Agilent1100高效液相色谱仪操作规程

1、Agilent1100高效液相色谱仪操作规程操作说明：1 .开机前准备：1.1 仪器设备：Agilent1200LC G1322A（在线脱气机）。 G1311A（四元泵）。 G1329A（标准型自动进样器）。 G1316A（柱温箱）。 G1315A（DA求测器）。 色谱柱1.2 溶剂准备： 有机相必须是色谱级纯。 水相必须是二次蒸储水或用二级蒸储水配置的缓冲盐溶液、酸碱溶液。 流动相使用前必须过0.45wm的微孔滤膜。有机相和水相微孔滤膜的选择参考下表。产品类别代表产品品系产品特点纤维素醋类混合纤维素膜（CN-CA水相成孔性能好，亲水性好，材料成本低。可耐稀酸。/、适合十酮类、酯类、强酸、强碱

2、类液体过滤。聚酰胺类尼龙6(PA-6)通用具后亲水性，较耐碱不耐酸。在酮、酚、醴及高分子醇类不被腐蚀。聚碉类聚碉（PS通用良好的化学和热稳定性，耐辐射，机械强度高。聚偏氟乙烯/聚四氟乙烯膜PDEF/PTFE有机PDEF耐化学腐蚀，耐氧化，耐高温，疏水性（酒精处理后变清水性），PTFE耐酸碱性强。聚烯姓类聚丙烯膜（PP）有机具有良好的化学稳定性，耐酸碱和各种有机溶剂。价格便宜，但孔径分布宽。无机材料陶瓷、玻璃BR金属膜通用耐高温，耐有机溶剂、耐生物降解等。Illi薪柜 在线版气机 曲靓”自动进样器脆测器控制模块可选2 .基本操作步骤：（一）、开机：1 、打开计算机，进入中文WindowsXP画面

3、，并运行CAGBootpServer程序（部分安装程序不需要运行Bootp）。2 、打开1200LC各模块电源。3、待各模块自检完成后，双击“仪器1联机”图标，化学工作站自动与1200LC通讯，进入的工作站画面如下所示。4、从“视图”菜单中选择“方法和运行控制”画面，点击“视图菜单中的“仪器实际值”，“在线光谱”，“化学工作站状态”，“系统视图”，“样品视图”，使其命令前有标志，来调用所需的界面。5、把流动相放入溶剂瓶中。6、打开冲洗阀。7、点击“泵”图标，点击“设置泵”选项，进入泵编辑画面。8、设流速：5ml/min,点击“确定”。9、点击“泵”图标，点击“控制”选项，选中“启动”，点击“确

4、定”，则系统开始冲洗，直到管线内（由溶剂瓶到泵入口）无气泡为止，切换通道继续冲洗，直到所有要用通道无气泡为止口运有投厕口卧弱E方辰TP厅?1酊根图如中时W破的.方法,MJ)rTNEEMMHfiEAezz.Kf£喧|D7eT'l3Z-*U轴HKtt:=g一.如L三卜WH临田3sHi1,口班-占LL.S2I：HEJLLLAZB5+2月工.曰粘四.412百，"日蜂上.事I4月113ns41N月NH日ESMSA1z月手电已知Id1”13日£32u:iSFiflI:R£品1上甲也.三鼻ai.fiaM同1N日IE孟nI日事Aam<»,sifl

5、fCt 十A2qiaKUS晶AFCDEhjAr.fi事B*TCHS鼻DEF_LCq10、点击“泵”图标，点击“控制”选项，选中“关闭”，点击“确定”关泵，关闭冲洗阀。11、点击“泵”图标，点击”设置泵选项”，设流速：例如1.0ml/min。12、点击泵下面的瓶图标，如下图所示（以单元泵为例），输入溶剂的实际体积和瓶体积。也可输入停泵的体积，点击“确定”。Li实际仔枳:；导体痂：A 10 SO 升阿"开溶剂酶埴无量任）中帮助M7停止分析,如果潜制量僵于Tioo-升*当溶剂用完时关闭裁注定叫 限清 I 超/M13、点击“泵”图标，点击“泵辅助设定”，设定“最流速梯度“最小冲程”，“压缩因

6、子”，“主通道”。.XN曰:«0 律电 aABaTaaaq 3 £ 且 口七»L XO W可用吱j方法一 且好.£>必值:卢金却工性印 工门用制咂 任期二 声位年 序孙81，同叩 胃皓5 明船呼一目 q与比|所加彳F 网5U国（-H53 31 9 L士福也京世H串玄近建助度曰WLWWmii是展呻皿白功闩八国?叫7小主通近中&4iJwen 型 a nt|lc3丽.EB HL曲；£皿山” 华二知1 .浊«虫口 言画E& 0 i：ti rld&： & I>: n.q £ 匚：KN， 巾：

