Ⅰ群4型禽腺病毒灭活疫苗的试制及质量评价

1、I群4型禽腺病毒灭活疫苗的试制及质量评价1987年,一种由禽腺病毒(Fowlaviadenoviruses,FAdVs)引起的心包积水肝炎综合征(Hydropericardialhepatitissyndrome,HHS)为典型病理变化的疾病在巴基斯坦靠近卡拉奇的安卡拉地区被发现,故该病又称为安卡拉病、安哥拉病(Angola'sdisease,ADV)、荔枝病,经鉴定病原为禽腺病毒4型(Fowladenovirusserotype-4,FAdV-4)。2015年6月以来,该病在我国安徽、河南、辽宁、山东、吉林、河北等部分地区暴发,死亡率高达20%30%给我国的养禽业带来了较大的,损失。

2、近几年,在国内报道的主要流行株是血清4型和8b型禽腺病毒,其中血清4型毒株占据主导地位,而目前市场上没有正规商品化疫苗进行针对性预防。因此,血清4型的疫苗研制对防控该病就显得尤为重要。1 .禽腺病毒4型(Fowladenovirusserotype-4,FAV-4)的培养方式选择：为了能够加快试制进度,避免中间试制过程出现阻碍,在试制开始之前,需要对FAdV-4进行初步的培养特性研究，以选择一种最佳的培养扩毒载体。当前疫苗企业在大生产过程中培养禽病毒的主要方式有两种,一是鸡胚扩毒,二是细胞扩毒,两种方式各有其优缺点。但是,FAdV-4究竟适合哪种方式培养扩毒，需要通过试验来获悉。本试验通过接种

3、无特定病原体(SpecficpathogenFree,SPF)鸡胚与鸡肝癌细胞(LMH细胞)两种方式培养FAdV-4,结果发现从培养的效果来看，接种SPF®胚培养FAdV-4,会随着传代次数的增多,病毒的效价会逐渐降低,通过接种卵黄囊能获得较高的效价,通过尿囊腔接种培养获得的FAdV-4病毒液效价并不高。但,实际的大生产,通过卵黄囊接种的方式比通过尿囊腔接种的方式效率低,不利于后期大生产。通过LMHffl胞培养扩毒，不仅可以连续培养，传代次数的增多对病毒效价的影响不大,而且LMHffl胞培养扩毒,能够获得较高的病毒效价。2 .接毒方式筛选：确立了LMHffl胞培养FAdV-4的方案，

4、对于当前运用较多的几种接毒方式,哪一种更适合于FAdV-4的接种呢?本研究试制通过筛做三种接毒方式（吸附接种法、不吸附接种法、同步接种法）的对比试验,最终确定以不吸附接种法更适合于FAdV-4的培养,而同步接种法适合于FAdV-4的病毒含量测定。3.两种血清的对比:血清对细胞的培养起着关键的作用,因此,血清也是运用细胞生产线生产疫苗的企业最大成本项,选出最合适、最经济的培养血清,有利于后期规模化生产FAdV-4疫苗，本试制研究通过对当前市场上较为畅销的两家企业（金源康及维克生）血清做对比试验,获得的试验结果表明维克生血清更加适合于LMHffl胞的培养；而金源康血清更加适合于LMHffl胞的换液

5、接毒。4.生产种毒的制备、保种、检测：由于本试验需采用LMHffl胞培养FAdV-4,因此所需的种毒量较多,故前期需制备足够量的生产种毒,并且为了防止种毒的效价随着保存时间的延长而降低,所以须对种毒进行扩繁,同时筛选效价高的批次作为生产种毒，并同时对该批次进行冻干保种。本试验采用LMHffl胞培养FAdV-4,本试验采用不吸附接种法接种LMFffl胞培养FAdV-4扩毒，共获得6000mL种毒,冻干保种100瓶。按照生物品检验规程进行病毒含量、外源病毒、细菌、支原体等进行检测,所有检测指标均满足要求。5.半成品的制备及检测:本试制研究将FAdV-4生产种毒按0.1%的接毒比但J接种到LMHff

6、l胞中，以转瓶培养的方式进行生产，制备抗原液,共制备了5批半成品,经检测,本次试制所获得的5批半成品的所有检测指标均符合要求,表明该工艺流程能够稳定生产出合格的半成品,可推广到大生产中。6.成品的制备及质量评价:本试验制通向获得的5批半成品中加入矿物油佐剂,进行混合乳化制得5批I群4型禽腺病毒灭活疫苗,用于预防I群4型禽腺病毒引起的心包积水肝炎综合征(HHS),按照生物品检验规程对此5批成品的质量进行性状、装量、无菌、安全性、效价、甲醛残留量等指标的检测,各评价指标均满足要求。同时,还制备了一批新流腺三联灭活疫苗,与其他厂家的新流腺三联灭活疫苗进行了对比,对比显示,试制的这批新流腺三联灭活疫苗的质量,与国