紫外可见分光光度计法测定饮料中苯甲酸钠的含量

1、紫外-可见分光光度计法测定饮料中苯甲酸钠的含量一、实验目的1 . 了解和熟悉紫外-分光光度计的原理和结构，学习 UV-2501的操作。2 .掌握紫外分光光度法测定苯甲酸钠的吸收光谱图。3 .掌握标准曲线法测定样品中苯甲酸钠的含量。二、实验原理为了防止食品在储存、运输过程中发生腐蚀、变质，常在食品中添加少量 防腐剂。防腐剂使用的品种和用量在食品卫生标准中都有严格的规定，苯甲酸及其钠盐、钾盐是食品卫生标准允许使用的主要防腐剂之一，根据 GB2760- 1996规定，碳酸饮料中苯甲酸钠的允许最大使用量为0.2g/kg。苯甲酸具有芳香结构，在波长225nm和272nm处有K吸收带和B吸收带。 根据苯甲

2、酸（钠）在225nm处有最大吸收，测得其吸光度即可用标准曲线法 求出样品中苯甲酸钠的含量。三、仪器和试剂1 .紫外可见分光光度计 UV-2501 （日本岛津），1.0cm石英比色皿，50ml容量 瓶。2 . NaOH 溶液（0.1mol/L）3 .苯甲酸钠标准溶液的配制（1）苯甲酸钠标准贮备液（1.000g/L）:准确称量经过干燥的苯甲酸钠1.000g（105C干燥处理2h）于1000mL容量瓶中，用适量的蒸储水溶解后定容。该贮备液可置于冰箱保存一段时间。（2）苯甲酸钠标准溶液（100.0mg/L）:准确移取苯甲酸钠储备液10.00mL于100mL容量瓶中，加入蒸储水稀释定容。(3)系列标准溶

3、液的配制：分别准确移取苯甲酸钠标准溶液1.00mL、2.00mL、3.00mL、4.00mL 和 5.00mL 于 5 个 50mL 容量瓶中，各加入 0.1mol/L NaOH 溶液1.00mL后，用蒸储水稀释定容。得到浓度分别为2.0 mg/L、4.0mg/L、 6.0mg/L、8.0mg/L和10.0mg/L的苯甲酸钠系列标准溶液。4 .雪碧(500mL)5 .蒸储水四、实验步骤1 .吸收曲线的绘制(1)系列标准溶液的配制50mL瓶编号123456100.0mg/L苯甲酸钠标准溶液体积(mL)0.001.002.003.004.005.000.1mol/L NaOH 溶液体积（mL）1.

4、00用蒸储水容量50.0系列标准溶液浓度(mg/L)0.02.04.06.08.010.0记录吸光度A值(2)吸收曲线的测定用某一浓度较高的标准液如4号或5号溶液，于210nm300nm波长范围 内扫描，即的苯甲酸钠的吸收曲线。(3)由吸收曲线上找出最大吸收波长 加ax。2 .工作(标准或校正)曲线的绘制按溶液由稀到浓的顺序分别测定他们的吸光度 A,然后以浓度为横坐标,吸光度A为纵坐标作图，求出线性方程和相关系数。浓度(mg/L )046810X吸光度A-0.0110.2250.3330.4410.5520.10443 .市售饮料样品溶液的含量测定(1)准确移取市售饮料1.5ml于50mL容量

5、瓶中，用超声脱气5min驱赶 二氧化碳后，加入0.1mol/LNaOH溶液1.00mL,用蒸储水稀释定容。(2)按测定工作曲线标准液的方法测定样品的 A,由标准曲线或线性方程 求出50mL样品溶液中的苯甲酸钠的浓度。(3)求出市售饮料中苯甲酸(钠)的含量。五、数据处理1 .苯甲酸钠紫外-可见吸收光谱的测定，并找出最大吸收峰波长。2 .苯甲酸钠标准曲线的测定，以及曲线方程、相关系数的测定。3 .样品中苯甲酸钠含量的测定。【注意事项】1 .试样和标准工作曲线的实验条件应完全一致。2 .不同牌号的饮料中苯甲酸钠含量不同，移取时样品量可酌情增减。【思考题】1 .紫外可见分光光度计由哪些部件构成？各有什

6、么作用？答：紫外可见分光光度计由光源室、单色器、试样室、检测器及信号显示系统五个部分组成。光源室能提供仪器使用波段的连续光谱，单色器是用以产生高纯度单色光束的装置，试样室供盛放试液进行吸光度测量之用，检测器用于检测辐射信号，信号显示系统将图谱、数据和操作条件都显示出来。2 .本实验为什么要用石英比色皿？为什么不能用玻璃比色皿？答：因为玻璃吸收紫外光，影响测试液对紫外光吸光度的准确性。而石英不吸 收紫外光。因此，可见光区域内测试时需要用玻璃比色池，紫外区域内测试时 用石英比色池。3 .苯甲酸的紫外光谱中有哪些吸收峰？各自对应哪些吸收带？由哪些跃迁引起？答：苯甲酸具有环状共钝结构，在波长228nm

7、和272nm处有E吸收带和B吸 收带，由兀- 7!迁引起。UV-2501的操作1 .开机（1）打开计算机，打印机。（2）打开主机开关，双击软件图标 UVProbe,点击“Connect仪器联机，仪器 开始自检，通过后按“OK：2 .吸收光谱的测定（1）选择 “Window/' s SpectrumT开光谱模块。 选择“Edit ” - m MethOd定波长范围（从大到小），扫描速度（Fast）,采 样间隔（1.0）,扫描方式（Single）, Instrument Parameters（Absorbence）。样品池和空白池均放上2.5mL缓冲溶液，点击光度计按键条中的 “Basel

8、ine启动基线校正，点击确定。注：在开始基线校正之前，确认样品或参比光束无任何障碍物，且样品室 中没有样品。（4）参比池中加入缓冲溶液，样品池中加入苯甲酸钠标准液，点击按键条中的“Start测定紫外可见吸收光谱。(5)扫描完成后，在弹出的新数据采集对话框中输入样品名，点击确定。(6)图谱保存：选择“File乡“Savas”，在对话框顶部的保存位置中选择适当 的路径，输入文件名，保存类型中选择Spc,点击 保存”。 最大吸收峰：选择“Operations ” - “Peak执现最大吸收峰对应的波长3 .标准曲线法测定待测样品的浓度 (1)选择“Window/' P PhotometriC

9、丁开测量光度模块。(2)选择 “Edit ” - “ Method置合适的波长(“Wavelength；如 225nm，点击 “Add；点击选定的 Wavelength,根据提示，点击 next, next,方法，设定 保存路径，点击保存”。(3)样品池和空白池均放上2.5mL缓冲溶液，点击光度计按键条中的“Cellblank ；进行背景校正。标准曲线：在Standard table框里输入Sample ID (从1开始)，标准溶液的 浓度“Concentration输入完毕，将光标移到 WL225下。在样品池中由稀 到浓，依次放入系列标准溶液，点击按键条中的“Read std依次读出标准系列溶液的吸光度值。(浓度为0的空白液可先按 自动归零”后再读数)(5)点击 “Graph”- “ StandardCurve Statistics -> “Equation," a Correlation Coeficient , "得到标准曲线的方程和相关系数。(6)同样，样品池中放入待测溶液，在Sample table框里框里输入Samp