常见缓冲液的配方

1、一.常用贮液与溶液1mol/L亚精胺（Spermidine）: 溶解2.55g亚精胺于足量的水中，使终体积为10ml。分装成小份贮存于-20。1mol/L精胺（Spermine）：溶解3.48g精胺于足量的水中，使终体积为10ml。分装成小份贮存于-20。10mol/L乙酸胺（ammonium acetate）：将77.1g乙酸胺溶解于水中，加水定容至1L后，用0.22um孔径的滤膜过滤除菌。10mg/ml牛血清蛋白(BSA）：加100mg的牛血清蛋白（组分V或分子生物学试剂级，无DNA酶）于9.5ml水中（为减少变性，须将蛋白加入水中，而不是将水加入蛋白），盖好盖后，轻轻摇动，直至牛血清蛋白

2、完全溶解为止。不要涡旋混合。加水定容到10ml，然后分装成小份贮存于-20。1mol/L二硫苏糖醇（DTT）：在二硫苏糖醇5g的原装瓶中加32.4ml水，分成小份贮存于-20。或转移100mg的二硫苏糖醇至微量离心管，加0.65ml的水配制成1mol/L二硫苏糖醇溶液。8mol/L乙酸钾（potassium acetate）：溶解78.5g乙酸钾于足量的水中，加水定容到100ml。1mol/L氯化钾（KCl）：溶解7.46g氯化钾于足量的水中，加水定容到100ml。3mol/L乙酸钠（sodium acetate）：溶解40.8g的三水乙酸钠于约90ml水中，用冰乙酸调溶液的pH至5.2，再加

3、水定容到100ml。0.5mol/L EDTA:配制等摩尔的Na2EDTA和NaOH溶液（0.5mol/L），混合后形成EDTA的三钠盐。或称取186.1g的Na2EDTA2H2O和20g的NaOH，并溶于水中，定容至1L。1mol/L HEPES：将23.8gHEPES溶于约90ml的水中，用NaOH调pH（6.8-8.2），然后用水定容至100ml。1mol/L HCl：加8.6ml的浓盐酸至91.4ml的水中。25mg/ml IPGT：溶解250mg的IPGT（异丙基硫代-D-半乳糖苷）于10ml水中，分成小份贮存于-20。1mol/LMgCl2:溶解20.3g MgCl26H2O于足量

4、的水中，定容到100ml。100mmol/L PMSF：溶解174mg的PMSF（苯甲基磺酰氟）于足量的异丙醇中，定容到10ml。分成小份并用铝箔将装液管包裹或贮存于-20。20mg/ml蛋白酶K（proteinase K）：将200mg的蛋白酶L加入到9.5ml水中，轻轻摇动，直至蛋白酶K完全溶解。不要涡旋混合。加水定容到10ml，然后分装成小份贮存于-20。10mg/mlRnase（无DNase）（DNasefree RNase）：溶解10mg的胰蛋白RNA酶于1ml的10mmol/L的乙酸钠水溶液中（pH 5.0）。溶解后于水浴中煮沸15min，使DNA酶失活。用1mol/L的TrisH

5、Cl调pH至7.5，于-20贮存。（配制过程中要戴手套）5mol/L氯化钠（NaCl）：溶解29.2g氯化钠于足量的水中，定容至100ml。10N氢氧化钠（NaOH）：溶解400g氢氧化钠颗粒于约0.9L水的烧杯中（磁力搅拌器搅拌），氢氧化钠完全溶解后用水定容至1L。10SDS（十二烷基硫酸钠）：称取100gSDS慢慢转移到约含0.9L的水的烧杯中，用磁力搅拌器搅拌直至完全溶解。用水定容至1L。2mol/L山梨（糖）醇（Sorbitol）：溶解36.4g山梨（糖）醇于足量水中使终体积为100ml。100三氯乙酸（TCA）:在装有500gTCA的试剂瓶中加入100ml水，用磁力搅拌器搅拌直至完全

