关爱生命呵护健康红细胞血型理论与技术

1、关爱生命关爱生命 呵护健康呵护健康 关爱生命关爱生命 呵护健康呵护健康 主要内容主要内容红细胞血型相容性检测红细胞血型相容性检测红细胞血型血清学检测方法红细胞血型血清学检测方法红细胞血型系统介绍红细胞血型系统介绍关爱生命关爱生命 呵护健康呵护健康l 红细胞血型抗原为同种异型抗原，是人类遗传多态性标志红细胞血型抗原为同种异型抗原，是人类遗传多态性标志之一。之一。l 自二十世纪初自二十世纪初LandsteinerLandsteiner发现发现ABOABO血型以来，已陆续发现血型以来，已陆续发现了许多新的红细胞血型抗原。国际输血协会（了许多新的红细胞血型抗原。国际输血协会（ISBT ISBT ）20

2、082008年报告中已确认了年报告中已确认了308308个红细胞血型抗原。并将其分为血型个红细胞血型抗原。并将其分为血型系统、血型集合和血型系列。系统、血型集合和血型系列。l 输血关系最大的是输血关系最大的是ABOABO及及RhRh血型系统血型系统。人类红细胞血型人类红细胞血型关爱生命关爱生命 呵护健康呵护健康研研 究究 背背 景景血型系统血型系统关爱生命关爱生命 呵护健康呵护健康血型系统血型系统关爱生命关爱生命 呵护健康呵护健康ABO血型发现历史血型发现历史l19011901年，年，LandsteinerLandsteiner把几份血液标本中把几份血液标本中的红细胞分别与他人的血清交叉混合后

3、，的红细胞分别与他人的血清交叉混合后，发现有的血液之间发生凝集反应，有的则发现有的血液之间发生凝集反应，有的则不发生。将人的红细胞血型分为不发生。将人的红细胞血型分为A A、B B、C(C(后称为后称为O)O)三种类型。三种类型。l19021902年他的学生年他的学生DecastelloDecastello及及SturliSturli发现发现了第了第4 4种血型，即种血型，即ABAB型。型。ABOABO血型的发现，血型的发现，开启了血液免疫学及免疫遗传学的新纪元开启了血液免疫学及免疫遗传学的新纪元。关爱生命关爱生命 呵护健康呵护健康 ABH抗原的生化结构抗原的生化结构H H基因基因ABOABO

4、基因基因关爱生命关爱生命 呵护健康呵护健康关爱生命关爱生命 呵护健康呵护健康关爱生命关爱生命 呵护健康呵护健康ABO抗原的发育抗原的发育 关爱生命关爱生命 呵护健康呵护健康ABO抗体的发育抗体的发育 出生时，正常的抗出生时，正常的抗A A和抗和抗B B还没产生或较还没产生或较弱，到三个月时，反应基本上与成年人的一弱，到三个月时，反应基本上与成年人的一样。样。5 51010岁时，抗体的产生达到高峰，具岁时，抗体的产生达到高峰，具有较高效价。有较高效价。关爱生命关爱生命 呵护健康呵护健康关爱生命关爱生命 呵护健康呵护健康孟买型与类孟买型孟买型与类孟买型l孟买型孟买型 Bombay phenotyp

5、eBombay phenotype 红细胞上没有红细胞上没有A A、B B、H H 抗原，血清中存在抗原，血清中存在抗抗-A-A、抗、抗-B -B 和抗和抗-H -H 抗体。抗体。 表型标记为：表型标记为： OhO OhO、OhAOhA、 OhBOhB、OhABOhABl类孟买型类孟买型 Bombay-like phenotype Bombay-like phenotype 表型标记为表型标记为: Ah: Ah、BhBh、ABhABh关爱生命关爱生命 呵护健康呵护健康ABO血型的亚型血型的亚型lABOABO亚型亚型 （subgroups) subgroups) ，也称变异型，红细胞同属于一种血