7、25.口工 ftXEM KM 2 隼小生力.II 2L ku bu h ku Lb Ku目单、西* *，E 1 d。 I，旧晴“丫,利.4岁国TSST诬6"55西川-，"西招飞X't2、方法信息：在“方法注释”中加入方法的信息（如：测试方法）点击“确定”，进入下一画面。3、泵参数设定：（以四元泵为例）在“流速”处输入流量，如1ml/min,在“溶剂B”处输入80Q（A=100-B-C-D），也可“插入”一行“时间表”，编辑梯度。在“压力限”处输入柱子的最大耐高压，以保护柱子。点击“确定”，进入下一画面。寸尸（T后市k*,口卡*£丁法，宝川m携kgnF固lr

8、-,M.4、自动进样器参数设定：（以标准G1329A为例）选择合适的进样方式，如图所示，进样体积5.0ul，洗瓶位置为6号。“标准进样”-只能输入进样体积，此方式无洗针功能。“洗针进样”-可以输入进样体积和洗瓶位置，此方式针从样品瓶抽完样品后，会在洗瓶中洗针。“使用进样器程序”一可以点击“编辑”按钮进行进样程序编辑Rt E工舞.甲!|tn o ui也1t呈归 七死白iLJ 建行费-进第r if .隹_3带仃j ctn律通魔时才怦塞粮密此，津 FiFFFR-UL .CHEMIZU1 bEQUL- . ltfl2h0.S.l1 - 3tU- 1Z A1 fl日科叱 i a曰装装._ *12 月 1

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10、不；.杵单"ETS；W»d1g3|斗 W， WLTBUFb'5、柱温箱参数设定在“温度”下面的空白方框内输入所需温度，如：40度。并选中它，点击“更多>>”键，如图所示，选中“与左侧相同”，使柱温箱的温度左右一致点击“确定，进入下一画面。WT_*J| L臼NiErr.iMl三口臼12 El四的电村同件sifrm即病| ar(T七停止丁I日屋H域f W.1二 1I -血|ir钻西出叶号 mi* fTltKne. £但打时丁：枭夫三士 力.后运行时间ta-二左则柞句3 Wrn时司"U厚4七，金(A7JUErMJLJE母方如利fl憧印4比山

11、一 I更是LUP AfttEJ 压女志I行时H15当期生主设定尼的7 |5二，2fl.'ll理喈LiJ策时凹|6、检测器参数设定：6.1、 VW脸测器在“波长”下方的空白处输入所需的检测波长，如254nm,在“峰宽(响应时间)”下方点击下拉式箭头，选择合适的响应时间，如>0.1min(2s)。在“时间表”中可以“插入”一行，输入随时间切换的波长，如1min,波长=300nm点击“确定”，进入下一画面。6.2、 DW触测器-J 口 匾HEH13T 第IL向2A1L身己4 N日一 £ 1 2 R i 1 z . 总LN月 JL 1 N 月 再1 Jt-程二口口 1吟 2B

12、LQ 321 事一月1目山w岸比di曜ir听口比了厢助用也卮5日时可口iM口为皿P 3SETJ r后运行A 31 '.4篇F£D曰一 .1 3 $ DBLU .-M HQ'-'OT却毫ft生Jl由间笆8 B 4| nsHE. TLI f： r用司曲L取府I 1叫I 灵uav,E州¥|小悦用1 0犹J开举,-浮附& -4。 及/，7、在“运行时选项表”中选中“数据采集”，点击“确定8、点击“方法”菜单，选中“方法另存为”，输入一方法名，如“测试”，点击“确定”。9、从菜单“视图”中选中“在线信号”，选中“信号窗口1”，然后点击“改变”钮,将所要

13、绘图的信号移到右边的框中，点击“确定”。（如同时检测二个信号，则重复此操作，选中“信号窗口2”.显万顶印工具在C）.显泉长感工旦栏圈在解信号（0；*样品视因Cd：一系期现图仁）伐粕实际值Q 日用浮（S?化学工怔站秋意0）。命寺行仁1一F击邮£&单IMI启励脱机处理剧本00西呻证间网隔Of机国中助区帮北西“ I力:去粕:云行控性I2数据分析3报皆版面谀计4诧朗T7-：Si1 ', ' .q山工厂二立历£-> jj产iS .励-E库川/OA MnmMbyS二曜号叫信号窗口 zfej的冒后号用国信号定口 1 （1）过匚卜叫卜3nr蛆*月参址桓百冷海耻

