酒石酸锑钾对人胃癌细胞体外增殖和凋亡的阻碍

1、酒石酸睇钾对人胃癌细胞体外增殖和凋亡的阻碍徐少勇，郭光云，王家宁，黄永章【关键词】胃肿瘤AbstractAIM:Toexplorethetherapeuticeffectsofantimonialsonsolidtumorbyobservingtheeffectsofpotassiumantimonyltartrate(PAT)ontheproliferationandapoptosisofhumangastriccancerSGC7901cellsinvitro.METHODS:MTTmethodwasusedtomeasurethelevelsoftheproliferationofSGC

2、7901cellsintervenedwithPATofdifferentconcentrations.ThecellapoptosiswasdetectedbyHoechst33258andflowcytometry.RESULTS:PATinhibitedSGC7901cellgrowthsignificantlyinadoseandtimedependentmanner.PATdisplayedprominentinhibitoryeffectswith20and40Umol/Lat72hours,andthegrowthinhibitionratesofthecancercellsre

3、ached%and%,respectively.SGC7901cellschromatincondensationandnuclearfragmentationwereseenunderfluorescencemicroscopeinthecellsstainedwithHoechst33258.Theapoptosisratewasthehighestwith40Umol/LPATat48hours,reaching%.Comparedwiththatofthecontrolgroup,thecellpercentageofG0/G1phasedecreasedandthatofG2/Mph

4、aseincreased%vs%).CONCLUSION:PATsignificantlyinhibitstheproliferationandinducestheapoptosisofSGC7901cells.【Keywords】antimonypotassiumtartrate;stomachneoplasms;celldivision;apoptosis【摘要】目的：通过观看酒石酸睇钾（PAT）在体外对人胃癌SGC7901细胞增殖和凋亡的阻碍，探讨重金属睇剂对实体瘤的医治作用，为PAT用于临床医治胃癌提供实验依据及理论基础.方式：采纳MTT法检测不同浓度PAT对人胃癌SGC7901细胞的

5、生长增殖的阻碍;应用流式细胞术和Hoechst33258染色后荧光显微镜检测细胞凋亡.结果：5,10,20,40Umol/LPAT能明显抑制胃癌细胞增殖，抑制作用呈时刻和剂量依托性.20,40Umol/LPAT作用72h细胞的生长抑制率别离是和；Hoechst33258染色显示PAT作用后，细胞核显现明显的凋亡形态学改变；流式细胞仪检测到凋亡峰，凋亡率以40Umol/L作用48h最大，达%同时G2/M期细胞明显增多，以对照组的先增至%结论：PAT能抑制SGC7901细胞增殖并诱导细胞凋亡.【关键词】酒石酸睇钾；胃肿瘤；细胞割裂；脱噬作用0引言胃癌晚期预后差，长期存活率低1,2,5a生存率仅15

6、%25%3.大多数胃癌患者诊断时己到进展期，需同意化疗，但常规化疗药物的成效不睬想.因此，寻觅新的药物有重要临床意义.最近的研究发觉微摩尔浓度的锦剂酒石酸睇钾（potassiumantimonyltartrate,PAT）、三氧化二/能显著抑制白血病细胞、恶性B淋巴细胞生长，而对正常的淋巴细胞无阻碍，被以为是一个潜在的、有价值的医治血液系统恶性肿瘤的药物4-7.但睇剂对其他实体瘤细胞的作用尚不清楚.咱们选用不同浓度的酒石酸睇钾作用于人胃癌SGC7901细胞，观看其对胃癌细胞增殖和凋亡的阻碍.1材料和方式材料PAT购自SigmaAdrich公司，用三蒸水配制成1义10-2mol/L贮存液.利历时

7、用RPMH640培育基配成工作浓度；Hoechst33258,PI（碘化丙咤），RNase购自Sigma公司；四甲基偶氮畦盐（MTT）购自北京华丽公司；RPMI1640培育基、小牛血清购自Gibco公司；利用OlympusBX51荧光显微镜£960酶标仪CoulterEpicsXL流式细胞仪.SGC7901人胃癌细胞株购自中科院上海细胞生物所.用RPin640培育液（含100mL/L小牛血清，100ku/L青霉素和链霉素）37,50mL/L的C02孵箱中常规培育.方式法检测细胞增殖取对数生长期细胞用g/L胰蛋白酶消化成单细胞悬液，调整细胞密度为3X107/L,接种于96孔培育板，每孔

8、加200uL的细胞悬液,细胞培育24h贴壁后，加入PAT.设阴性对照组和不同浓度PAT实验组（5,10,20,40Hmol/L）.每组均设立4个复孔.培育24,48,72h每孔加入5g/LMTT（PBS配制）20uL再培育4h,吸弃上清，加入DMS0200UL,震荡10min.于酶标仪490nm处测量吸光度A值.上述实验重复3次，取其均值.计算细胞增殖的抑制率二（1-实验组A值）/对照组A值X10096.33258染色观看细胞核转变取指数生长期的细胞，以2X109/L密度接种于含消毒盖玻片的6孔板中，培育24h细胞贴壁后加入上述浓度的PAT.24,48h后吸尽培育液，加入固定液（甲醇V：冰醋酸

