天然产物化学-黄酮

1、第五章第五章 FLAVONOIDS第一节第一节 概述概述一、基本结构和分类一、基本结构和分类 （一）基本结构（一）基本结构 1952年以前，黄酮类化合物主要是指基本母核年以前，黄酮类化合物主要是指基本母核为为2-苯基色原酮苯基色原酮的一系列化合物。的一系列化合物。 色原酮色原酮 2-苯基色原酮（黄酮）苯基色原酮（黄酮） OO543218765432187654321OO6 现在的现在的黄酮黄酮类化合物则泛指类化合物则泛指两个苯环（两个苯环（A与与B环）环）通过中央通过中央三碳链三碳链相互连接而成相互连接而成的一类化合物。的一类化合物。C6-C3-C6 6O5432187654321ABC 黄酮

2、类化合物的苷元的结构类型根据黄酮类化合物的苷元的结构类型根据三碳链氧三碳链氧化程度、化程度、B环（苯基）连接位置（环（苯基）连接位置（2-位或位或3-位）位）以及以及三碳链是否构成环状三碳链是否构成环状分为下列类型：分为下列类型： 黄酮类（黄酮类（flavones）OOHOOHOHOHluteolin木犀草素木犀草素（luteolin），存在于忍冬藤、菊花、），存在于忍冬藤、菊花、浮萍中，具有抗菌作用。浮萍中，具有抗菌作用。 黄芩为清热解毒类中黄芩为清热解毒类中药，抗菌成分主要有药，抗菌成分主要有黄芩苷黄芩苷(baicalin)、次、次黄芩素黄芩素(wogonin)等。等。OOOOOHO黄芩素

3、(黄色)OOOHHOHO黄芩酶黄芩苷COOHHOOHOHOOOOHHOO次黄芩素黄酮醇类（黄酮醇类（flavonols） 槲皮素槲皮素(quercetin)具有抗炎、止咳祛痰等作用。槲皮素具有抗炎、止咳祛痰等作用。槲皮素片用于治疗支气管炎。此外还有降低血压、增强毛细血管抵片用于治疗支气管炎。此外还有降低血压、增强毛细血管抵抗力、减少毛细血管脆性、降血脂、扩张冠状动脉、增加冠抗力、减少毛细血管脆性、降血脂、扩张冠状动脉、增加冠脉血流量等作用。脉血流量等作用。 芦丁芦丁(rutin)是槲皮素的是槲皮素的O芸香糖苷。用于治疗毛细芸香糖苷。用于治疗毛细管脆弱引起的出血病，并用作高血压的辅助治疗剂。管脆

4、弱引起的出血病，并用作高血压的辅助治疗剂。RUTINOOOHHOOHOHOrutinoseOOOHHOOHOHOHQUERCETIN 豆科植物槐米豆科植物槐米中含有中含有芦丁芦丁和和槲槲皮素皮素。二氢黄酮类二氢黄酮类(flavanones) OOOHOCH3rutinose O橙皮苷(hesperidin),具有Vp样作用甘草苷(liquiritin),具有溃疡抑制作用OOOglcHO柚皮素柚皮素（Naringenin）：来源于芸香科植物柚）：来源于芸香科植物柚(Citrus paradisi Macfadyen)的果实的果实结构式：结构式： 4二氢黄酮醇类二氢黄酮醇类(flavanonols

5、) 水飞蓟素水飞蓟素是二氢黄酮醇与苯丙素衍生物缩合成的是二氢黄酮醇与苯丙素衍生物缩合成的黄酮木脂素类成分。具有保肝作用，用于治疗急、黄酮木脂素类成分。具有保肝作用，用于治疗急、慢性肝炎及肝硬化，代谢中毒性肝损伤。慢性肝炎及肝硬化，代谢中毒性肝损伤。 OOHOOHOHOOCH2OHOHOCH3水飞蓟素(SILYBIN)5查尔酮类（查尔酮类（chalcones） 查尔酮为苯甲醛缩苯乙酮类化合物，其邻查尔酮为苯甲醛缩苯乙酮类化合物，其邻羟基衍生物可视为二氢黄酮的异构体，二者羟基衍生物可视为二氢黄酮的异构体，二者可相互转化。可相互转化。查耳酮654321654321O 二氢黄酮的吡酮环芳香性低，在碱的

