flu抗原，或者抗原，或者含量低于本产品的检测水平含量低于本产品的检测水平n 建议对阴性建议对阴性结果的样本进行微生物培养以确定是否感染流感，若培养结果与检测结果不同，结果的样本进行微生物培养以确定是否感染流感，若培养结果与检测结果不同，应再次取样进行微生物培养复查应再次取样进行微生物培养复查 n 可快速检测甲型和乙型流感病毒，诊断应可快速检测甲型和乙型流感病毒，诊断应结合临床症状、病毒分离培养结合临床症状、病毒分离培养等其他检查结果，由等其他检查结果，由医生综合判断进行确诊医生综合判断进行确诊n Flu病毒

10、已病毒已失活的情况失活的情况下样本中仍可能有下样本中仍可能有Flu抗原抗原n Flu检测试剂结果为阴性并不排除患者检测试剂结果为阴性并不排除患者Flu感染的可能性感染的可能性，取样不充分或操作方法不当，以及，取样不充分或操作方法不当，以及样本中抗原水平低于检测限均会导致假阴性样本中抗原水平低于检测限均会导致假阴性n Flu检测试剂所使用的单克隆抗体检测试剂所使用的单克隆抗体可能无法检测出所有的可能无法检测出所有的Flu抗原变异体抗原变异体或者是或者是Flu新的菌株新的菌株n 检测标本检测标本：血清：血清n 检测内容检测内容：抗甲型流感病毒抗体：抗甲型流感病毒抗体IgM(不分型，欧蒙公司专利不分

11、型，欧蒙公司专利) 抗乙型流感病毒抗体抗乙型流感病毒抗体IgM(不分型，欧蒙公司专利不分型，欧蒙公司专利)n 检测方法检测方法：间接免疫荧光法：间接免疫荧光法n 1.检测结果检测结果必须结合必须结合患者的患者的临床症状临床症状进行综合诊断进行综合诊断n 2. 感染初期，病原体特异性感染初期，病原体特异性IgM抗体抗体未产生或者滴度很低未产生或者滴度很低会导致阴性结果，如有怀疑病原体会导致阴性结果，如有怀疑病原体感染，应感染，应提示患者在提示患者在7-14天内天内抽取第二份样本复查抽取第二份样本复查n 3. 二次感染和二次感染和复发感染复发感染时也可能检测到特异性时也可能检测到特异性IgM抗体抗

12、体n 4免疫功能受损或接受免疫抑制治疗的患者，其血清学免疫功能受损或接受免疫抑制治疗的患者，其血清学IgM抗体检测的参考价值有限抗体检测的参考价值有限n 5. 近几个月内接受过输血或其他血液制品治疗的人群，对其阳性检测结果的分析应慎重近几个月内接受过输血或其他血液制品治疗的人群，对其阳性检测结果的分析应慎重n 6. 不能区分流感病毒反复感染病例不能区分流感病毒反复感染病例n 7当检测流感病毒时，若包被毒株和患者感染毒株之间的当检测流感病毒时，若包被毒株和患者感染毒株之间的差异太大差异太大，可能存在，可能存在漏检漏检n 8. 接种接种流感疫苗流感疫苗也会产生也会产生IgM抗体，抗流感病毒抗体的解

13、释应抗体，抗流感病毒抗体的解释应考虑疫苗接种史考虑疫苗接种史n 医嘱名称医嘱名称 流感病毒检测流感病毒检测 n 收费代码收费代码 020916 n 收费标准收费标准 116/次次 n 医嘱名称医嘱名称 呼吸道病毒检测呼吸道病毒检测n 收费标准收费标准 274/次次n 取报告时间取报告时间 每周三下午三点出结果每周三下午三点出结果n n 检测内容检测内容：本实验主要定性检测人血清或血浆标本中：本实验主要定性检测人血清或血浆标本中汉坦病毒汉坦病毒IgG和和IgM抗体抗体。n 标本采集标本采集：采静脉血，避免溶血，采集后的标本及时送检，若不能及时送检，可在：采静脉血，避免溶血，采集后的标本及时送检，若不能及时送检，可在28保存保存3天，长期保存需分装血清冷冻于天，长期保存需分装血清冷冻于-20 ，忌反复冻融。，忌反复冻融。n 检测方法检测方法：本实验采用胶体金免疫层析技术，仅限于定性检测样本中的汉坦病毒抗体。：本实验采用胶体金免疫层析技术，仅限于定性检测样本中的汉坦病毒抗体。 n 临床意义临床意义：肾综合征出血热（：肾综合征出血热（HFRS）亦称流行性出血热。是由汉坦病毒引起的急性、地方性、）亦称流行性出血热。是由汉坦病毒引起的急性、地方性、自然疫源性传染病，病情危急