小百部药材的总皂苷含量与质量标准研究

1、小百部药材的总皂苷含量与质量标准研究                  作者：胡嘉蕴，卢燕，黄永凤，陈道峰【摘要】目的建立小百部药材的总皂苷含量测定方法并制订质量标准，为该药材的质量控制提供 科学 依据。方法以小百部苷B为对照品，浓硫酸甲醇（73）为显色剂建立比色法测定小百部的总皂苷含量；采用 中国 药典2005版规定的水分测定法、灰分测定法测定小百部药材的水分、总灰分和酸不溶性灰分。结果小百部苷B在10.6127.2 g范围内呈良好的

2、线性关系，r = 0.999 7，平均加样回收率为98.36%，RSD=2.38% (n=6)；小百部总皂苷含量为5.96%7.98%。结论该法操作简便、准确，可用作小百部药材质量评价的定量分析方法。根据测定结果，建议小百部药材总皂苷含量以干燥品计不低于6.0%。 【关键词】   小百部质量标准小百部苷B比色法Abstract：ObjectiveTo establish a colorimetric method to determine the total saponins of Asparagus filicinus root for quality evaluation. Me

3、thodsA colorimetric method was established with aspafilioside B as the chemical reference and a mixture of sulfuric acid and methanol (7:3) as the coloring reagent. The moisture, total ash and acid-insoluble ash were determined according to the methods in Chinese Pharmacopoa 2005.ResultsThere was a

4、good linearity ( r = 0. 9997) within the range of 10.6127.2 g. The average recovery of aspafilioside B was 98.36% with RSD of 2.38%. The contents of total saponins were 5.96% 7.98%. ConclusionThe newly-developed colorimetric method can be used for the quality control of Asparagus filicinus root. It

5、is proposed to contain not less than 6.0% of saponins calculated with reference to the dried drug.Key words： Asparagus filicinus;   Quality standard;   Aspafilioside B;   Colorimetry小百部又名滇百部，为百合科(Liliaceae) 天门冬属(Asparagus) 植物羊齿天门冬Asparagus filicinus Buch.-Ham. ex D.Don的

6、块根，主产于云南和四川，为云南彝族和傣族的习用药物，用于 治疗 气管炎、肺炎和咳嗽，在云南省的一些地区，也作为中药百部的代用品1。2005版云南省中药饮片标准收录了“滇百部饮片”和“蜜滇百部”，但均未见定量测定2。 药 研究表明，小百部具有较强的抗肿瘤活性，超过了同属抗癌药用植物芦笋，是一种具有良好开发前景的天然药物3。本课题组前期的化学和药理实验表明，小百部的小百部苷甲、小百部苷B等6个皂苷类化合物对人肺腺癌A-549和乳腺癌MCF-7肿瘤细胞株均有不同程度的生长抑制活性，皂苷类化合物是小百部抗肿瘤作用的主要活性成分4。为了更好地开发利用小百部药材，本文建立比色法对10个不同产地和不同收集时

7、间的小百部药材进行了总皂苷含量的测定，同时测定了水分、总灰分和酸不溶性灰分，以期为制订小百部的质量标准提供依据和 参考 。 1 仪器与试药    756MC紫外分光光度计（上海第三分析仪器厂）；SHANGPING FA1004天平（上海天平仪器厂）；DHG系列电热恒温鼓风干燥箱（上海华连医疗器械有限公司）；马弗炉（上海鼎奇实业有限公司）；甲醇、浓硫酸等试剂均为分析纯。对照品小百部苷B由本课题组自制4，经HPLC-ELSD检测，纯度达98%以上；经鉴定，10个小百部药材均为A. filicinus的干燥根，凭证样本保存于本教研室。 2  方法与结果 2.1 

8、; 总皂苷含量测定         2.2  水分、总灰分、酸不溶性灰分的测定水分测定参照 中国 药典2005年版（部）附录H水分测定法（烘干法）；总灰分、酸不溶性灰分测定参照中国药典2005年版（部）附录K灰分测定法 5。 3  讨论    本文所研究的小百部又名滇百部1。本品首次以“小百部”药材名收载于云南省药品标准1974版，明确来源为“百合科植物羊齿天门冬Asparagus filicinus Ham.的去皮干燥块根” 6；在2005版云南省中药饮片标准中则以“滇百部

9、饮片”和“蜜滇百部”收录2。“小百部”一名亦见于2005版中国药典附录，但其来源被定为“百合科植物小天门冬A. pseudofilicinus Wang et Tang的干燥根”5。经查，中国药典附录收载的“小百部”为成方制剂“雅叫哈顿散”的配伍药材之一，傣药“雅叫哈顿”最早也收载于1974年版云南省药品标准，但当时处方中明确列出的是“小天冬”，而不是“小百部”，且明确记载百合科小天冬A. pseudofilicinus Wang et Tang与天门冬A. cochinchinensis（Lour.）Merr.的干燥块根同为药材天门冬的正品来源，与同时收录的小百部（羊齿天门冬A. filic