14、改由冠溜说flf俎9三乐稠ij©-： -小 n后渊白勖蜀电工：颐呈II脸收民品'键，即可弹出右侧的编辑信号图谱”窗口，进而选择方走E3印苜所需的谱图信号。黄丁.一10、点击“确定”，从“仪器”菜单选择“系统开启”。（三）、序列的设置1、从“序列”菜单中，打开“序列表”，光标至于“行1”，单击“剪切”，去除“行1”，再单击“插入/批量输入向导”。2、设置“操作”为“追加”，“开始位置”为“1”，“插入行数”为所需的样品数，如“3”，“方法名称”为“测试”，“样品名称”为“排毒清脂片”，“进样次数”为“3”，“样品类型”为“样品”或“标准物质”“质控物质”，点击“确定”：3、光标

15、至于“行3”、单击“追加一行”，设置冲洗仪器和色谱柱的样品和方法，“方法名称”选择已经设置好的“水醇洗柱”。4、单击“确定”，完成序列设置班工|剜*1fiBW小减®停刊匿事IBSii喇的畸3d苛读电他丽F厉1蝠dig，-11|Bjr事*胸"皿，博壬西a ”仆小司L XG便叮用前iliM班般g目常 附皆丽嘲西,及旭河Adl.4bB-aaABaTaaaua星aa小0B 一 lsr=a. s a hliW; £ 山 W-izfltl-B. .id Ci tin 曾由E& 0 Oi mui： D.n bSf si*. HUH 嘲 Iffl. XT LC 5IMiM

16、f BO打工s：皿0 tft. 瓜4 3MM 地小£*( W士射士 fF邛即r1你写 Li!*疗归二检ku h ku bu h Lu Lb Ku slri一 ,刘知ft知£) MOK吕聿3IS 3，5、从“序列”菜单中，打开“序列参数”选项，如下图所示，输入操作者名称，如“安装工程师”；在“数据文件”中选择“手动”或“前缀/计数器”，单击“确定”，完成设置。£且】爆MJ方;SJU信百相利此业需口/由注9Fn&lira&'i"时5明巾gK3微电叱腿hF厨131阳一1Jf.Kv*，占0.Ba.a.ru #a010l.*HAaBa.a

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18、与加居府“ F 21:，工 2 一 m 由 M1 1L6、从“序列”菜单中，打开“保存序列”选项，输入“文件名”，如“测试”，单击“确定”，完成设置。7、等仪器准备好，基线平稳，从“运行控制”菜单中选择“运行序列”，进样（或者从操作界面上点击“开始”，进样）。（若无自动进样器，则基线平稳后，进样并搬动手动进样阀，启动运行。）（DAD,VW电谱图如下所示：）（四）、数据分析方法编辑：1、从“视图”菜单中，点击“数据分析”进入数据分析画面。2、从“文件”菜单选择“调用信号”，选中您的数据文件名，如下图所示。点击“确定”，则数据被调出。3、做谱图优化：从“图形”菜单中选择“信号选项”，如下图所示。从

19、“范围”中选择“满量程”或“自动量程”及合适的时间范围或选择“自定义量程”调整。反复进行，直到图的比例合适为止。点击“确定”。4、积分: 从“积分”菜单中选择“积分事件”选项，如下图所示。选择合适的“斜率灵敏度”，“峰宽”，“最小峰面积”，“最小峰高”。 从“积分”菜单中选择“积分”选项，则数据被积分。 如积分结果不理想，则修改相应的积分参数，直到满意为止。 点击左边图标，将积分参数存入方法。亳皿立gti窗由SJMr口期的F5. FI刊:町：l ?sQm731荻t嘲鼾副阳&噩巫"依麻Hiiii眦嬲的砒tnon2工收由也修出班100毂M熟25血m础都 鲍UK丁-1151赠：然诋

20、嘱5般射板tOFF 照 肆玉Q闻*悚顺n心上网Li.n祗喇k/於空2密而加CMSE咽网312而时幽.鼎日息硒】一身一 彳一上工M =2L£41DI工一 一届百一5、打印报告:从“报告”菜单中选择“设定报告”选项，进入如下图所示画面。点击“定量结果”框中“计算”右侧的黑三角，选中“面积百分比”，其它选项不变。点击“确定”。 从“报告”菜单中选择“打印报告”，则报告结果将打印到屏幕上，如想输出到打印机上，则点击“报告”底部的“打印”钮。（四）、关机： 关机前，先关灯，并必须用相应的溶剂充分冲洗系统。 退出化学工作站，依提示关泵，及其它窗口，关闭计算机。 关闭Agilent1200各模块电

21、源开关。（五）、Agilent1200LC维护保养：1、色谱柱长时间不用，存放时，柱内应充满溶剂，两端封死（如乙睛/甲醇适于反相色谱柱，正相色谱柱用相应的有机相）。2、手动进样器，当使用缓冲溶液时，要用水冲洗进样口。3、流动相使用前必须过滤，不要使用多日存放的蒸储水（易长菌）。4、带seal-wash的1200,要配制90林+10嘱丙醇，开启seal-wash清洗泵，溶剂不能干涸。5、注意事项见说明书，或由现场工程师介绍。（六）、维护知识问答1、为什么溶剂和样品要过滤？溶剂和样品过滤非常重要，它会对色谱柱、仪器起到保护作用，消除由于污染对分析结果的影响。色谱柱：由于填料颗粒很细，色谱柱内腔很小