6、作用二氢黄酮的吡酮环芳香性低，在碱的作用下易开环生成下易开环生成6-羟基查耳酮，由无色转为深羟基查耳酮，由无色转为深黄色，后者经酸化又能转化为原来的二氢黄黄色，后者经酸化又能转化为原来的二氢黄酮。酮。OHHOOOHO邻羟基查耳酮二氢黄酮 红花所含的色素红花所含的色素红花苷红花苷是第一个发现的查耳酮类植是第一个发现的查耳酮类植物成分。物成分。 红花在开花初期，花冠呈淡黄色；开花中期，花红花在开花初期，花冠呈淡黄色；开花中期，花冠呈深黄色；开花后期或采收干燥过程中由于酶的冠呈深黄色；开花后期或采收干燥过程中由于酶的作用，氧化成红色。作用，氧化成红色。SO2氧化酶异构化醌式红花苷(红色)红花苷(ca

7、rthamone)(黄色)新红花苷(neo-carthamin)(无色)OHOOOOglcOHOHOHOHOOglcOHOOHOHOOglcOH6异黄酮类异黄酮类 (isoflavones)取代基7,4-二OH4-OH, 7-glc7,4-二OH,8-C-glc化合物名称大豆素大豆苷葛根素OOHOOH主要存在于豆科、鸢（主要存在于豆科、鸢（yuan）尾科等植物中。）尾科等植物中。 如葛根主要含有下列几种异黄酮类成分。如葛根主要含有下列几种异黄酮类成分。 葛根总黄酮具有扩冠、增加冠脉流量及降低心肌耗氧葛根总黄酮具有扩冠、增加冠脉流量及降低心肌耗氧量等作用。量等作用。大豆素大豆素具有类似罂粟碱的解

8、痉作用。具有类似罂粟碱的解痉作用。 大豆苷、大豆苷、葛根素葛根素及大豆素均能缓解高血压患者的头痛及大豆素均能缓解高血压患者的头痛等症状。等症状。 7二氢异黄酮类二氢异黄酮类紫檀素OOOOCH3O8双黄酮双黄酮类类 由二分子黄酮衍生物聚合生成的二聚物，由二分子黄酮衍生物聚合生成的二聚物，多分布于裸子植物中。银杏中含有多种双黄多分布于裸子植物中。银杏中含有多种双黄酮，如酮，如银杏素银杏素。GINKGETINOOOHCH3OOCH3OHHOOHOO银杏成分银杏成分9花色苷类花色苷类(anthocyanidins) 是使花、叶、果、茎等呈现蓝、紫、红是使花、叶、果、茎等呈现蓝、紫、红等颜色的色素。以苷

9、的形式存在于细胞液中，等颜色的色素。以苷的形式存在于细胞液中，经水解可生成苷元经水解可生成苷元花色素及糖。花色素及糖。矢车菊苷元(兰色)花青素母核OHOOHOHOHO10黄烷黄烷-3-醇醇(flavan-3-ols)及黄烷及黄烷-3，4-二醇二醇(flavan-3,4-diols)类类(+)儿茶素(-)表儿茶素OHOOHOHHOHHOHHOHOOHOHOHOHH11苯骈色酮苯骈色酮 (xanthanes) 87654321异芒果素(isomengiferin)OOHOHOOHOHglc石韦中的石韦中的异芒果素异芒果素具有止咳祛痰的功效。具有止咳祛痰的功效。 12橙酮类化合物橙酮类化合物OCHH

10、OOHOHO硫磺菊素硫磺菊素(sulphuretin)二、黄酮类化合物的生物活二、黄酮类化合物的生物活性性 1. 对心血管系统的作用对心血管系统的作用维生素维生素P样作用：芦丁、橙皮苷等有维生素样作用：芦丁、橙皮苷等有维生素P样作用，能降样作用，能降低血管脆性及异常通透性，可用作防治高血压及动脉硬化低血管脆性及异常通透性，可用作防治高血压及动脉硬化的辅助治疗剂。的辅助治疗剂。扩冠作用：芦丁、槲皮素、葛根素、人工合成的力可定。扩冠作用：芦丁、槲皮素、葛根素、人工合成的力可定。降血脂及胆固醇：木樨草素降血脂及胆固醇：木樨草素 2. 抗肝脏毒作用抗肝脏毒作用 从水飞蓟种子中得到的水飞蓟素具有保肝作用

