壳聚糖对大鼠胃损伤时黏膜的保护作用

1、壳聚糖对大鼠胃损伤时黏膜的保护作用周晚霞1,杨慧2,俞红2,周南进2(1.南昌大学第二附属医院,2.江西省医学科学研究所,江西南昌330006摘要:目的研究壳聚糖对大鼠急性损伤时胃黏膜的保护作用。方法采用幽门结扎法建立大鼠损伤模型,然后收集胃液、胃损伤指数计分及SP 免疫组化法实验。结果与对照组比较,实验组黏膜损伤指数显著下降(P <0.001;胃内游离酸和总酸度显著降低(P <0.05;诱导型一氧化氮合酶(iNOS 表达显著升高(P <0.01。结论壳聚糖处理可明显减轻大鼠幽门结扎所致的胃黏膜损伤,对胃黏膜具有很好的保护作用。关键词:壳聚糖;胃黏膜;保护中图分类号:R962

2、文献标识码:A 文章编号:100521678(20090520326202Protection of chitosan on gastric mucosal acute injury in ratsZH OU Wan 2xia 1,Y ANG Hui 2,Y U H ong 2,ZH OU Nan 2jin 2(1.The No.2Hospital Affiliated to Nanchang Univer sity ;2.The Medical Institute o f Jiangxi ,Nanchang 330006,China K ey w ords :chitosan ;gastri

3、c mucosa ;protection收稿日期:2009204203基金项目:江西省卫生厅资助(N o.02229作者简介:周晚霞(19612,女,江西南昌人,主管技师;周南进(19592,男,通信作者,研究员,E 2mail :jxznj 。壳聚糖具有促进伤口愈合作用,在临床上已用作为创口促愈剂及应用于人工皮肤,也有用于皮肤溃疡的治疗。实验证实,壳聚糖还具有抑制胃酸、抗胃溃疡的作用122。我们的研究发现壳聚糖处理可明显减轻急性胃黏膜损伤,对胃黏膜具有保护作用324,但其机理尚不清楚,为此我们进一步研究了壳聚糖对急性损伤时的诱导型一氧化氮合酶(iNOS 含量及对胃黏膜的炎症反应的影响,以探讨

4、壳聚糖抗胃黏膜损伤的机理。1材料普通级S D 大鼠16只,雌雄各半,体重200250g ,南昌大学医学院动物科学部,动物合格证号:医字第021/962002号。88.5%脱乙酰度壳聚糖,上海其胜生物制品有限公司产品;抗诱导型iNOS 多克隆抗体,美国Santa Cruz Biotechnology Inc.产品。2方法2.1动物分组与给药按随机表格法将S D 大鼠分为对照组和实验组,每组8只。对照组为5%的阿拉伯树胶(为药物赋形剂;实验组为88.5%脱乙酰度壳聚糖500mg/kg d ,用5%阿拉伯树胶配成混悬液。每只大鼠灌胃3m L ,2次/d ,连续给药5d 。2.2损伤模型建立取对照组和

5、实验组大鼠,末次灌药后禁食(不禁水24h 后,再分别给予壳聚糖或阿拉伯树胶1次,1h 后,在3%异戊巴比妥100mg/kg 腹腔麻醉下剖腹,623中国生化药物杂志Chinese Journal of Biochemical Pharmaceutics 2009年第30卷第5期结扎幽门,关腹。9h后,处死大鼠,拆线开腹,结扎贲门,摘取全胃。首先收集胃液,记录胃液量,再以1500r/min离心10min,取上清液备用;然后解剖胃,测定损伤指数5。2.3胃黏膜损伤指数测定胃取出后沿大弯侧剪开,冲洗,展平,用卡尺(精确度0.02mm测量损伤情况,损伤指数的计分参考G uth等6标准,以局限于胃上皮的点

6、状糜烂、溃疡、出血灶的长度累积计分:正常为0分,损伤1mm 为1分,>1mm、2mm为2分,依此类推,损伤宽度>2mm者,指数加倍。2.4胃液游离酸和总酸度测定取上清胃液2m L,以1%酚酞为指示剂,0.1 m ol/L氢氧化钠溶液滴定到pH为7.0的终点,所耗的0.1m ol/L氢氧化钠溶液量×10即为胃液中所含的游离盐酸量,再继续滴加到出现酚酞色所耗用的氢氧化钠总量即为总酸度7。2.5iNOS的测定采用SP免疫组化法测定,结果判断标准:分别观察细胞染色强度及阳性细胞比例。采用定量积分法,每张切片至少观察10个高倍(×400视野共1000个细胞,计算阳性细胞百