6、，也称变异型，红细胞同属于一种血型抗原，但在结构上有一定的差异，性能也不完全相同。由于型抗原，但在结构上有一定的差异，性能也不完全相同。由于抗原弱，在用已知抗体检测抗原和用已知抗原检测被检血清时抗原弱，在用已知抗体检测抗原和用已知抗原检测被检血清时不符合血清学反应特征。不符合血清学反应特征。lA A亚型：亚型：A1A1和和A2A2是血型血清学方法确定的最重要的是血型血清学方法确定的最重要的A A型红细胞亚型红细胞亚型，一般认为有两种抗原型，一般认为有两种抗原A A和和A1A1，A1A1型人红细胞上有这两种抗型人红细胞上有这两种抗原，原，A2A2型人红细胞只有型人红细胞只有A A抗原。亚洲人中抗

7、原。亚洲人中A1A1型约占型约占27%27%；A2A2型人型人稀少。其它稀少。其它A A亚型：亚型：A3A3、AxAx、AendAend、AmAm、AyAy和和AelAel。lB B亚型一般比亚型一般比A A亚型更少：亚型更少：B3B3、BxBx、BmBm和和BelBel关爱生命关爱生命 呵护健康呵护健康几种几种A亚型红细胞上的亚型红细胞上的A抗原抗原关爱生命关爱生命 呵护健康呵护健康A1与与A2的区分的区分关爱生命关爱生命 呵护健康呵护健康Rh血型系统血型系统l19391939LevineLevine及及StetsonStetson在一個新生在一個新生儿儿溶血疾病的溶血疾病的母母亲亲的血清中

8、，的血清中，发现发现可凝集可凝集85%85%白种人白种人的的红红血球抗血球抗体体。l19401940LandsteinerLandsteiner及及WienerWiener以以恒恒河猴河猴(Rhesus (Rhesus monkey)monkey)的的红红血球免疫兔子血球免疫兔子产产生抗生抗体体，也可凝集，也可凝集85%85%白种人白种人的的红红血球。因此命名血球。因此命名为为RhRh抗原。抗原。（恒（恒河猴河猴LWLW抗原）抗原）关爱生命关爱生命 呵护健康呵护健康RhRh血型系统抗原血型系统抗原lRHRH血型系统抗原血型系统抗原4646个，其中个，其中D D、C C、E E、c c、e e为

9、主要的血为主要的血型抗原。型抗原。lD D抗原：只存在与人红细胞膜，不存在与其它组织细胞抗原：只存在与人红细胞膜，不存在与其它组织细胞中，体液分泌中也无中，体液分泌中也无D D抗原。抗原。lD D抗原分类：根据抗原分类：根据D D抗原的数量和质量不同以及抗原性不抗原的数量和质量不同以及抗原性不同，将同，将D D抗原分类为抗原分类为5 5种：常见种：常见D D抗原、弱抗原、弱D D、不完全型、不完全型D D、不完全型弱不完全型弱D D及增强及增强D D。关爱生命关爱生命 呵护健康呵护健康RhRh血型系统抗原频率血型系统抗原频率l D antigen D antigen 85% 85%l C an

10、tigen C antigen 70% 70%l c antigen c antigen 80% 80%l E antigen E antigen 30% 30%l e antigen e antigen 98% 98%关爱生命关爱生命 呵护健康呵护健康RhRh血型系统抗体血型系统抗体lRhRh抗体主要通过输血和妊娠免疫产生。一般在初次免抗体主要通过输血和妊娠免疫产生。一般在初次免疫后疫后2-62-6个月内出现。对个月内出现。对Rh(D)Rh(D)初次免疫的人，经再次初次免疫的人，经再次免疫后，在三周内抗体浓度可达最高峰。免疫后，在三周内抗体浓度可达最高峰。l同种异型抗体：同种异型抗体：RhD

