第一章微生物检验鉴定技术

1、第一章 微生物检验鉴定技术 第一节第一节 微生物检验基本知识与操作微生物检验基本知识与操作第二节第二节 微生物常规鉴定技术微生物常规鉴定技术第三节第三节 食品微生物检验新技术食品微生物检验新技术第一节 微生物检验基本知识与操作第一节 微生物检验基本知识第一节 微生物检验基本知识第一节 微生物检验基本知识第一节 微生物检验基本知识第一节 微生物检验基本知识第一节 微生物检验基本知识第一节 微生物检验基本知识第一节 微生物检验基本知识第一节 微生物检验基本知识第一节 微生物检验基本知识第一节 微生物检验基本知识第一节 微生物检验基本知识第二节 微生物常规鉴定技术第二节 微生物常规鉴定技术一、形态结

2、构和培养特性观察一、形态结构和培养特性观察n1、微生物的形态结构观察、微生物的形态结构观察n微生物的形态结构观察主要是通过染色，在显微微生物的形态结构观察主要是通过染色，在显微镜下对其形状、大小、排列方式、细胞结构（包镜下对其形状、大小、排列方式、细胞结构（包括细胞壁、细胞膜、细胞核、鞭毛、芽孢等）及括细胞壁、细胞膜、细胞核、鞭毛、芽孢等）及染色特性进行观察，直观地了解细菌在形态结构染色特性进行观察，直观地了解细菌在形态结构上特性，根据不同微生物在形态结构上的不同达上特性，根据不同微生物在形态结构上的不同达到区别、鉴定微生物的目的。到区别、鉴定微生物的目的。 n2、微生物培养特性观察、微生物培

3、养特性观察第二节 微生物常规鉴定技术一、形态结构和培养特性观察一、形态结构和培养特性观察n1、微生物的形态结构观察、微生物的形态结构观察n2、微生物培养特性观察、微生物培养特性观察n微生物培养特性的观察是微生物检验鉴别中的一项重要内微生物培养特性的观察是微生物检验鉴别中的一项重要内容。容。 ）细菌的培养特征）细菌的培养特征 包括以下内容：在固体培养包括以下内容：在固体培养基上，观察菌落大小、形态、颜色（色素是水溶性基上，观察菌落大小、形态、颜色（色素是水溶性还是脂溶性）、光泽度、透明度、质地、隆起形状、还是脂溶性）、光泽度、透明度、质地、隆起形状、边缘特征及迁移性等。在液体培养中的表面生长情边

4、缘特征及迁移性等。在液体培养中的表面生长情况（菌膜、环）混浊度及沉淀等。半固体培养基穿况（菌膜、环）混浊度及沉淀等。半固体培养基穿刺接种观察运动、扩散情况。刺接种观察运动、扩散情况。 一、形态结构和培养特性观察一、形态结构和培养特性观察n1、微生物的形态结构观察、微生物的形态结构观察n2、微生物培养特性观察、微生物培养特性观察 ）细菌的培养特征）细菌的培养特征 ）霉菌酵母菌的培养特征：）霉菌酵母菌的培养特征：大多数酵母菌没有丝状大多数酵母菌没有丝状体，在固体培养基上形成的菌落和细菌的很相似，只体，在固体培养基上形成的菌落和细菌的很相似，只是比细菌菌落大且厚。液体培养也和细菌相似，有均是比细菌菌

5、落大且厚。液体培养也和细菌相似，有均匀生长、沉淀或在液面形成菌膜。匀生长、沉淀或在液面形成菌膜。 霉菌有分支的丝状体，菌丝粗长，在条件适宜霉菌有分支的丝状体，菌丝粗长，在条件适宜的培养基里，菌丝无限伸长沿培养基表面蔓延。霉菌的培养基里，菌丝无限伸长沿培养基表面蔓延。霉菌的基内菌丝、气生菌丝和孢子丝都常带有不同颜色，的基内菌丝、气生菌丝和孢子丝都常带有不同颜色，因而菌落边缘和中心，正面和背面颜色常常不同，如因而菌落边缘和中心，正面和背面颜色常常不同，如青霉菌：孢子青绿色，气生菌丝无色，基内菌丝褐色。青霉菌：孢子青绿色，气生菌丝无色，基内菌丝褐色。霉菌在固体培养表面形成絮状、绒毛状和蜘蛛网状菌霉菌