7、分比,并根据每张切片的着色深浅计分:无着色为0分(阴性,浅黄色为1分(弱阳性,棕黄色为2分(阳性,棕褐色为3分(强阳性,然后由计算机处理应用图像分析软件进行数据分析。2.6统计学处理所有数据均表达为(x±s,两组间均数比较采用t检验,用SPSS11.0统计软件包处理,P<0.05表示差异有显著意义。3结果3.1胃黏膜损伤情况在幽门结扎损伤模型中,实验组的黏膜损伤指数为(6.25±2.25,显著低于对照组的(18.14±4.82(P<0.001。3.2对胃酸的影响实验组胃内游离酸为(42.90±15.89mm ol/L,低于对照组的(61.13

8、±15.11mm ol/L(P<0.05;实验组胃内总酸度为(48.25±16.31mm ol/L,低于对照组的(75.28±23.69mm ol/L(P<0.05。3.3胃黏膜内iNOS表达实验组的iNOS表达为(98.25±17.67,显著高于对照组的(72.50±16.99(P<0.01。4讨论本研究发现壳聚糖处理可明显减轻幽门结扎所致的急性胃黏膜损伤,黏膜损伤指数降低,黏膜的炎症反应减小,壳聚糖抗胃酸在此起了一定的作用。胃酸是胃黏膜的重要的攻击因素,减少胃酸分泌是抗胃黏膜损伤的重要方面。本研究发现壳聚糖可降低胃液中游离

9、酸、总酸度。壳聚糖中大量的NH2为碱性功能基,可中和体液和胃内过量的酸性物质,具有抗酸作用1。因此壳聚糖降低胃酸的机制是中和胃酸和抑制胃酸分泌综合作用的结果。另一方面,壳聚糖能与胃酸作用生成胶,附着在胃壁上形成一层保护膜,阻止胃酸和胃蛋白酶对溃疡面的刺激和腐蚀,维持黏膜的完整性,对胃黏膜起到直接保护作用。壳聚糖预处理大鼠胃黏膜内iNOS的表达显著高于对照组。iNOS的产物NO在胃黏膜保护中起重要作用。NO可扩张血管,增加胃黏膜血流量,抑制胃黏膜微循环内的血小板凝集,减轻中性粒细胞浸润,抑制白细胞及肥大细胞兴奋,清除超氧化物,促进胃黏液分泌,促进胃黏膜上皮修复,增加胃黏膜的保护功能及完整性8。因

10、此,在本研究中壳聚糖可能通过上调iNOS的表达,增加胃黏膜内NO含量,来发挥胃黏膜保护作用。壳聚糖对急性胃黏膜损伤的保护作用机制较复杂,是通过多途径完成的。既有减少胃酸抗过氧化作用,又有增强黏膜屏障和细胞保护等多种作用,本研究结果对于壳聚糖防治胃黏膜损伤及探讨正常胃肠道细胞保护作用有一定意义。参考文献:1Ito M,Ban A,Ishihara M.Anti2ulcer effects of chitin and chition,heal2thy foods,in ratsJ.Jpn J Pharmacol,2000,(82:2182225.2吕实波,颜燕,孙成玺,等.壳聚糖保护胃黏膜作用的实

11、验研究J.预防医学文献信息,2002,(8:4292430.3周南进,谢勇,郭晓白,等.壳聚糖对乙醇急性损伤时大鼠胃壁细胞的影响J.中国药理学通报,2005,21(5:616.4周南进,谢勇,郭晓白,等.壳聚糖对大鼠实验性溃疡愈合的影响J.中国生化药物杂志,2005,26(1:35237.5裴德凯.消化系统常见疾病实验模型制备法M/徐淑云,卞6G uth P H,Aures D,Pauslsen G.T opical aspirin plus HCl gastric le2sions in the ratJ.G astroenterology,1979,76(1:88296.7彭宁,曾衍霖.消化系统运动及分泌实验法M/徐淑云,卞如8M annick E E,Braro L E,Z arama G,et al.Inducible nitric oxide syn2thase nitrotyrosine and