11、RhD阴性人输用阴性人输用D D阳性血而产生的抗阳性血而产生的抗-D-D抗体。绝大部分人血清同种异体抗体都是抗体。绝大部分人血清同种异体抗体都是IgGIgG类抗体，类抗体，多数在盐水介质中不发生直接凝集。多数在盐水介质中不发生直接凝集。l单克隆抗单克隆抗-D-D：人鼠或人人淋巴细胞杂交瘤制备而成。：人鼠或人人淋巴细胞杂交瘤制备而成。关爱生命关爱生命 呵护健康呵护健康红细胞血型相容性检测红细胞血型相容性检测交叉配血交叉配血血型检测血型检测抗体筛检及鉴定抗体筛检及鉴定关爱生命关爱生命 呵护健康呵护健康红细胞血型血清学反应红细胞血型血清学反应已知红细胞：已知红细胞： 反定型红细胞反定型红细胞 不规则

12、抗体检测红细胞不规则抗体检测红细胞 谱红细胞谱红细胞已知抗体：已知抗体： 抗抗A A 抗抗B B 抗抗D D 抗抗M M、抗、抗N N AHG AHG用已知的检测未知的用已知的检测未知的关爱生命关爱生命 呵护健康呵护健康 血型检测血型检测l血型检测：确定待检者的血型检测：确定待检者的ABOABO、RhDRhD血型。血型。lABOABO血型定型：血型定型： 正定型：是用已知特异性抗体来测定红细胞上有无相正定型：是用已知特异性抗体来测定红细胞上有无相应的抗原。应的抗原。 反定型：是用已知抗原的红细胞来测定血清中有无相反定型：是用已知抗原的红细胞来测定血清中有无相应的抗体。应的抗体。关爱生命关爱生命

13、 呵护健康呵护健康ABOABO血型定型血型定型抗A抗BA细胞B细胞结果(试剂)(待检者)AB关爱生命关爱生命 呵护健康呵护健康ABOABO血型定型血型定型正定型正定型反定型反定型血血型型比例比例% %（亚洲）（亚洲）抗抗-A -A 抗抗-B-BA A细胞细胞B B细胞细胞- - -+ + +O O4343+ + +- - -ABAB5 5+ +- - -+ +A A2727- -+ + +- -B B2525关爱生命关爱生命 呵护健康呵护健康RhDRhD抗原检测抗原检测抗抗D D结果结果( (试剂试剂) )( (待检者待检者) )D D阳性阳性关爱生命关爱生命 呵护健康呵护健康l我国临床常规我

14、国临床常规RhDRhD血型的检测，应用不识别血型的检测，应用不识别D DVIVI型型D D抗原的单抗原的单克隆抗体。对不出现凝集的标本判断为克隆抗体。对不出现凝集的标本判断为RhDRhD阴性；对出现阴性；对出现弱反应（凝集反应强度弱反应（凝集反应强度2+2+）的病人（受血者），将其视）的病人（受血者），将其视为为RhDRhD阴性，只能输用阴性，只能输用RhDRhD阴性的红细胞；对弱反应的献血阴性的红细胞；对弱反应的献血者视为者视为RhDRhD阳性。阳性。l初筛初筛RhDRhD阴性和弱反应的标本，应该进一步研究确定其阴性和弱反应的标本，应该进一步研究确定其RhDRhD表型，应用能够识别表型，应用

15、能够识别D DVIVI型的单克隆抗体；同时进行吸收放型的单克隆抗体；同时进行吸收放散实验，以排除散实验，以排除D Delel型。型。关爱生命关爱生命 呵护健康呵护健康亚型鉴定方法亚型鉴定方法l凝集抑制试验：可溶性抗原与相应已知抗体结合能够全凝集抑制试验：可溶性抗原与相应已知抗体结合能够全部或部分抑制抗体活性，通过此试验可确定抗原的特异部或部分抑制抗体活性，通过此试验可确定抗原的特异性。又称唾液分泌试验。性。又称唾液分泌试验。l吸收放散试验：抗体与相应抗原在适合条件下发生凝集吸收放散试验：抗体与相应抗原在适合条件下发生凝集或致敏，但这种结合是可逆的，如改变某些物理条件时，或致敏，但这种结合是可逆