6、在固体培养表面形成絮状、绒毛状和蜘蛛网状菌落。落。 第二节 微生物常规鉴定技术二、生理生化试验二、生理生化试验n微生物生化反应：指用化学反应来测定微生物的代谢产物，微生物生化反应：指用化学反应来测定微生物的代谢产物，生化反应常用来鉴别一些在形态和其它方面不易区别的微生生化反应常用来鉴别一些在形态和其它方面不易区别的微生物。因此微生物生化反应是微生物分类鉴定中的重要依据之物。因此微生物生化反应是微生物分类鉴定中的重要依据之一。一。n微生物检验中常用的生化反应有：微生物检验中常用的生化反应有： 糖或醇类发酵试验糖或醇类发酵试验 淀粉水解试验淀粉水解试验 V-P试验试验 甲基红（甲基红（MR）试验）

7、试验 靛基质（靛基质（Indole）试验）试验 过氧化氢酶试验过氧化氢酶试验 硝酸盐还原试验硝酸盐还原试验 明胶液化试验明胶液化试验 尿素酶（尿素酶（Urease）试验）试验 氧化酶试验氧化酶试验 硫化氢（硫化氢（H2S）试验）试验 三糖铁（三糖铁（TSI）琼脂试验）琼脂试验 氨基酸脱羧酶的测定氨基酸脱羧酶的测定 耐盐性试验耐盐性试验 卵磷脂酶的测定卵磷脂酶的测定 石蕊牛奶反应石蕊牛奶反应 酪蛋白水解酪蛋白水解 苯丙氨酸脱氨试验苯丙氨酸脱氨试验 氰化钾试验氰化钾试验 对叠氮化钠的抗性对叠氮化钠的抗性 硫化氢硫化氢-靛基质靛基质-动力（动力（SIM）琼脂试验）琼脂试验 含碳化合物的利用（柠檬酸盐

8、或丙酸盐利用）含碳化合物的利用（柠檬酸盐或丙酸盐利用）第二节 微生物常规鉴定技术三、血清学试验三、血清学试验n血清学反应是指：相应的抗原与抗体在体外血清学反应是指：相应的抗原与抗体在体外一定条件下作用，可出现肉眼可见的沉淀、一定条件下作用，可出现肉眼可见的沉淀、凝集现象。在食品微生物检验中，常用血清凝集现象。在食品微生物检验中，常用血清学反应来鉴定分离到的细菌，以最终确认检学反应来鉴定分离到的细菌，以最终确认检测结果。测结果。 n在细菌的检测中，应用最多的是凝集试验、在细菌的检测中，应用最多的是凝集试验、沉淀反应和补体结合试验。沉淀反应和补体结合试验。血清学试验血清学试验的一般特点：的一般特点

9、：n1)抗原体的结合具有抗原体的结合具有特异性特异性，当有共同抗原体存在，当有共同抗原体存在时，会出现交叉反应。时，会出现交叉反应。n2)抗原体的结合是分子表面的结合，这种结合虽相抗原体的结合是分子表面的结合，这种结合虽相当稳定，但是当稳定，但是可逆的可逆的。n3)抗原体的结合是按抗原体的结合是按一定比例一定比例进行的，只有比例适进行的，只有比例适当时，才能出现可见反应。当时，才能出现可见反应。n4)血清学反应大体分为血清学反应大体分为两个阶段两个阶段进行，但其间无严进行，但其间无严格界限。第一阶段为抗原体特异性结合阶段，反应格界限。第一阶段为抗原体特异性结合阶段，反应速度很快，只需几秒至几分