11、，从水飞蓟种子中得到的水飞蓟素具有保肝作用，用于治疗急、慢性肝炎、肝硬化及多种中毒性用于治疗急、慢性肝炎、肝硬化及多种中毒性肝损伤。肝损伤。 （+）-儿茶素儿茶素(catergen)也可抗肝脏毒作用，也可抗肝脏毒作用，治疗脂肪肝及因半乳糖胺或四氯化碳等引起的治疗脂肪肝及因半乳糖胺或四氯化碳等引起的中毒性肝损伤。中毒性肝损伤。 3. 抗炎抗炎 芦丁及其衍生物羟乙基芦丁、二氢槲皮素等具芦丁及其衍生物羟乙基芦丁、二氢槲皮素等具 抗炎作用。抗炎作用。 4. 抗菌及抗病毒作用抗菌及抗病毒作用 如木樨草素、黄芩苷、黄芩素如木樨草素、黄芩苷、黄芩素 5. 解痉作用解痉作用 异甘草素、大豆素：解除平滑肌痉挛；

12、异甘草素、大豆素：解除平滑肌痉挛； 大豆苷、葛根素及葛根总黄酮可缓解高血压患大豆苷、葛根素及葛根总黄酮可缓解高血压患者的头痛等症状；者的头痛等症状； 杜鹃素、川陈皮素、槲皮素、山奈酚、芫花素、杜鹃素、川陈皮素、槲皮素、山奈酚、芫花素、羟基芫花素：止咳祛痰。羟基芫花素：止咳祛痰。 6. 雌性激素样作用雌性激素样作用 大豆素大豆素(daidzein)等异黄酮具有雌性激等异黄酮具有雌性激素样作用，可能与它们与己烯雌酚结构类似。素样作用，可能与它们与己烯雌酚结构类似。己烯雌酚HOOH大豆素(dadzein)OOHOOH 7. 清除人体自由基作用清除人体自由基作用 黄酮类化合物多具有酚羟基，易氧化成醌类

13、而黄酮类化合物多具有酚羟基，易氧化成醌类而提供氢离子，故有显著的抗氧特点。提供氢离子，故有显著的抗氧特点。 另外还有降血脂、血糖，抗动脉粥样硬化及抗另外还有降血脂、血糖，抗动脉粥样硬化及抗癌抗突变等作用。癌抗突变等作用。 8.抗肿瘤作用抗肿瘤作用 第二节 黄酮类化合物的理化性质及颜色反应 一、性状一、性状 1. 多为结晶性固体，少为（如黄酮苷类）无定多为结晶性固体，少为（如黄酮苷类）无定形粉末。形粉末。 2. 旋光性：旋光性： 游离苷元中，除二氢黄酮、二氢黄酮醇、黄游离苷元中，除二氢黄酮、二氢黄酮醇、黄烷、黄烷醇及双黄酮有旋光外，其余无旋光性。烷、黄烷醇及双黄酮有旋光外，其余无旋光性。 苷类由

14、于结构中引入糖的分子，均有旋光性，苷类由于结构中引入糖的分子，均有旋光性，且多为左旋。且多为左旋。 3. 颜色：与颜色：与分子中是否存在交叉共轭体系分子中是否存在交叉共轭体系助助色团的数目及色团的数目及取代基的位置有关。取代基的位置有关。 色原酮部分原本无色，但在色原酮部分原本无色，但在2位引入苯环后，位引入苯环后，即形成交叉共轭体系，且通过电子的转移，重排，即形成交叉共轭体系，且通过电子的转移，重排，使共轭链延长，而表现出颜色。使共轭链延长，而表现出颜色。OOOOOO 黄酮、黄酮醇及苷类黄酮、黄酮醇及苷类 灰黄灰黄-黄色黄色 查耳酮查耳酮 黄黄-橙黄色橙黄色 二氢黄酮、二氢黄酮醇二氢黄酮、二