16、的，如改变某些物理条件时，抗体又可以从结合的红细胞上解脱下来，这种试验方法抗体又可以从结合的红细胞上解脱下来，这种试验方法叫做吸收放散试验。叫做吸收放散试验。关爱生命关爱生命 呵护健康呵护健康放散技术放散技术关爱生命关爱生命 呵护健康呵护健康 放散试验种类放散试验种类 l 酸放散酸放散l 热放散热放散l ZZAP ZZAP放散放散l 二磷酸氯喹放散二磷酸氯喹放散关爱生命关爱生命 呵护健康呵护健康ABO亚型的血清学特征亚型的血清学特征A A B B TE C H N I C A L MANUA L 16th edition P366关爱生命关爱生命 呵护健康呵护健康各种各种A A亚型的鉴别亚型的

17、鉴别红细胞红细胞弱凝集弱凝集A3 AxA3 AxAendAend混合视野凝集混合视野凝集(Mf(Mf），唾液中含有），唾液中含有A A物质物质A3A3与抗与抗A A1010 红细胞呈十分弱的红细胞呈十分弱的mfmf凝集凝集AendAend及及/ /或抗或抗只与抗只与抗ABAB呈弱凝集呈弱凝集AxAxA1BA1B反应反应不凝集不凝集能吸附能吸附及放散及放散抗抗A AAm Ay Am Ay AelAel容易吸附放散抗容易吸附放散抗A AAmAm分泌型唾液中有一定量的分泌型唾液中有一定量的A A物质物质不容易吸附放散抗不容易吸附放散抗A AAyAy分泌型唾液含少量的分泌型唾液含少量的A A物质物质吸

18、附放散抗吸附放散抗A AAelAel分泌型唾液只含分泌型唾液只含H H物质无物质无A A物质物质关爱生命关爱生命 呵护健康呵护健康抗抗D D单克隆抗体单克隆抗体关爱生命关爱生命 呵护健康呵护健康抗体筛检及鉴定抗体筛检及鉴定 用已知抗原的用已知抗原的O O型红细胞（筛检细胞及谱细型红细胞（筛检细胞及谱细胞），检测病人血清中是否含有抗体及对所检胞），检测病人血清中是否含有抗体及对所检测到的抗体特异性进行鉴定。测到的抗体特异性进行鉴定。关爱生命关爱生命 呵护健康呵护健康抗体定义抗体定义l不规则抗体的含义：通常把抗不规则抗体的含义：通常把抗A A、抗、抗B B以外的所有红细胞以外的所有红细胞血型抗体称

19、为不规则抗体。如抗血型抗体称为不规则抗体。如抗D D、抗、抗N N、抗、抗M M抗体。抗体。l完全抗体或不完体抗体：完全抗体或不完体抗体： 与相应抗原红细胞在盐水介质中或在中性微柱凝胶与相应抗原红细胞在盐水介质中或在中性微柱凝胶中出现凝集反应的抗体称为完全抗体。完全抗体大部分中出现凝集反应的抗体称为完全抗体。完全抗体大部分是是IgMIgM类抗体，但非所有类抗体，但非所有IgMIgM类抗体都是完全抗体。大部类抗体都是完全抗体。大部分分IgGIgG抗体为不完全抗体，但一些抗体为不完全抗体，但一些IgGIgG抗体也是完全抗体。抗体也是完全抗体。关爱生命关爱生命 呵护健康呵护健康l临床有意义和临床无意

20、义抗体：临床有意义和临床无意义抗体： 能引起新生儿溶血病（能引起新生儿溶血病（HDNHDN）和血型不相容输血免）和血型不相容输血免疫溶血的抗体为临床有意义抗体。如母体免疫疫溶血的抗体为临床有意义抗体。如母体免疫IgGIgG抗抗体抗体抗-D-D能够穿过胎盘进入胎儿体内，引起胎儿溶血。能够穿过胎盘进入胎儿体内，引起胎儿溶血。反之为临床无意义抗体，如反之为临床无意义抗体，如LewisLewis血型同种异型抗体血型同种异型抗体常是常是IgMIgM抗体，但极少见溶血性输血反应和引起抗体，但极少见溶血性输血反应和引起HDNHDN，故该血型抗体为临床无意义抗体。故该血型抗体为临床无意义抗体。 关爱生命关爱生