10、inus Ham.的去皮干燥块根）实为两个不同的药材品种6。此外，徐国钧等7学者核查后也指出小百部的学名应采用A. filicinus Ham. ex D. Don。综合以上分析，我们认为2005版中国药典“雅叫哈顿散”处方及附录中收录的“小百部”一名有误，应更正为“小天冬”。 实际上，小百部药材的名称和基源一直比较混乱。在第2版中药大辞典中收录的“小百部”来源为百合科天门冬属植物石刁柏A. officinalis L.的块根，而本文研究的小百部（滇百部）则以其原植物名“羊齿天冬”收录其中8。同样以“羊齿天冬”收录的还有全国中草药汇编 9、 中药学大辞典10等。综合实际情况和各 文献 考虑，我

11、们建议来源于羊齿天门冬块根的药材统一采用“小百部（滇百部）”之名，以示区分。   本课题组前期对小百部化学成分的研究分离得到12个甾体皂苷，体外抗肿瘤活性测试发现，其中的小百部苷甲、小百部苷B等6个化合物对人肺腺癌A-549和乳腺癌MCF-7肿瘤细胞株均有不同程度的生长抑制活性，表明皂苷类化合物是小百部抗肿瘤作用的主要活性成分4。另外，本课题组曾建立HPLC-ELSD法测定小百部中小百部苷B的含量，结果显示，不同产地的小百部药材中小百部苷B的含量从0.128%至0.361%不等，含量差异较大；同时发现天门冬药材的HPLC谱中无小百部苷B峰，选择小百部苷B作为评价小百部药材质

12、量的指标性成分具有一定的专属性11。因此，本实验选择抗肿瘤活性较好的小百部苷B为对照品，建立比色法测定小百部药材的总皂苷含量，作为评价小百部药材质量的 参考 依据。   对供试品溶液的制备方法，我们分别考察了提取溶剂（甲醇、50%乙醇）、提取溶剂用量（10，20，30 ml）、提取方式（超声，加热回流、渗漉）、提取时间（20，30，40 min），最后确定甲醇20 ml超声30 min可提取完全且操作简便易行。同时对纯化方式也进行了考察，主要比较了正丁醇萃取和大孔树脂纯化法，测得的总皂苷含量分别为4.96%和6.02%（云南曲靖2003-09收集样品），另外正丁醇萃取法存在

13、操作繁琐、气味难闻等缺点，而大孔吸附树脂具有吸附容量大、选择性好、易解吸、效率高等优点12，且加样回收率实验结果满意，故采用大孔树脂作为纯化方式。   含量测定结果表明，不同产地的小百部药材的总皂苷含量为5.96%7.98%，与HPLC-ELSD法测定小百部中小百部苷B的含量结果 11相比，总皂苷含量相对稳定，且考虑到小百部的多个皂苷类成分均具有抗肿瘤活性，因此，以总皂苷含量来控制小百部药材的质量更为合理。根据本实验的测定结果，我们建议小百部药材的总皂苷含量以小百部苷B计不少于5.0%；如果以干燥品计，总皂苷含量不少于6.0%。   水分、总灰分和酸不溶

14、性灰分的测定结果显示，小百部药材的水分含量为6.29%9.50%，水分较高，总皂苷含量应以干燥品 计算 较为合理；总灰分含量3.22%4.38%，各批次间差异不显着；酸不溶性灰分含量较低，从0.110%0.510%不等。依据上述结果，建议水分不超过10.0%，总灰分不超过5.0%，酸不溶性灰分不得超过1.0%。此研究结果可作为制定小百部药材质量标准的参考依据。【参考文献】 1云南省药材公司云南中药资源名录M北京： 科学 出版社，1993：6302云南省食品药品监督局云南省中药饮片标准S昆明：云南出版社，2005：863温晶源，李颖，丁声颂中国百合科天门冬属九种药用植物的药理作用筛选J上海医科大学学报，1993，20（2）：1074Zhou L B，Chen T H，Bastow K F，et alFiliasparosides A-D,Cytotoxic Steroidal Saponins from the Roots of Asparagus filicinusJJNatProd，2007，70（8）：12635国家药典委员会中国药典，部S北京：化学 工业 出版社，2005：附录476云南省卫生局云南省药品标准S北京：科学出版社，1974：58 ，62，3227徐国钧，徐珞珊常用中药材品种整理和质量研究M福州：福建科学技术出版社，1997：648南京中医药大