15、氢黄酮醇 无色无色 异黄酮异黄酮 微黄色微黄色 其中，黄酮、黄酮醇及苷类、查耳酮等因分子中其中，黄酮、黄酮醇及苷类、查耳酮等因分子中存在交叉共轭体系，在存在交叉共轭体系，在7,4位引入位引入-OH, OCH3等等供电子基团则促进电子移位、重排，使化合物颜供电子基团则促进电子移位、重排，使化合物颜色加深。色加深。 花色苷及其苷元的颜色随花色苷及其苷元的颜色随pH的不同而改变：呈现的不同而改变：呈现红（红（pH8.5） 二、溶解度u游离苷元难溶或不溶于水，易溶于游离苷元难溶或不溶于水，易溶于MeOH, EtOH, EtOAc, Et2Ou黄酮、黄酮醇及查耳酮是平面型分子，分子堆黄酮、黄酮醇及查耳酮

16、是平面型分子，分子堆砌紧密，分子间引力较大，更难溶于水。砌紧密，分子间引力较大，更难溶于水。u二氢黄酮、二氢黄酮醇是非平面型分子，分子二氢黄酮、二氢黄酮醇是非平面型分子，分子排列不紧密，分子间引力降低，对水的溶解度排列不紧密，分子间引力降低，对水的溶解度较大。较大。 u 花色苷元（花青素）类虽系平面型分花色苷元（花青素）类虽系平面型分子，子，但因以离子形式存在，具有盐的通性，故亲但因以离子形式存在，具有盐的通性，故亲水性较强，水溶度较大。水性较强，水溶度较大。花青素二氢黄酮X -或OH -OORHOHu黄酮苷元引入羟基越多，水溶性越强，羟基甲黄酮苷元引入羟基越多，水溶性越强，羟基甲基化后，则增

17、加在有机溶剂中的溶解度。基化后，则增加在有机溶剂中的溶解度。u如一般黄酮类化合物不溶于石油醚中，可与脂如一般黄酮类化合物不溶于石油醚中，可与脂溶性杂质分开，但川陈皮素（溶性杂质分开，但川陈皮素（5,6,7,8,3,4-六甲氧基黄酮）却可溶于石油醚。六甲氧基黄酮）却可溶于石油醚。u黄酮类化合物的羟基苷化后，水溶性相应增大，黄酮类化合物的羟基苷化后，水溶性相应增大，而在有机溶剂中的溶解度相应减小。而在有机溶剂中的溶解度相应减小。u黄酮苷一般易溶于黄酮苷一般易溶于H2O, MeOH, EtOH等，难等，难溶或不溶于苯，氯仿等。溶或不溶于苯，氯仿等。三、酸碱性1. 酸性酸性 黄酮类化合物多具有酚羟基而

18、呈酸性，可黄酮类化合物多具有酚羟基而呈酸性，可 溶于碱性水液，吡啶，甲酰胺及二甲基甲酰胺。溶于碱性水液，吡啶，甲酰胺及二甲基甲酰胺。 酸性强弱顺序：酸性强弱顺序： 7, 4-二羟基二羟基 7, 或或4羟基羟基 一般酚羟基一般酚羟基5-羟基羟基 此性质可用于提取、分离及鉴定工作。此性质可用于提取、分离及鉴定工作。 2. 碱性碱性 -吡喃酮上的吡喃酮上的1-位氧原子上有未共用电子对，位氧原子上有未共用电子对，表性微弱的碱性，可与强无机酸如浓硫酸，盐酸生表性微弱的碱性，可与强无机酸如浓硫酸，盐酸生成成盐，但极不稳定，加水即可分解。盐，但极不稳定，加水即可分解。 黄酮类化合物溶于浓硫酸中生成的黄酮类化