21、命 呵护健康呵护健康检测方法检测方法方法方法原理原理局限性局限性酶检测技术酶检测技术破坏红细胞表面的唾液酸，降低其表面电荷，减少红细胞破坏红细胞表面的唾液酸，降低其表面电荷，减少红细胞间斥力，使得红细胞靠拢，在不完全抗体的作用下，红细间斥力，使得红细胞靠拢，在不完全抗体的作用下，红细胞便出现凝集。胞便出现凝集。改变其他系统改变其他系统( (尤其是尤其是M M，N N，FyFya a，FyFyb b) )抗原的构型破坏其抗原性。抗原的构型破坏其抗原性。酶还可能改变细胞悬液的物理性酶还可能改变细胞悬液的物理性质，可导致红细胞的非免疫性聚质，可导致红细胞的非免疫性聚集。集。凝聚胺法凝聚胺法凝聚胺是一

22、种多价阳离子氨基聚合物，它可以引起正常红凝聚胺是一种多价阳离子氨基聚合物，它可以引起正常红细胞的可逆性凝集，如果被抗体致敏的红细胞与凝聚胺连细胞的可逆性凝集，如果被抗体致敏的红细胞与凝聚胺连在一起，就会发生不可逆凝集。在使用凝聚胺检测抗体活在一起，就会发生不可逆凝集。在使用凝聚胺检测抗体活性时，抗原抗体在低离子介质中孵育，可促进红细胞与相性时，抗原抗体在低离子介质中孵育，可促进红细胞与相应抗体的反应，使得抗原抗体更有效的结合。经再悬液中应抗体的反应，使得抗原抗体更有效的结合。经再悬液中和后，抗体介导的特异性凝集仍然存在，而非特异凝集的和后，抗体介导的特异性凝集仍然存在，而非特异凝集的细胞散开。

23、细胞散开。破坏破坏KellKell系统抗原系统抗原抗人球蛋白抗人球蛋白法法一些一些IgGIgG类抗体类抗体( (主要是免疫抗体，如主要是免疫抗体，如RhRh血型抗体血型抗体) )是一种是一种7s7s球蛋白，分子量小，分子长度只球蛋白，分子量小，分子长度只250250A A，与红细胞相应，与红细胞相应抗原结合后，在盐水介质中不出现肉眼可见的凝集反应，抗原结合后，在盐水介质中不出现肉眼可见的凝集反应，但在加入抗但在加入抗-IgG-IgG的抗体后，以其搭桥则可出现凝集反应的抗体后，以其搭桥则可出现凝集反应操作繁琐，耗时长操作繁琐，耗时长关爱生命关爱生命 呵护健康呵护健康关爱生命关爱生命 呵护健康呵护

24、健康酶作用缩短红细胞间距离酶作用缩短红细胞间距离关爱生命关爱生命 呵护健康呵护健康酶对红细胞抗原的作用酶对红细胞抗原的作用抗原增强抗原增强抗原性破坏抗原性破坏KiddKiddRhRhLewisLewisI IP PFyFya a Fy Fyb bM NM NS sS s关爱生命关爱生命 呵护健康呵护健康抗人球蛋白检测技术抗人球蛋白检测技术l分类：分类： 直接抗人球蛋白实验（直接抗人球蛋白实验（DATDAT） 间接抗人球蛋白试验间接抗人球蛋白试验(IAT)(IAT)l试剂：试剂： 多特异性抗人球多特异性抗人球( (抗抗-IgG+-IgG+抗抗-C3)-C3) 单特异性抗人球单特异性抗人球( (抗

