实验一 大肠杆菌的分离和培养

1、 微生物是一切肉眼看不见的或看不清的微微生物是一切肉眼看不见的或看不清的微小生物的总称。小生物的总称。 特点：结构特点：结构简单简单, ,有单细胞的有单细胞的, ,简单多细胞简单多细胞的的, ,非细胞的。非细胞的。 种类：种类： 原核：原核：细菌、蓝藻、放线菌、螺旋体、支细菌、蓝藻、放线菌、螺旋体、支原体、立克次氏体、衣原体原体、立克次氏体、衣原体 真核：真核：真菌、藻类、原生动物真菌、藻类、原生动物 非细胞类：非细胞类：病毒病毒 基础知识基础知识一一.微生物与微生物种类微生物与微生物种类细菌的菌落细菌的菌落菌落：菌落：生长在固体培养基上，生长在固体培养基上，由单个细胞繁殖形成的、肉眼由单个细

2、胞繁殖形成的、肉眼可见的细菌群体。可见的细菌群体。 各种微生物在一定条件下形成的菌落特征（如大小、各种微生物在一定条件下形成的菌落特征（如大小、形状、边缘、表面、质地、颜色等）具有一定的稳定形状、边缘、表面、质地、颜色等）具有一定的稳定性，是衡量性，是衡量菌种纯度、辨认和鉴定菌种菌种纯度、辨认和鉴定菌种的重要依据。的重要依据。 二二.微生物的营养微生物的营养1.碳源碳源【糖类、脂肪、有机酸糖类、脂肪、有机酸】：能源物质，构成菌体和代谢产物能源物质，构成菌体和代谢产物2.氮源氮源【无机氮源：氨水、硫酸铵、尿素、硝酸钠；无机氮源：氨水、硫酸铵、尿素、硝酸钠；有机氮源：麦麸、玉米浆、有机氮源：麦麸、

3、玉米浆、蛋白胨蛋白胨】：构成菌体和代谢产物构成菌体和代谢产物3.无机盐无机盐【 P、Mg、S、Fe、K、Na、Pb、Cl、Zn、Co、Mn等】：等】：维持酶活力，调节渗透压、维持酶活力，调节渗透压、pH值等值等4.水水：5.生长因子生长因子【维生维生素、素、氨基酸、碱基氨基酸、碱基等】：等】：一般是一般是酶酶和核酸和核酸的组成的组成成成分分培养基配制原则：培养基配制原则：P16第一，目的要明确第一，目的要明确 第二，营养要协调第二，营养要协调第三，第三，PH要适宜要适宜三三.培养基培养基人们按照微生物对营养物质的不同人们按照微生物对营养物质的不同需求，配制出供其生长的营养基质需求，配制出供其生

4、长的营养基质培养基的种类：培养基的种类：根据根据物理物理性质性质液体培养基液体培养基固体培养基固体培养基根据根据用途用途选择培养基选择培养基鉴别培养基鉴别培养基四四.无菌技术无菌技术 P15获得纯净培养物的关键是防止外来杂菌的入侵获得纯净培养物的关键是防止外来杂菌的入侵1、对实验操作的空间、操作者的衣着和手，、对实验操作的空间、操作者的衣着和手，进行清洁和消毒进行清洁和消毒2、消毒与灭菌、消毒与灭菌干热灭菌法（干热灭菌法（灼烧：接种环、试管口灼烧：接种环、试管口 干烤（干烤（140160，2-3h）金属、玻璃器皿）金属、玻璃器皿）湿热灭菌法湿热灭菌法巴氏消毒法：主要用于牛乳消毒。巴氏消毒法：主

5、要用于牛乳消毒。 煮沸法（煮沸法（100 ，5min）食具、注射器等消毒）食具、注射器等消毒高压蒸汽灭菌法高压蒸汽灭菌法121,15-30min原理：原理：波长波长200-300nm200-300nm的紫外线具有杀菌作用。的紫外线具有杀菌作用。其中其中260-266nm260-266nm波长波长UVUV与与DNADNA吸收光谱一致。其主吸收光谱一致。其主要作用于要作用于DNADNA，使一条，使一条DNADNA链上相邻的两个胸腺嘧链上相邻的两个胸腺嘧 啶共价结合形成二聚体，干扰啶共价结合形成二聚体，干扰DNADNA复制与转录，复制与转录，导致细菌变异和死亡，并可杀灭病毒。导致细菌变异和死亡，并可

6、杀灭病毒。特点：特点：穿透力较弱穿透力较弱应用：应用：物体表面及空气消毒物体表面及空气消毒 紫外线消毒（灭菌）紫外线消毒（灭菌）法法注意保护眼睛注意保护眼睛实验操作实验操作教师做的：教师做的：制备培养基，倒平板，菌种扩增制备培养基，倒平板，菌种扩增（P16-17）菌种扩增菌种扩增摇床震荡培养摇床震荡培养12h（于（于LB液体培养基中）液体培养基中）实验操作（同学做）实验操作（同学做）大肠杆菌的培养和分离大肠杆菌的培养和分离原核生物，异养兼性厌氧型，原核生物，异养兼性厌氧型，二分裂方式二分裂方式繁殖，繁殖，一般无害，在基因工程中常被用作运载体一般无害，在基因工程中常被用作运载体同学做的：同学做的

7、：大肠杆菌接种大肠杆菌接种接种环灭菌接种环灭菌蘸取标本蘸取标本接种接种标准结果标准结果平板划线分离（平板划线分离（P18）烧至暗红烧至暗红灼烧接种环灼烧接种环将接种环垂直于酒精灯火焰上，将接种环垂直于酒精灯火焰上，使接种环自顶端直至整条烧红使接种环自顶端直至整条烧红后再将接种环在火焰上通过几后再将接种环在火焰上通过几次。次。 平板平板划线划线土壤中微生物的分离（土壤中微生物的分离（稀释涂布平板法稀释涂布平板法P19 ）用用移液器移液器取取200微升微升涂布器涂布器涂涂布布培养培养为什么要倒置培养？为什么要倒置培养？恒温恒温37培养培养消毒消毒(disinfection)(disinfectio

8、n)：杀死物体上病原微生物的方杀死物体上病原微生物的方法，并不一定能杀死含芽胞的细菌或非病原微生物。用法，并不一定能杀死含芽胞的细菌或非病原微生物。用以消毒的药品称为消毒剂以消毒的药品称为消毒剂(disinfectant)(disinfectant)。灭菌灭菌(sterilization)(sterilization)：杀灭物体上所有微生物的方杀灭物体上所有微生物的方法。灭菌比消毒要求高，包括杀灭细菌芽胞在内的全部法。灭菌比消毒要求高，包括杀灭细菌芽胞在内的全部病原微生物和非病原微生物。病原微生物和非病原微生物。抑菌抑菌(bacteriostasis)(bacteriostasis)：抑制体内或体外细菌的生抑制体内或体外细菌的生长繁殖。常用的抑菌剂为各种抗生素。长繁殖。常用的抑菌剂为各种抗生素。防腐防腐(antisepsis)(antisepsis)：防止或抑制体外细菌生长繁殖防止或抑制体外细菌生长繁殖的方法。细菌一般不死亡。的方法。细菌一般不死亡。无菌无菌(asepsis)(a