22、，溶剂和样品中的细小颗粒会使色谱柱和毛细管容易堵塞。仪器：溶剂和样品中的细小颗粒会增加进样阀的堵塞和磨损，同时也会增加泵头内的蓝宝石活塞杆和活塞的磨损。2、为什么HPL酬缓冲盐时要加在线Seal-wash选项？HPLC用缓冲盐时,由于泵头内的缓冲盐溶液存在高压析盐现象,析出的细小盐粒非常坚硬,它附着在蓝宝石活塞杆上,随着蓝宝石活塞杆的往复运动,容易产生划痕,并磨损密封垫,造成漏液等故障现象。在线Seal-wash选项能有效的带走可能存在的缓冲盐结晶。缓冲盐的浓度在0.1mol或大于0.1mol时,必须使用该在线冲洗选项.清洗液配制:90%水+10%异丙醇.该混合液可抑制菌类生长和减小水的表面张

23、力，不能干涸。3、为什么Agilent1200LC的流动相管路非常细?在使用HPLC寸，应特别注意"柱外效应”对分析结果的影响，由于样品分子在液体流动相中的扩散系数比在气体中小45个数量级，液体流动相的流速也比气相慢12个数量级。因此，样品进入色谱柱后，在柱子以外的任何死体积（进样器、柱接头、连接管、检测器）中，样品分子的扩散和滞留，都会引起色谱峰的展宽，而使柱效降低。为使柱外效应减之最小，获得理想的分析结果，Agilent1200LC使用加工工艺难度高的毛细管线作为流动相管路。毛细管线分类：0.17mm内径绿色;0.12mm内径红色。PEEK管线：内径0.13mm;0.18mm;0

24、.25mm;0.5mm。毛细管线优点:柔韧性好.*Agilent公司同时备有1/16in的粗外径毛细管线,适用于不同习惯的用户,优点是刚性好,但柔韧性差一些。4、流动相使用前为什么要脱气？流动相使用前必须进行脱气处理，以除去其中溶解的气体（如O2），以防止在洗脱过程中当流动相由色谱柱流至检测器时，因压力降低而产生气泡。气泡会增加基线的噪音，造成灵敏度下降，甚至无法分析。溶解的氧气还会导致样品中某些组份被氧化，柱中固定相发生降解而改变柱的分离性能。若用FLR可能会造成荧光猝灭。常用的脱气方法比较：氦气脱气法：利用液体中氦气的溶解度比空气低，连续吹氦脱气，效果较好，但成本高。加热回流法：效果较好，

25、但操作复杂，且有毒性挥发污染。抽真空脱气法：易抽走有机相。超声脱气法：流动相放在超声波容器中，用超声波振荡10-15min，此法效果最差。在线真空脱气法：Agilent1200LC真空脱机利用膜渗透技术，在线脱气，智能控制，无需额外操作，成本低，脱气效果明显优于以上几种方法，并适用于多元溶剂体系。5、如何防止溶剂瓶内溶剂过滤器的堵塞，以及堵塞后的处理？溶剂的质量或污染以及藻类的生长会堵塞溶剂过滤器，从而影响泵的运行，尤其水溶液或磷酸盐缓冲液（PH=47）。以下几种方法可以有效防止溶剂瓶内溶剂过滤器的堵塞。A:请严格执行溶剂过滤。B:请勿使用多日存放的蒸储水及磷酸盐缓冲液C:如果应用许可，可在溶

26、剂中加入0.0001-0.001M的叠氮化钠.D：在溶剂瓶内溶剂的上方小流量连续吹鼠气，以隔绝空气。E:避免使溶剂瓶暴露在直射阳光下，尽量使用琥珀色的溶剂瓶盛放水溶液或磷酸盐缓冲液。6、 Agilent1200LC泵如何维护？Agilent1200LC泵给色谱柱提供稳定、无脉动、流量准确的流动相，及时合理的维护非常重要。A流动相使用前请必须脱气、过滤。B：使用缓冲盐时，要加在线Seal-wash选项。C:关机前，用相应的溶剂充分冲洗系统。D：及时更换PurgeValve内的过滤芯。（当打开PurgeValve时，压力高于10bar，表明过滤芯已堵）。E：使用合适的密封圈。7、 如何选择合适的泵头活塞密封圈？泵头活塞的标准密封圈能适合于大多数应用，但使用正相溶剂（如正己烷），不适合使用标准活塞密封圈，特别是长时间使用时，需更换另一种不同