19、合物溶于浓硫酸中生成的盐常盐常表性特殊的颜色，可用于鉴别。表性特殊的颜色，可用于鉴别。H2OHClClOOHOO钅钅 羊羊钅钅四、显色反应 (一一)还原反应还原反应 1. 盐酸盐酸-镁粉（盐酸镁粉（盐酸-锌粉）反应锌粉）反应 黄酮、黄酮醇及二氢黄酮、二氢黄酮醇类在盐酸黄酮、黄酮醇及二氢黄酮、二氢黄酮醇类在盐酸-镁粉作用下，易被氢化还原，迅速生成红镁粉作用下，易被氢化还原，迅速生成红-紫红（个别紫红（个别有绿有绿-兰色）。兰色）。 将样品溶于甲醇或乙醇，加少量镁粉振摇，滴加将样品溶于甲醇或乙醇，加少量镁粉振摇，滴加几滴浓盐酸，几滴浓盐酸，1-2分钟内（必要时微热）即可出现颜色。分钟内（必要时微热

20、）即可出现颜色。多显橙红多显橙红-紫红色，少数兰紫红色，少数兰-紫色，紫色，B环有环有-OH或或OCH3取代时，颜色随之加深，查耳酮、橙酮、儿茶素类则取代时，颜色随之加深，查耳酮、橙酮、儿茶素类则不反应。不反应。 花色素及部分查耳酮、橙酮等在浓盐酸酸性条件花色素及部分查耳酮、橙酮等在浓盐酸酸性条件下也会发生色变，故须先做一对照。下也会发生色变，故须先做一对照。 2.四氢硼钠反应四氢硼钠反应 与二氢黄酮类化合物产生红与二氢黄酮类化合物产生红-紫色。紫色。 取样品取样品10mg溶于甲醇，加溶于甲醇，加NaBH4 10mg，再，再滴加滴加1%浓盐酸或浓硫酸，呈红浓盐酸或浓硫酸，呈红-紫色。紫色。 （

21、二）金属盐类试剂的络合反应 黄酮类化合物分子结构中多有黄酮类化合物分子结构中多有3-OH, 4=O; 5-OH, 4=O; 邻二酚羟基，常可与铝盐、铅盐、锆盐、镁盐邻二酚羟基，常可与铝盐、铅盐、锆盐、镁盐等试剂生成有色络合物。等试剂生成有色络合物。 1. 铝盐铝盐 1%AlCl3或或Al(NO3)3： 生成络合物为黄色生成络合物为黄色( max=415nm)，并有荧光。，并有荧光。 2. 铅盐铅盐 1%PbAc2或碱式醋酸铅水液或碱式醋酸铅水液: 生成黄生成黄-红色红色沉淀。沉淀。 醋酸铅可沉淀具有邻二酚羟基或兼有醋酸铅可沉淀具有邻二酚羟基或兼有3-OH, 4=O或或5-OH, 4=O者。者。

22、 碱式醋酸铅可沉淀具有一碱式醋酸铅可沉淀具有一般酚类化合物。般酚类化合物。 3. 锆盐锆盐: 2%氯氧化锆甲醇液氯氧化锆甲醇液观察颜色2%枸橼酸甲醇液黄色1ml2% ZrOCl210ml甲醇溶样品0.5-1mg黄色不褪黄色褪去2%枸橼酸黄色锆络合物 锆盐3-OH, 4=O5-OH, 4=O 4. 镁盐镁盐 醋酸镁甲醇液作显色剂，可在纸上醋酸镁甲醇液作显色剂，可在纸上进行。进行。 二氢黄酮（醇）类显天蓝色荧光，若二氢黄酮（醇）类显天蓝色荧光，若具有具有C5-OH，色泽更明显。，色泽更明显。 而黄酮、黄酮醇而黄酮、黄酮醇及异黄酮类则显黄及异黄酮类则显黄-橙黄橙黄-褐色。褐色。 5. 氯化锶氯化锶(

23、SrCl2) 使具有邻二酚羟基的黄酮使具有邻二酚羟基的黄酮显绿显绿-棕色棕色-黑色沉淀。黑色沉淀。 6. 氯化铁氯化铁(FeCl3) 检查酚羟基。检查酚羟基。 多数黄酮多数黄酮类化合物具有酚羟基，可产生正反应，生成绿、类化合物具有酚羟基，可产生正反应，生成绿、蓝、黑、紫等颜色。蓝、黑、紫等颜色。（三）硼酸显色反应（三）硼酸显色反应 条件：条件：1 具有下列结构（具有下列结构（5-羟基黄酮，羟基黄酮，2-羟基查耳酮）羟基查耳酮） 2 有无机酸或有机酸存在有无机酸或有机酸存在在草酸存在下，显黄色并带绿色荧光。在草酸存在下，显黄色并带绿色荧光。在枸橼酸丙酮存在条件下，只显黄色而无荧光。在枸橼酸丙酮存

