RNA的琼脂糖凝胶电泳实验原理和步骤_第1页
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1、RNA的琼脂糖凝胶电泳实验原理和步骤关键词：RNA琼脂糖电泳2012-03-0900:00来源：互联网点击次数：38148一、实验目的掌握植物总RNA非变性胶电泳的原理和方法。二、实验原理RNA电泳可以在变性及非变性两种条件下进行。非变性电泳使用%勺凝胶，不同的RNA条带也能分开，但无法判断其分子量。只有在完全变性的条件下，RNA的泳动率才与分子量的对数呈线性关系。因此要测定RNA分子量时，一定要用变性凝胶。在需快速检测所提总RNA样品完整性时，配制普通的1%琼脂糖凝胶即可。25S（rRNA（占80T5%）除5s1，物RNA<tRNA及小分子RNA（占1015%）寡聚脱氧胸音层析柱、实验

2、材料、器具及药品蘑菇的总RNA溶液。电泳仪，电泳槽，电子天平，移液器，枪头，微波炉，紫外透射检测仪等。琼脂糖，1XTAE电泳缓冲液，gg/ml澳化乙锭(EBB10X载样缓冲液。四、实验步骤(1)用1XTAE电泳缓冲液制作琼脂糖凝胶，加1XTAE电泳缓冲液至液面覆盖凝胶。(2)在超净工作台上，用移液器吸取总RNA样品4/于封口膜上。在实验台上再加入5屋1XTAE电泳缓冲液及1膜的10X载样缓冲液，混匀后，小心加入点样孔。(3)打开电源开关，调节电压至100V,使RNA由负极向正极电泳，约30min后将凝胶放入EB染液中染色5min,用清水稍微漂洗。在紫外透射检测仪上观察RNA电泳结果。1% Ek

3、natui 喋萩" ru« Gel<-Jlfi rRTfA*- tBArRNA【E tiHlvh Otalh7 TZ RNAjim hTgl RhALmn，才匕足&7 D.rpdN Tq*1 Hh ARNA的变性琼脂糖凝胶检测试齐I：(1)MOPS缓冲液(10*):L吗咻代丙烷磺酸(MOPS),LNaAc,10mol/LEDTA(2)上样染料：50%t油，1mmol/LEDTA，喊酚蓝，"甲苯蓝。(3)甲醛。(4)去离子甲酰胺。v电泳槽清洗：去污剂洗干净(一般浸泡过夜)一一水冲洗乙醇干燥一一3%H2O2灌满一一室温放置10分钟一一DEPCK冲洗。操作：(1)将制胶用具用70%乙醇冲洗一遍，晾干备用。(2)配制琼脂糖凝胶称取琼脂糖，置干净的100ml锥形瓶中，加入40ml蒸储水，微波炉内加热使琼脂糖彻底溶化均匀。待胶凉至60-70C,依次向其中加入9ml甲醛、5ml10XMOPSg冲液和澳化乙锭，混合均匀。灌制琼脂糖凝胶。（ 3） 样品准备： 取DEPCM理过的500ul小离心管，依次加入如下试剂：10xMOP飒冲液2ul,甲醛，甲酰胺（去离子）10ul,RNA样品，混匀。 将离心管置于60水浴中保10分钟，再置冰上2分钟。 向管中加入3ul上样染料，

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