25、抗-IgG-IgG或抗或抗-C3)-C3)关爱生命关爱生命 呵护健康呵护健康SensitizationAgglutination byAnti-human Globulin关爱生命关爱生命 呵护健康呵护健康DATDATPt.RBCsPt.RBCs+ AHG+ AHG观察凝集并判读结果观察凝集并判读结果IATIATRBCs + RBCs + 血清血清+ AHG+ AHG观察凝集并判读结果观察凝集并判读结果抗人球蛋白检测技术抗人球蛋白检测技术关爱生命关爱生命 呵护健康呵护健康抗人球蛋白试验应用抗人球蛋白试验应用l直接抗人球蛋白试验在临床上主要应用于：直接抗人球蛋白试验在临床上主要应用于： 胎母血型

26、不合新生儿溶血病（胎母血型不合新生儿溶血病（HDNHDN） 免疫溶血性输血反应（免疫溶血性输血反应（LHTRLHTR） 自身免疫溶血性贫血（自身免疫溶血性贫血（AIHAAIHA） 药物导致的免疫溶血性贫血药物导致的免疫溶血性贫血l 间接抗人球蛋白试验应用于：间接抗人球蛋白试验应用于： 红细胞血型定型；红细胞血型定型； 相容性配血实验；相容性配血实验； 产前检查；产前检查； 弱弱D D抗原检测抗原检测 关爱生命关爱生命 呵护健康呵护健康洗涤洗涤加入加入AHGAHG离心离心阳性阳性直接抗人球直接抗人球蛋白蛋白关爱生命关爱生命 呵护健康呵护健康间接抗人球蛋白间接抗人球蛋白+离心离心孵育后洗涤孵育后洗

27、涤阳性阳性阴性阴性阳阳性性阴性阴性加入加入AHGAHG关爱生命关爱生命 呵护健康呵护健康加入对照细胞后离心观察结果加入对照细胞后离心观察结果CoombsCoombs 对照细胞对照细胞 (CCC, CC) (CCC, CC)假阴性结果假阴性结果阴性结果阴性结果阳性阳性阴性阴性关爱生命关爱生命 呵护健康呵护健康洗涤洗涤加入抗人球蛋白试剂后离心加入抗人球蛋白试剂后离心阳性阳性未洗涤未洗涤假阴性假阴性False Negative Tests关爱生命关爱生命 呵护健康呵护健康抗体筛检抗体筛检筛检红细胞IS3730AHGCCOI1+-2+OII3+-2+1 1、表明抗体为、表明抗体为IgMIgM抗体抗体2

28、 2、存在剂量效应、存在剂量效应关爱生命关爱生命 呵护健康呵护健康剂量效应剂量效应 Kidd Kidd、DuffyDuffy、RhRh及及MNMN（MNSsMNSs）系统中抗原存）系统中抗原存在剂量效应。在剂量效应。关爱生命关爱生命 呵护健康呵护健康抗体筛检抗体筛检筛检红细胞IS3730AHGCCOI-3+NTOII-2+表明筛检的抗体为表明筛检的抗体为IgGIgG类抗体类抗体关爱生命关爱生命 呵护健康呵护健康抗体鉴定抗体鉴定D DC Cc cE Ee eK Kk kAHGAHG1 1+ + +- - -+ + + +3+3+2 2+ +- -+ + +- - -+ +- -3 3+ +- -

29、+ +- -+ + +- -3+3+4 4- -+ + +- -+ +- -+ +- -5 5- - -+ + + +- -+ +- -6 6- - -+ +- -+ + + +3+3+Anti-K关爱生命关爱生命 呵护健康呵护健康抗体鉴定抗体鉴定D DC Cc cE Ee eJkJka aJkJkb bAHGAHG1 1+ + +- - -+ + + +W+W+2 2+ +- -+ + +- - -+ +- -3 3+ +- -+ +- -+ + +- -2+2+4 4- -+ + +- -+ + + +W+W+5 5- - -+ + + +- -+ +- -6 6- - -+ +- -+ + +- -2+2+Anti-Jka关爱生命关爱生命 呵护健康呵护健康交叉配血试验交叉配血试验 相容性配血试验，检测受血者血清