24、在条件下，只显黄色而无荧光。 CCCOOHHOHOHOOO（四）碱性试剂显色反应 日光及紫外光下，通过纸斑反应，观察样日光及紫外光下，通过纸斑反应，观察样品用碱性试剂处理后的色变情况。品用碱性试剂处理后的色变情况。 1. 二氢黄酮类易在碱液中开环，转变成相应异二氢黄酮类易在碱液中开环，转变成相应异构体构体查耳酮类化合物，显橙查耳酮类化合物，显橙-红色。红色。 2. 黄酮醇类在碱液中先呈黄色，通入空气后黄酮醇类在碱液中先呈黄色，通入空气后变为棕色，据此可与黄酮类区别。变为棕色，据此可与黄酮类区别。 3. 黄酮类化合物当分子中有邻二酚羟基取代黄酮类化合物当分子中有邻二酚羟基取代或或3,4-二羟基取

25、代时，在碱液中不安定，很快二羟基取代时，在碱液中不安定，很快氧化，由黄色氧化，由黄色深红色深红色绿棕色沉淀。绿棕色沉淀。 (五)与五氯化锑的反应 查耳酮的无水查耳酮的无水(!)CCl4溶液与五氯化锑作溶液与五氯化锑作用生成红或紫红沉淀用生成红或紫红沉淀,黄酮、黄酮醇、二氢黄酮黄酮、黄酮醇、二氢黄酮类显黄类显黄-橙黄色。橙黄色。 方法方法：样品：样品5-10mg溶于溶于5ml无水无水CCl4中，加中，加1ml 2%的五氯化锑的的五氯化锑的CCl4溶液。溶液。 反应必须无水，否则生成沉淀不稳定。反应必须无水，否则生成沉淀不稳定。（六）Gibbs反应 检查检查5-OH对位未被取代的黄酮。对位未被取代

26、的黄酮。 将样品溶于吡啶中，加入将样品溶于吡啶中，加入Gibbs试剂显蓝或蓝试剂显蓝或蓝绿色。绿色。 Gibbs试剂试剂: 甲液：甲液：0.5%2,6-二氯苯醌二氯苯醌-4氯亚胺的乙醇溶氯亚胺的乙醇溶液。液。 乙液：硼酸乙液：硼酸-氯化钾氯化钾-氢氧化钾缓冲液氢氧化钾缓冲液(pH9.4)第三节 黄酮类化合物的提取分离 一、提取一、提取 黄酮类化合物在花、液、果等组织中，多以苷黄酮类化合物在花、液、果等组织中，多以苷的形式存在；的形式存在； 在木部坚硬组织中，多以游离苷元形式存在；在木部坚硬组织中，多以游离苷元形式存在； 根据化合物极性不同，溶解性不同，采用不同根据化合物极性不同，溶解性不同，采

27、用不同溶剂提取。溶剂提取。 1. 苷元苷元 多用多用CHCl3、乙醚、乙酸乙酯等极性较小溶剂提取；、乙醚、乙酸乙酯等极性较小溶剂提取； 对于多对于多OCH3化的成分，用苯、石油醚提取；化的成分，用苯、石油醚提取； 对于极对于极性大的成分，如查耳酮、橙酮、双黄酮、羟基黄酮等，性大的成分，如查耳酮、橙酮、双黄酮、羟基黄酮等，用乙酸乙酯、乙醇、丙酮、甲醇：水用乙酸乙酯、乙醇、丙酮、甲醇：水(1：1)等溶剂提取。等溶剂提取。 2. 苷类苷类 水或热水提取，（多糖苷在热水中溶解度较大，在冷水水或热水提取，（多糖苷在热水中溶解度较大，在冷水中溶解度较小）；也可用乙醇、甲醇、乙酸乙酯提取。中溶解度较小）；也

