干细胞微生物学检测标准操作规程SOPZK

1、准操作规程SOPZK干细胞微生物学检测标干细胞微生物学检测标准操作规程(SOP)北京赛托森生物科技开展质量治理干细胞微生物学检测标准操作规程文件名：干细胞微生物学检测标准操作规程文编号：制定人：日期：年月日文件类型：工作标准审核人：日期：年月日版次：第一版批准人：日期：年月日印数：共 5 份生效日期：年月日颁发部门：质量治理分发至：质量副总经理、质量治理部、QC 检验室、综合办公室变更记载修订号修订人批准日期生效日期原因及目的一、总那么1 .目的：建立针对实验室干细胞微生物学标准操作程序,用以标准员工的检测操作.2 .范围：适用于公司内部生产干细胞的微生物学检测工作3 .责任：生产部、生产车间

2、、质量治理部、QC 检验室主任、检验员对本规程的执行负责.4 .检测依据：YY/1995 药品检验操作规程,第 6 局部,微生物测定法.二、细菌检测1 .所用检测试剂耗材及仪器液体培养基：硫乙醇培养基、离心管、一次性巴斯德管琼脂培养基：胰酪陈大豆琼脂培养基、培养皿、接种环电热恒温恒湿培养箱温度可调 25CT7C、超净工作台2 .操作方法检测过程全程需在超净工作台内完成,注意无菌操作.培养基具体配制方法详见 SCP/ZK/006液体培养基：取培养液待恢复室温将待检样本及培养基过火后拧开盖子利用一次性巴斯德管将样本滴入培养液中 l-2ml将参加待检样本的培养液过火后拧紧盖子坐上标记方便记录与查看结

3、果37c 培养 5-7 天查看结果结果鉴定：培养液浑浊为细菌污染,？箭散那么为未污染.做好结果记录并填写质量报告琼脂培养基：取培养皿待恢复室温将待检样本过火后拧开盖子利用一次接种环将样本接种于培养液皿中坐上标记方便记录与查看结果将培养皿倒扣置培养箱中37c 培养 3-5 天查看结果结果鉴定：培养皿上有否出现可疑菌落,如有那么为细菌污染,假设培养至第 5 天未见可疑菌落,那么未污染做好结果记录并填写质量报告三、真菌检测L 所用检测试剂耗材及仪器液体培养基：改进马丁培养基、离心管、一次性巴斯德管琼脂培养基：马铃薯葡萄糖琼脂培养基、培养成、接种环电热恒温恒湿培养箱温度可调 25CT7C、超净工作台3

4、 .操作方法检测过程全程需在超净工作台内完成,注意无菌操作.培养基具体配制方法详见 SCF/2K/006液体培养基：取培养液待恢复室温将待检样本及培养基过火后拧开盖子利用一次性巴斯德管将样本滴入培养液中 l-2ml将参加待检样本的培养液过火后拧紧盖子坐上标记方便记录与查看结果26c 培养 5-7 天查看结果结果鉴定：培养液浑浊为真菌菌污染,清澈那么为未污染.做好结果记录并填写质量报告琼脂培养基：取培养皿待恢复室温将待检样本过火后拧开盖子利用一次接种环将样本接种于培养液皿中坐上标记方便记录与查看结果将培养皿倒扣置培养箱中26c 培养 3-5 天查看结果结果鉴定：培养皿上有否出现可疑菌落,如有那么

5、为细菌污染,假设培养至第 5 天未见可疑菌落,那么未污染做好结果记录并填写质量报告四、支原体检测支原体快速法：所有操作均在室温22 处下进行翻开检测板,在孔中参加 40uLReactionBuffeA第一个孔参加 10UL 阴性对照,其他孔参加 10UL 待测样品或阳性对照轻轻混匀,室温孵育 5 分钟所有孔中均参加 40nLReactionBuffeB轻轻混匀,室温孵育 4 分钟每孔参加 5MLStepSolution,轻轻混匀可在 30 分钟内观察样品颜色的变化或进行拍照保存：结果分析如果待测样品的颜色深于阴性对照,说明样品被支原体污染如果待测样品的颜色与阴性对照相同,说明样品没有支原体污染

6、做好结果记录并填写质量报告支原体 ELISA 法：编号：将样品对应微孔按序编号,每板应设阴性对照 2 孔、阳性对照 2 孔、空白对照 1 孔空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同加样：分别在阴、阳性对照孔中参加阴性对照、阳性对照 50 口 1.然后在待测样品孔先加样品稀释液 40U1,然后再加待测样品 10 口 1.加样将样品加于酶标板孑 U 浅部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀温育：用封板膜封板后置 37c 温育 30 分钟配液：将 30 倍浓缩洗涤液用蒸镭水 30 倍稀释后备用洗涤： 小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置 30 秒后弃去,如此重复 5 次,拍干加酶：每孑 5 口入酶标试剂 50U1,空白孔除外温育：操作同 3洗涤：操作同 5显色：每孔先参加显色剂 A50U1,再参加显色剂 B50U1,轻