9、V=3：l）mL,固定10min,去固定液，用PBS洗2遍.加入5mg/LHoechst33258mL,染色5min.紫外光激发，荧光显微镜观看并照相.流式细胞仪检测细胞周期和凋亡细胞处置同前.搜集药物作用24,48h后的细胞，PBS漂洗,700mL/L乙醇4固定留宿，离心去乙醇，PBS漂洗，加入1g/LRNase200UL于37c消化30min,加入50mg/LPI200uL于4染色1h,流式细胞仪检测，采纳Muticycle软件分析细胞周期.统计学处置：所有数据均采纳x土s表示，采纳软件处置系统进行统计分析.各组间细胞生长抑制率比较采纳方差分析；两两比较用SNKq查验.2结果细胞增殖PAT

10、能明显抑制体外培育的SGC7901细胞生长，其抑制率随时刻延长和浓度升高而升高，存在时刻效应和剂量效应关系.5,10,20,40Umol/LPAT处置SGC7901细胞72h的抑制率别离为%,%,%和%（Fig1）.细胞形态Hoechst33258染色后，在荧光显微镜下观看，见对照组细胞所发荧光较弱，较均匀；而经PAT作用24,48h后的SGC7901细胞显现核固缩，呈致密强荧光，DNA浓缩并向核膜靠拢，少数细胞核碎裂成块状(Fig2).细胞周期及凋亡流式细胞仪检测显示PAT作用后的SGC7901细胞呈特点性的亚二倍体峰，细胞凋亡率呈必然的剂量效应关系.40Umol/LPAT作用48h后，细胞

11、的凋亡率最大，为%.PAT作用48h后，各个浓度作用组G2/M的细胞均明显多于空白对照组，而G0/G1期和S期细胞那么减少，不同有显著性意义(P<,Tab1).表1PAT作用48h后SGC7901细胞凋亡率和周期(略)3讨论锦剂(PAT、三氧化二睇)能显著抑制白血病细胞、恶性B淋巴细胞生长，而对正常的淋巴细胞无阻碍.其机制为诱导细胞凋亡4-7.咱们发觉5umol/LPAT作用24h后就能够抑制体外培育的胃癌SGC7901细胞的生长,且其抑制细胞增殖在必然范围内，随PAT的浓度增加，作历时刻的延长，细胞增殖抑制率相应增加.为进一步研究PAT用于胃癌的化疗提供了可能.细胞凋亡异样在肿瘤发生进

12、展中具有重要作用，人们致力于开发新的药物以选择性诱导肿瘤细胞凋亡8.咱们发觉PAT可诱导细胞凋亡.PAT作用后的SGC7901细胞呈典型细胞凋亡形态学改变：染色质边聚，胞核固缩，碎裂.流式细胞仪检测可见凋亡细胞形成的亚G1峰，其凋亡率与药物浓度成正比，提示呈剂量依托性诱导细胞凋亡.PAT作用后，细胞周期也发生明显转变，其中G2/M期细胞增加，G0/G1期细胞减少.最近几年来的研究说明，G2/M期阻滞的发生与细胞凋亡关系紧密，G2/M期阻滞可能使受损DXA在染色体分离前取得修复，修复成功的肿瘤细胞继续进入增殖周期，不能修复者那么进入凋亡途径9途推测PAT可能作用于细胞G0/G1,使G2/M期细胞

13、阻止,从而诱导细胞凋亡.综上所述,PAT可抑制SGC7901细胞增殖和诱导细胞凋亡.有望老药新用，将其应用于胃癌医治.【参考文献】1BuonadonnaA,LombardiD,DePaoliA,etal.Adenocarcinomaofthestomach:UnivariateandmultivariateanalysesoffactorsassociatedwithsurvivalJ.Tumori,2003;2(5Suppl):31-34.2徐俊荣，崔大祥，张沥，等.胃癌不同表达基因的克隆测序及临床应用J.第四军医大学学报，2002；23(2)：148-151.XuJR,CuiDX,Zhan

14、gL,etal.Cloning,sequencingandclinicalapplicationofdifferentiallyexpressedgenesingastriccancerj.JFourthMilMedUniv,2002;23(2):148-151.3李陕区，张康泰，闫小君.鼠源抗胃癌抗体轻链可变区基因克隆及其结构分析J.第四军医大学学报，2000;21(5)：S95-S97.LiSQ,ZhangKT,YanXJ.Cloningandconstructiveanalysisofmouseantigastriccancerantibodylightchainvariableregi

15、ongenefragmentsj.JFourthMilMedUniv,2000;21(5)：S95-S97.4 MullerS,MillerWHJr,DejeanA.TrivalentantimonialsinducedegradationofthePMLRARaoncoproteinandreorganizationofthepromyelocyticleukemianuclearbodiesinacutepromyelocyticleukemiaNB4cellJ.Blood,1998;92(11):4308-4316.5 LecureurV,LagadicGossmannD,Fardel0

16、.PotassiumantimonyltartrateinducesreactiveoxygenspeciesrelatedapoptosisinhumanmyeloidleakemicHL60cellsJ.IntJOncol,2002;20(5):1071-1076.6 LecureurV,LeThiecA,LeMeurA,etal.PotassiumantimonyltartrateinducescaspaseandreactiveoxygenspeciesdependentapoptosisinlymphoidtumoralcellsJ.BrJHaematol,2002;119(3):608-615.7 于文强，孙秉中，柴玉波，等.不同睇剂对早幼粒细胞白血病凋亡诱导作用的观看J.第四军医大学学报，2003；24(4)：338-341.YuWQ,SunBZ,ChaiYB,etal.ApoptosisofacutepromyelocyticleukemiacellXB4inducedbydifferentkindsofantimonialsj.JFourthMilMedUniv,2003;24(4