怎样做葡萄酒苹果酸测定

1、怎样做葡萄酒苹果酸测定 一，原理： 龟兔赛跑的故事大家都听说过，纸层析苹果酸测定就是葡萄酒中酸的“龟兔赛跑”。 想把一大群龟兔分开，最好的办法就是举行赛跑比赛。 枪响！大群兔子跑开了，龟都落在了起点附近。 假如加入一群犬，犬比兔子还快，会跑得更远。 层析中，葡萄酒中的酒石酸就是龟，苹果酸就是兔子，乳酸琥珀酸就是犬。 犬比兔子跑得快，但也快不多，要想分的开一点，就要延长比赛时间和距离。层析也一样，纸长一点（30厘米左右），展开时间也长一点（4-6小时），酸才能分得开。 层析过程好似赛跑过程。 比喻是为了理解，并不一定精准。 二，材料准备； 1，高30公分的层析缸；（见图） 如果没有现成的，自制可

2、用5毫米厚的玻璃，裁成31厘米长、13厘米宽的4块做成方形筒体，14厘米*14厘米大的一块做底板。用玻璃胶粘结。再在口部粘两块可以挂层析纸的凹槽板就可以了。（见下图） 2，展开剂；买正丁醇一瓶（500毫升，参考价15元），冰乙酸一瓶（500毫升，参考价18元），溴酚蓝一瓶（25克参考价29元）和苹果酸一瓶（100克参考价15元）。 按溴酚蓝0.1克、正丁醇100毫升、乙酸50毫升配好溶液备用。 3，苹果酸标准液按蒸馏水100毫升，苹果酸0.5克配方备用。 4，滤纸：买60厘米*60厘米的普通滤纸（参考价1-2元一张），裁成30厘米长，宽度按瓶的口径或实际需要剪裁。这种未经酸化的普通滤纸斑点拖尾

3、会比较长，会影响图的质量。见下图： 未经酸化的滤纸苹果酸斑点长达10厘米 经过酸化后，斑点缩减至4厘米 滤纸买来后，可以先用苹果酸试一下展开，如果展开剂里展开5.5小时，其斑点长度在6厘米左右，则不必进行酸化处理，因为酸化比较麻烦，特别是丙酮受控制不太好买。有时碰巧买到质量比较好的滤纸就可以省却酸化这一步。 上图可以看出，2010年购入的滤纸质量较好，虽然其苹果酸斑点较长，但也可以使用。正丁醇和冰乙酸一般化工商店有售，容易买到。滤纸、溴酚蓝淘宝网上有售，键入“600*600滤纸”“DL苹果酸”和“溴酚蓝”就找到了。 滤纸的酸化很麻烦。 滤纸酸化中 三，滤纸上划定点位： 先要计划一下设几个点，比

4、如苹果酸要设一个点，正在进行苹乳的酒肯定要一个点，作为对照比较，未经苹乳过的也设一个点，如此需设3个或者4个点。确定点位数后，即可在纸上画点。先在离滤纸的底部约3厘米处（2-4厘米都可）轻轻的画一条平行线，间隔2-3厘米做点。一张9-10厘米宽的滤纸最多可点4个点（开始学习时最好不超过3个点）。如图： 四，点样： 1，溶液标记和放置：将苹果酸和所需测定的葡萄酒溶液分别置于可乐瓶盖子内，容量最好为三分之一到四分之一瓶盖（样点的大小与盖中的溶液多少关系极大），少了不方便，多了怕点液量太大，按次序放好并作出标记，同时在滤纸的顶端也做相应标记，以免展开后弄不清楚和便于日后查验。如图： 2，点样点：用牙

5、签作点样点工具，样点直径以5毫米左右为宜。反复点30次以上，大约工作30分钟就可以放入层析缸“展开”了。 五，展开： 将已经配好的展开剂150毫升倒入层析缸中，将滤纸用双面胶粘在竹片上（用回形针方便但易生锈），然后挂在层析缸瓶口的凹槽板上，底部（点有样点的一端）浸入溶液1厘米即可。用保鲜膜封住瓶口，再用橡筋箍住密封（展开剂挥发性很强必须密封）。如图： 展开剂在滤纸上的爬行速度（供参考） 第一小时可爬高约11厘米，第二小时可爬高到约16厘米，第三小时可爬高到约19厘米，以后越爬越慢，六小时达25厘米左右（滤纸、气温等条件不同，速度有差异）。 附：苹果酸在同一张滤纸上不同展开时间的显示情况： 六，