28、可用乙醇、甲醇、乙酸乙酯提取。 3. 含羟基的苷或苷元，可用碱水提取。含羟基的苷或苷元，可用碱水提取。 4. 提取花青素类可加入少量酸，但一般黄酮类化合物则提取花青素类可加入少量酸，但一般黄酮类化合物则应避免。应避免。 二、粗提物的精制处理 1 溶剂萃取法去杂溶剂萃取法去杂 石油醚：除去叶绿素、胡罗卜素等脂溶性色素石油醚：除去叶绿素、胡罗卜素等脂溶性色素 水溶醇沉：除去蛋白质、多糖、大分子水溶性水溶醇沉：除去蛋白质、多糖、大分子水溶性物质物质 逆流分配：水逆流分配：水-乙酸乙酯，正丁醇乙酸乙酯，正丁醇-石油醚石油醚 在萃取除杂的同时，可使不同极性或极性相差在萃取除杂的同时，可使不同极性或极性相

29、差较大者分离，如极性不同的苷和苷元，极性苷较大者分离，如极性不同的苷和苷元，极性苷元和非极性苷元。元和非极性苷元。 2 碱水提酸沉淀法碱水提酸沉淀法 适用于含酚羟基的化合物，如槐米中芦丁的提适用于含酚羟基的化合物，如槐米中芦丁的提取。取。 注意事项：注意事项： 酸碱度不宜过大酸碱度不宜过大 邻二酚羟基的保护：碱性条件下，邻二酚羟邻二酚羟基的保护：碱性条件下，邻二酚羟基易被氧化，加硼砂保护基易被氧化，加硼砂保护 石灰乳的加入可除去果胶、粘液等水溶性酸石灰乳的加入可除去果胶、粘液等水溶性酸性杂质性杂质 3 炭粉吸附法炭粉吸附法 适用于苷类的精制工作。适用于苷类的精制工作。 植物的甲醇提取液加活性炭

30、至吸附完全，过滤植物的甲醇提取液加活性炭至吸附完全，过滤得吸附苷的活性炭粉末。得吸附苷的活性炭粉末。 依次用沸甲醇、沸水、依次用沸甲醇、沸水、7%酚酚/水、水、15%酚酚/醇洗脱，分步收集、检查、合并。醇洗脱，分步收集、检查、合并。 大部分苷类可用大部分苷类可用7%酚酚/水洗下，经减压浓缩水洗下，经减压浓缩至小体积，乙醚除酚，余下水层经减压浓缩得至小体积，乙醚除酚，余下水层经减压浓缩得较纯黄酮苷。较纯黄酮苷。 4 离子交换法离子交换法 用阳离子交换树脂从水提液中吸附黄酮类化合用阳离子交换树脂从水提液中吸附黄酮类化合物，与不被吸附的杂质分离，再用甲醇将黄酮物，与不被吸附的杂质分离，再用甲醇将黄酮

31、类化合物洗脱。类化合物洗脱。 RSO3-H+ ArOH（黄酮）（黄酮） 无法交换，故无法交换，故实际上树脂仅起到吸附作用。实际上树脂仅起到吸附作用。 三、分离极性大小不同，利用吸附或分配原理进行分离极性大小不同，利用吸附或分配原理进行分离 常常用吸附剂有聚酰胺、硅胶、纤维素粉。用吸附剂有聚酰胺、硅胶、纤维素粉。 ）聚酰胺层析：聚酰胺层析：主要有聚己内酰胺型主要有聚己内酰胺型(Perlon)、六次甲基二胺已二酸盐六次甲基二胺已二酸盐(Nylon)型、聚乙烯吡咯烷酮型、聚乙烯吡咯烷酮(Polyclar)型三种。型三种。 其原理是酰胺羰基与黄酮酚羟基形成氢键缔合而吸附，其原理是酰胺羰基与黄酮酚羟基形

