农杆菌介导的转化方法_第1页
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文档简介

1、.v(Agrobacterium tumefaciens),是一种革兰氏阴性土壤杆菌是一种革兰氏阴性土壤杆菌,它含有它含有Ti质质粒粒,能诱导被侵染的植物细胞形成肿瘤能诱导被侵染的植物细胞形成肿瘤,即诱发冠瘿瘤即诱发冠瘿瘤.Ti质粒质粒(Ri质粒质粒)上上有一段转移有一段转移DNA,在农杆菌侵染宿主植物时在农杆菌侵染宿主植物时,这段这段DNA可以转移进植物可以转移进植物细胞细胞,并稳定地保留在植物细胞染色体中并稳定地保留在植物细胞染色体中,变为植物细胞新增加的一群基变为植物细胞新增加的一群基因因,最终能通过有性世代遗传给子代最终能通过有性世代遗传给子代 。农杆菌介导转化法农杆菌介导转化法.根瘤

2、根瘤存在于能引起植物形成冠瘿瘤的农杆菌中，诱导双子叶冠瘿瘤形成，又称肿瘤诱导质粒（tumor inducing plasmid）。 Ti质粒质粒.4改造后的改造后的Ti质粒载体模式质粒载体模式.第一步第一步:植物受伤植物受伤植物受伤后能分泌酚类化合物（如乙酰丁香植物受伤后能分泌酚类化合物（如乙酰丁香酮、酮、 羟基乙酰丁香酮），诱导羟基乙酰丁香酮），诱导Ti质粒上的质粒上的毒性基因表达。毒性基因表达。 农杆菌的感染和生存农杆菌的感染和生存第二步第二步 感染植物感染植物农杆菌吸附于植物的表面伤口部位（常在茎的农杆菌吸附于植物的表面伤口部位（常在茎的基部）。基部）。.第三步第三步 毒性基因（毒性基因

3、（vir）表达）表达T-DNA上的产物催化产生过量的生长素和上的产物催化产生过量的生长素和细胞分裂素，形成植物冠瘿瘤。细胞分裂素，形成植物冠瘿瘤。virA、virG、virD、virB第四步第四步 T-DNA转移转移第五步第五步 诱导冠瘿瘤诱导冠瘿瘤T-DNA被被vir基因产物切下来，并运送到植物细胞基因产物切下来，并运送到植物细胞核里，整合到植物基因组中。核里，整合到植物基因组中。第六步第六步 土壤农杆菌代谢冠瘿碱。土壤农杆菌代谢冠瘿碱。. 包括原生质体共培养、悬浮细胞共培养和愈伤组织共培养。3 3、活体接种法、活体接种法农杆菌转化的方法农杆菌转化的方法 .1.共培养法The co-integr

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