6、风干； 五至六小时后可取出挂起，自然风干。 七，判读： 风干后的滤纸底色为紫蓝色，酸是以黄色来表现的。黄色的斑块颜色越深，范围越大，酸的含量越多。越接近底色，黄色越浅淡，酸的含量越少。可以在苹果酸斑点的上下沿画两条直线，这一区间就是苹果酸的显示区，其他点上这一区间的黄色深浅反映着苹果酸的含量。如果正在进行苹乳发酵的样点上没有或者很少有黄色了（上部如果仍有黄色并与乳酸区紧密相连，属乳酸拖尾），说明苹乳发酵已经完成或接近完成，就可以杀菌终止发酵了。如图： 附1，AB老师五项测试合并贴中关于层析法苹果酸测定的程序(我的实践帖) 一) 层析法测定苹果酸含量: 材料:3升广口瓶, ML溶剂, ML纸,

7、标准苹果酸溶液. 洗干净手,拿纸边把长方形ML层析纸放在干净的平面上, 沿纸的长边上画一道轻的铅笔线, 离边1.8公分, 在线上做点, 间隔3-4厘米. 左侧第一个点一般用于标准苹果酸. 其他点用于不同的酒样品. 用吸管分别取少量的待测酒样和苹果酸标准溶液. 吸管尖端在铅笔线上迅速分别接触一个湿点, 左侧标准液, 右酒液样品, 湿点直径要相同(即液体量相同以便做对比定量判断), 但不要超过6毫米. 等湿点干了, 原地再点一次, 干了后再来一次. 等都干了, 把纸卷成筒用订书机固定成圆柱体. 在广口瓶里倒入足够的ML展开剂, 能覆盖瓶底约3-4毫米深. 把纸圆柱放进去, 有铅笔线的一端接近瓶底,

8、 盖好盖子. 6小时后(或者更多小时), 直至展开剂的前沿爬到接近纸筒的最上端, 把纸圆柱取出,把纸筒打开, 晾干. 等纸完全干燥后, 层析图可以得出. 问题: 1)ML纸是什么纸, 那里能买到? 回答:好象有专门的层析纸，要是没有使用普通的定性过滤纸也可以，我就是用这样的纸化学试剂店就有 2)苹果酸的标准溶液是多大浓度的? 回答: 可以直接在试剂店购买, 也可以自己配. 浓度是模拟葡萄酒中苹果酸的浓度，那么配制0.5%或者1%即可. 葡萄汁中实际的苹果酸在克左右, 即0.2% 另外, 这个实验主要是定性判断酒的苹果酸发酵是否完成. 定量判断没有太大的意义, 因为最终不能有苹果酸存在. 但是可

9、以根据其消失的速度, 大致判断发酵结束的时间. 3)ML展开剂需要自己配吗? 展开剂：100ml正丁醇0.1g溴酚蓝(溴酚兰是起显影剂)50ml乙酸（50）就可以了，我用它效果还不错，根据层析容器的大小，可按比例调整。 回答: 展开剂都是自己配的，试剂店里这些东西都有 4)从层析图中怎样判断是否有苹果酸? 怎样知道还有多少苹果酸? 的定性和的定量吧如果标准液和标准样都点得比较规范，能看出部分的定量效果乳酸的样点会很大的酒石酸最底部，苹果酸在中间，乳酸在最上面或许因为乳酸分子量90, 苹果酸134, 酒石酸150, 估计分子量越大爬的越慢, 因此乳酸就最高了. 和苹果酸标准溶液的爬的印比较一下深浅和粗细, 是否可以大概知道酒里苹果酸的含量. 5)为什么样点要这么小? 由于液体展开剂在扩散时会带动酸往上跑，那些小分子还不在扩散剂里如鱼得水，点的大了还不扩散成一大片了，谁也不认得谁了？所以要小！ 另外, 要想使样点一样大, 可以用很细的注射器针头滴一滴,