10、钟反应即可完毕，但不速度很快，只需几秒至几分钟反应即可完毕，但不出现肉眼可见现象。第二阶段为抗原体反应的可见出现肉眼可见现象。第二阶段为抗原体反应的可见阶段，表现为凝集、沉淀、补体结合反应等。反应阶段，表现为凝集、沉淀、补体结合反应等。反应速度慢，需几分、几十分以至更长时间。而且，在速度慢，需几分、几十分以至更长时间。而且，在第二阶段反应中，电解质、第二阶段反应中，电解质、PH、温度等环境因素的、温度等环境因素的变化，都直接影响血清学反应的结果。变化，都直接影响血清学反应的结果。第二节 微生物常规鉴定技术三、血清学试验三、血清学试验n、凝集反应（、凝集反应（Agglutination reac

11、tion） 颗粒性抗原（细菌、红细胞等）与相应颗粒性抗原（细菌、红细胞等）与相应抗体结合，在电解质参与下所形成的肉眼可抗体结合，在电解质参与下所形成的肉眼可见的凝集现象，称为凝集反应。其中的抗原见的凝集现象，称为凝集反应。其中的抗原称为凝集原，抗体称为凝集素。在该反应中，称为凝集原，抗体称为凝集素。在该反应中，因为单位体积抗体量大，做定量实验时，应因为单位体积抗体量大，做定量实验时，应稀释抗体。稀释抗体。n）直接凝集反应：）直接凝集反应：a. 玻片凝集法；玻片凝集法； b. 试管凝集法试管凝集法 n）间接凝集反应）间接凝集反应 第二节 微生物常规鉴定技术三、血清学试验三、血清学试验n、凝集反应

12、（、凝集反应（Agglutination reaction）n、沉淀反应（、沉淀反应（Precipitation test） 可溶性抗原与相应抗体结合，在有适量电解质可溶性抗原与相应抗体结合，在有适量电解质存在下，经过一定时间，形成肉眼可见的沉淀物，存在下，经过一定时间，形成肉眼可见的沉淀物，称为沉淀反应。反应中的抗原称为沉淀原，抗体为称为沉淀反应。反应中的抗原称为沉淀原，抗体为沉淀素。由于在单位体积内抗原量大，为了不使抗沉淀素。由于在单位体积内抗原量大，为了不使抗原过剩，故应稀释抗原，并以抗原的稀释度作为沉原过剩，故应稀释抗原，并以抗原的稀释度作为沉淀反应的效价。淀反应的效价。n）环状沉淀反

13、应）环状沉淀反应 n）絮状沉淀反应）絮状沉淀反应n）琼脂扩散试验）琼脂扩散试验 第二节 微生物常规鉴定技术三、血清学试验三、血清学试验n、凝集反应（、凝集反应（Agglutination reaction）n、沉淀反应（、沉淀反应（Precipitation test）n、补体结合反应、补体结合反应(Complement fixation reaction) 补体结合反应是在补体参与下，以绵羊红细胞和补体结合反应是在补体参与下，以绵羊红细胞和溶血素作为指示系统的抗原抗体反应。补体无特异性，溶血素作为指示系统的抗原抗体反应。补体无特异性，能与任何一组抗原抗体复合物结合而引起反应。如果能与任何一组抗原抗体复合物结合而引起反应。如果补体与绵羊红细胞、溶血素的复合物结合，就会出现补体与绵羊红细胞、溶血素的复合物结合，就会出现溶血现象溶血现象; 如果与细菌及相应抗体复合物结合，就会如果与细菌及相应抗体复合物结合，就会出现溶菌现象。因此，如果出现溶菌，说明抗原抗体出现溶菌现象。因此，如果出现溶菌，说明抗原抗体是相对应的（试验结果阳性）；如果出现溶血，说明是相对应的（试验结果阳性）；如果出现溶血，说明抗原抗体不相对应（阴性）。抗原抗体不相对应（阴性）。n此反应操作复杂，敏感性高，特异性强，能测出少量此反应操作复杂，敏感性高，特异性强，能测出少量抗原和抗体，所以应用范围较广。抗原和抗体，所以应