《DNA的粗提取与鉴定》课件

1、1234实验原理实验原理1. DNA1. DNA在在NaClNaCl溶液中的溶解度，是随着溶液中的溶解度，是随着NaClNaCl的浓度的变化而改变的。当的浓度的变化而改变的。当NaClNaCl的的物质的量浓度为物质的量浓度为0.14 mol0.14 molL L时时,DNA,DNA的溶的溶解度最低。解度最低。利用这一原理，可以使溶解利用这一原理，可以使溶解在在NaClNaCl溶液中的溶液中的DNADNA析出。析出。2.DNA2.DNA不溶于酒精溶液不溶于酒精溶液，但是细胞中的某些，但是细胞中的某些物质则可以溶于酒精溶液。利用这一原物质则可以溶于酒精溶液。利用这一原理，可以进一步提取出含杂质较少

2、的理，可以进一步提取出含杂质较少的DNADNA。3.DNA3.DNA遇二苯胺（沸水浴）会染成蓝色遇二苯胺（沸水浴）会染成蓝色，因，因此，二苯胺可以作为鉴定此，二苯胺可以作为鉴定DNADNA的试剂。的试剂。5673 3、合适的材料：、合适的材料：892 2、植物细胞、植物细胞植物细胞需要先植物细胞需要先用一定的洗涤剂和用一定的洗涤剂和食盐溶解细胞膜食盐溶解细胞膜 实 例 ： 提 取 洋 葱实 例 ： 提 取 洋 葱DNADNA时，在切碎的洋时，在切碎的洋葱中加入一定的洗涤葱中加入一定的洗涤剂和食盐，进行充分剂和食盐，进行充分的搅拌和研磨，过滤的搅拌和研磨，过滤后收集研磨液后收集研磨液10讨论：如

3、果研磨不充分，会对讨论：如果研磨不充分，会对实验结果产生怎样的影响？实验结果产生怎样的影响？具体做法。具体做法。10mL鸡血鸡血20mL蒸馏水蒸馏水同同方向搅拌方向搅拌3层尼龙布过滤层尼龙布过滤滤液滤液11方案一、在滤液中加入方案一、在滤液中加入NaClNaCl，使，使NaClNaCl溶液浓度溶液浓度为为2mol/L2mol/L，过滤除去，过滤除去不溶的杂质不溶的杂质，再加入蒸馏，再加入蒸馏水，调节水，调节NaClNaCl溶液浓度为溶液浓度为0.14mol/L0.14mol/L，析出，析出DNADNA，过滤除去，过滤除去溶液中的杂质溶液中的杂质，在用，在用2mol/L2mol/L的的NaClN

4、aCl溶液溶解溶液溶解DNADNA。 12方案二、直接在滤液中加入嫩肉粉，反应方案二、直接在滤液中加入嫩肉粉，反应10101515分钟。分钟。方案三、将滤液放在方案三、将滤液放在606075750 0C C的恒温水浴箱中保温的恒温水浴箱中保温10101515分钟。分钟。为了纯化提取的为了纯化提取的DNADNA需要将滤液作进一步处理需要将滤液作进一步处理讨论：此步骤获得的滤液中可能含有讨论：此步骤获得的滤液中可能含有哪些细胞成分？哪些细胞成分？13具体做法具体做法: :方案一：方案一：30mL滤液滤液35gNaCl同方向搅拌，同方向搅拌，DNA溶解溶解加入蒸馏水加入蒸馏水DNA析出析出过滤得到过

5、过滤得到过滤物滤物放到放到2mol/LNaCl溶液中溶解溶液中溶解DNA-NaCl溶解液溶解液方案二：方案二：30mL滤液嫩肉粉（木瓜蛋白酶）滤液嫩肉粉（木瓜蛋白酶）静置静置1015分钟分钟DNA滤液滤液方案三：方案三：30滤液滤液6075处理处理过滤获得过滤获得DNA滤液滤液1415161、以血液为实验材料时，每、以血液为实验材料时，每100ml血液中需要加入血液中需要加入3g柠檬酸钠，防止柠檬酸钠，防止血液凝固。血液凝固。2、加入洗涤剂后，动作要轻缓、柔、加入洗涤剂后，动作要轻缓、柔和，否则容易产生大量的泡沫，不和，否则容易产生大量的泡沫，不利于后续步骤的操作。加入酒精和利于后续步骤的操作

6、。加入酒精和玻璃棒搅拌时，动作要轻缓，以免玻璃棒搅拌时，动作要轻缓，以免加剧加剧DNA分子的断裂，导致分子的断裂，导致DNA分分子不能形成絮状沉淀。子不能形成絮状沉淀。3、二苯胺试剂要现配现用，否则会、二苯胺试剂要现配现用，否则会影响鉴定的效果。影响鉴定的效果。17制备鸡血细胞液制备鸡血细胞液加柠檬酸钠，静置或离心加柠檬酸钠，静置或离心破碎细胞，释放破碎细胞，释放DNA 加蒸馏水，同一方向快速通方向搅拌加蒸馏水，同一方向快速通方向搅拌过滤，除去细胞壁、细胞膜等。过滤，除去细胞壁、细胞膜等。溶解核内溶解核内DNA 加入加入NaCl至至2mol/L，同一方向缓慢搅，同一方向缓慢搅拌拌DNA析出析出加蒸馏水至加蒸馏水至0.14mol/L，过滤，在溶解到，过滤，在溶解到2mol/L溶液中溶液中除去细胞质中的大部分物质。除去细胞质中的大部分物质。DNA初步纯化初