癌胚抗原操作规程

1、 癌胚抗原(CEA)诊断试剂盒时间分辨免疫荧光分析法标准操作规程文件编号编写者审核者批准者 医院医院：科：室：癌胚抗原诊断试剂盒时间分辨免疫荧光分析法标准操作规程版本：执行日期： 共3 页 第 1 页1.原理试剂盒采用双抗体夹心一步法：抗CEA单抗包被于96孔荧免板；依次加入标准品/样本、铕离子(Eu3+)标记的抗CEA单抗，标准或样品中的CEA与包被单抗及Eu3+标记单抗于微孔内发生免疫反应，在微孔表面形成夹心免疫复合物（包被单抗CEAEu3+标记单抗）。洗涤去除游离的Eu3+标记单抗，加入荧光增强液，微孔表面免疫复合物上的Eu3+被荧光增强液解离，并形成稳定的荧光配合物，荧光强度与标准或样

2、品中的CEA浓度呈正比例，通过标准曲线可得出样品中CEA浓度。 2.样本处理使用血清或以肝素作抗凝剂的血浆。280C条件下样本可保存2天，200C可保存更长时间。样本避免反复冻融。若样本中CEA含量大于500 ng/ml，请用生理盐水稀释后再测量。3.试剂本科室使用苏州新波生物技术有限公司癌胚抗原（CEA）时间分辨免疫荧光法诊断试剂盒，试剂盒主要组分如下：a. 癌胚抗原参考标准品：1套，6瓶，1ml/瓶A：0ng/ml； B：2.5ng/ml； C：5 ng/ml；D：16 ng/ml；E：107 ng/ml；F：530 ng/mlb. 铕标记物：1瓶，1mlc. 实验缓冲液：1瓶，30mld

3、. 浓缩洗液：1瓶（40ml，使用前用去离子水作1：25倍稀释）e. 荧光增强液：1瓶，30mlf. 微孔反应板：1块（12×8）g. 吸头：20支h. 说明书：1份医院：科：室癌胚抗原诊断试剂盒时间分辨免疫荧光分析法标准操作规程版本：执行日期： 共 3 页 第 2 页4.仪器（用户自备）4.1 时间分辨荧光分析仪；4.2 微孔洗涤机；4.3 微孔振荡器；5.操作步骤5.1 试剂的准备 洗涤液：将40ml浓缩洗液和960ml去离子水在干净的洗液瓶中混合，作为工作洗涤液备用。 铕标记：使用前一小时内，用实验缓冲液按1：50稀释铕标记（详见操作流程图）。5.2 将实验缓冲液、标准品、待测

4、样品和所需数量的微孔反应条平衡至室温（20250C）。5.3 吸取25l的标准品和样品，按顺序加入相应微孔。5.4 在各微孔内加入200l已稀释的铕标记溶液，在室温下慢速振动120分钟。5.5 洗板6次，将板条在洁净的吸水纸上拍干。5.6 在每个微孔内加入200l的增强液，慢速孵育5分钟。5.7 确定微孔反应条已固定在时间分辨荧光测定仪上，开始检测。6.结果判断：61结果测定用本公司ANYTEST2000时间分辨荧光测定仪或WALLAC公司时间分辨荧光测定仪（1230、1234、1420）测量时，检查程序的参数是否如下所示。如不符，请修改。ASSAY TYPE（分析类型）：IFMA（时间分辨免

5、疫荧光分析法）FITTING METHOD（曲线拟和方式）：PLINE SMOOTHED（平滑样条函数）X-AXIS（X轴）：LOGY-AXIS（Y轴）：LOG-BBLANKS（背景孔数）：2STANDARDS（参考标准点）：5STANDARDS REPLICATES（参考标准点复孔数）：2STANDARD CONC（参考标准点浓度）：2.5STANDARD CONC（参考标准点浓度）：5STANDARD CONC（参考标准点浓度）：16STANDARD CONC（参考标准点浓度）：107STANDARD CONC（参考标准点浓度）：530UNKNOWN REPLICATES（待测样品孔数）：

6、16.2结果判读：用本试剂盒对135份正常人血清进行检测，癌胚抗原ng/ml。建议各实验室建立自己的正常值范围。7临床意义CEA是一种分子量为180200kD的糖蛋白，主要存在于消化道上皮组织、胰腺和肝脏，胎儿和成人消化道也产生少量CEA，但分泌到胃肠道而排出体外，而癌细胞分泌的CEA则进入淋巴液和血液。另外，CEA也见于羊水和胆道、肺、乳腺等组织。CEA检测的临床意义主要在于：1） 恶性肿瘤的辅助诊断。不少恶性肿瘤，特别是胃肠道恶性肿瘤、肺癌、乳腺癌患者，其血清CEA浓度常见明显升高。2） 病情预后和判断。肿瘤患者血清CEA含量增高程度常与肿瘤转移有一定关系，如：肺癌伴有肝转移时其中约85%

7、可见CEA升高。3） 疗效评估和预报复发。肿瘤患者经手术切除、抗癌药物治疗或放疗后病情好转时，血清CEA浓度一般逐渐降低；当治疗效果不佳时，CEA浓度不下降或升高。4） 对肿瘤分期和病变程度的判断。如：血清CEA阳性与乳腺癌分期有关，期约14.8%阳性,期约73%阳性。5） 与AFP联合检测用于肝癌的辅助诊断。部分继发性肝癌可见血清AFP检测呈阴性而CEA检测呈阳性的现象。医院：科：室癌胚抗原诊断试剂盒时间分辨免疫荧光分析法标准操作规程版本：执行日期： 共 3 页 第 3 页8参考值癌胚抗原ng/ml。建议各实验室建立自己的正常值范围。9注意事项9.1 理解说明书，不要混用不同批号的试剂，不要

8、使用过期的试剂。9.2 尽量建立一个干净无尘的实验室环境，对实验的成功起到决定性作用。(因为尘土中含有很多金属离子，会影响实验结果)。9.3 试剂盒与被测样本使用前必须达到室温。9.4 振荡器按照2510变频振荡器标准操作规程设定需要的振荡频率。9.5 微孔洗涤机按照Egate2310全自动微孔洗涤机标准操作规程在每天使用前应进行校正注液量和残自量，注意管道是否畅通。洗涤时，确认每孔必须是干的，洗涤液都注满微孔。洗涤后，每个孔必须是干的，如果仍有水则需拍干。9.6 吸取增强液和铕标记物时，请使用干净的吸头，避免尘土等不必要的污染。加增强液时探头应悬空，避免碰到小孔边缘或其中试剂。9.7 使用医用蒸馏水或去离子水配制洗液。9.8 宜用干净的一次性容器配制铕标记物，应避免铕标记稀释液进入标记物原液中。9.9 封片不能重复使用。9.10 如需稀释标本，请用小牛血清稀释。9.11 所有的样本和本