32、成氢键缔合而吸附，吸附能力与酚羟基多少、位置及氢键缔合力大小有关。吸附能力与酚羟基多少、位置及氢键缔合力大小有关。 各种溶剂在聚酰胺柱上洗脱能力由弱至强依次为：各种溶剂在聚酰胺柱上洗脱能力由弱至强依次为： 水，甲醇，丙酮，氢氧化钠水溶液，甲酰胺，二甲基水，甲醇，丙酮，氢氧化钠水溶液，甲酰胺，二甲基甲酰胺，脲素水溶液。甲酰胺，脲素水溶液。 ）硅胶层析）硅胶层析 对酚羟基多的黄酮类，如多羟基黄酮及对酚羟基多的黄酮类，如多羟基黄酮及 其其苷类，硅胶减活性使用苷类，硅胶减活性使用 对酚羟基少的黄酮类，如甲基化、乙酰化黄对酚羟基少的黄酮类，如甲基化、乙酰化黄酮及二氢黄酮、异黄酮，则无须减活性。酮及二氢黄

33、酮、异黄酮，则无须减活性。 2. 利用分子大小不同，用利用分子大小不同，用葡聚糖凝胶葡聚糖凝胶分子筛分离分子筛分离 主要用两种型号的凝胶主要用两种型号的凝胶 Sephadex-G型和型和Sephadex-LH20型型 分离游离黄酮主要是吸附作用，极性小分离游离黄酮主要是吸附作用，极性小大洗脱。大洗脱。 分离黄酮苷类，主要是分子筛作用，分子大分离黄酮苷类，主要是分子筛作用，分子大小洗脱。小洗脱。 总的洗脱顺序：糖多的苷总的洗脱顺序：糖多的苷糖少的苷糖少的苷游离苷元（极游离苷元（极性小性小大）大） 常用洗脱剂：常用洗脱剂： 碱性水溶液，含盐水溶液碱性水溶液，含盐水溶液 醇及含水醇醇及含水醇 含水丙

34、酮，甲醇氯仿含水丙酮，甲醇氯仿 利用酸性强弱，采用利用酸性强弱，采用pH梯度萃取法梯度萃取法 混合物溶于有机溶剂，依次用混合物溶于有机溶剂，依次用NaHCO3、Na2CO3、0.2%NaOH、4%NaOH萃取，萃取， 相应的黄酮类化合物洗脱顺序：相应的黄酮类化合物洗脱顺序：7,4二羟基二羟基7或或4羟基羟基一般酚羟基一般酚羟基羟基黄酮羟基黄酮 根据分子中某些特定官能团进行分离根据分子中某些特定官能团进行分离 醋酸铅沉淀法醋酸铅沉淀法 硼酸络合法：根据具有邻二酚羟基的黄酮与硼硼酸络合法：根据具有邻二酚羟基的黄酮与硼酸络合，生成物易溶于水的性质与其它类型黄酸络合，生成物易溶于水的性质与其它类型黄酮

35、分离。酮分离。 通常在不与水混溶的有机溶剂如乙通常在不与水混溶的有机溶剂如乙醚中，用硼酸液萃取，水相即为邻二酚羟基类醚中，用硼酸液萃取，水相即为邻二酚羟基类黄酮。黄酮。 第四节 黄酮类化合物的检识与结构测定 目前主要采用的方法有：目前主要采用的方法有： 与标准品或与文献对照与标准品或与文献对照PPC或或TLC得到的得到的Rf或或hRf值（值（Rf 100） 分析对比样品在甲醇溶液中及加入酸、碱或分析对比样品在甲醇溶液中及加入酸、碱或金属盐类试剂后得到的金属盐类试剂后得到的UV光谱光谱 1H-NMR 13C-NMR MS 一、层析在黄酮类鉴定中的作用 1. 纸层析纸层析(PPC) 苷类成分可采用双向展开，第一相展开采用醇苷类成分可采用双向展开，第一相展开采用醇性溶剂，如性溶剂，如BAW系统（正丁醇：系统（正丁醇： 醋酸：水醋酸：水4：1：5上层）；第二相展开用水性溶剂，如氯仿：上层）；第二相展开用水性溶剂，如氯仿：醋酸：水（醋酸：水（3：6：1） 苷元则多采用醇性溶剂。苷元则多采用醇性溶剂。 花色苷及其苷元，可用含盐酸或醋酸的溶剂。花色苷及其苷元，可用含盐酸或醋酸的溶剂。 2. 薄层层析薄