6、溶解。（稀释液应在临用前配制）2.5 Xgal（5-溴-4-氯-3-吲哚-半乳糖苷）：溶解25mg的Xgal于1ml的二甲基甲酰胺（DMF）,用铝箔包裹装液管，贮存于-20。100×Denhardt试剂（Denhardt's regent）成分及终浓度  配制100ml溶液各成分的用量2%聚蔗糖（Ficoll，400型）2%聚乙烯吡咯烷酮（PVP-40）2%BSA（组分V）水   2g2g2g加水至总体积为100ml依照上表称取各组分，溶于水中定容。过滤除菌及杂质，分装成小份于-20贮存。10×标准DNA连接酶缓冲液（stan

7、dard DNA ligase buffer）（粘端、平端连接）成分及终浓度  配制10ml溶液各成分的用量0.5mol/L Tris-HCl100mmol/L MgCl2100mmol/L DTT2mmol/L ATP5mmol/L 盐酸亚精胺（可选）0.5mg/ml BSA（组分V）（可选）水   5ml 1mol/L 贮液1ml 1mol/L 贮液1ml 1mol/L 贮液200ul 100 mmol/L 贮液50ul 1 mmol/L 贮液0.5ml 10 mg/mL 贮液2.25ml将配制好的缓冲液分装成小份，贮存于-20 。100 mmol/

8、L dNTP 溶液（dNTP solutions）可以购买到100mmol/L纯dNTPs贮液，-80可贮存至少6个月。10mmol/L dNTP混合液成分及终浓度  配制20ul溶液各成分的用量10mmol/L dATP10mmol/L dCTP 10mmol/L dGTP10mmol/L dTTP水   2ul 100 mmol/L dATP 贮液2ul 100 mmol/L dCTP 贮液2ul 100 mmol/L dGTP 贮液2ul 100 mmol/L dTTP 贮液12ul 20PEG 8000/2.5M NaCl成分及终浓度 

9、 配制10ml溶液各成分的用量质量浓度为20聚乙二醇2.5mol/L 氯化钠水   20g50ml 5 mol/L 氯化钠 或 14.6g 固体氯化钠补足100ml 加聚乙二醇于含有氯化钠的烧杯中，加水至终体积100ml，用磁力搅拌器搅拌溶解。20×SSC成分及终浓度  配制1L溶液各成分的用量300mmol/L 柠檬酸三钠（二水）3mol/L 氯化钠水   88.2g175.3g补足1L 溶解柠檬酸三钠（二水）和氯化钠于约0.9L水中，加几滴10N NaOH溶液调pH为7.0，用水补足体积至1L。DEPC（焦碳酸

10、二乙酯）处理水加100ul DEPC 于 100ml 水中，使DEPC的体积分数为0.1。在37温浴至少12h，然后在15 psi 条件下高压灭菌20min，以使残余的DEPC失活。DEPC会与胺起反应，不可用DEPC处理Tris缓冲液。甲酰胺（deionized formamide）直接购买或加Dowex XG8 混合树脂于装有甲酰胺的玻璃烧杯中，用磁力搅拌器轻轻搅拌1h，可去除甲酰胺中的离子。经Whatman 1号滤纸过滤除去树脂后分成小份，充氮气于-80贮存（防止氧化）。磷酸缓冲液（phosphate buffer）按照下表所给定的体积，混合1 mol/L 的磷酸二氢钠（单碱）和1mol

11、/L 磷酸氢二钠（双碱）贮液，获得所需pH的磷酸缓冲液。配制1 mol/L 的磷酸二氢钠（NaH2PO4H2O）贮液：溶解138g于足量水中，使终体积为1L;1mol/L 磷酸氢二钠（Na2HPO4）贮液:溶解142g于足量水中使终体积为1L。1mol/L 磷酸二氢钠（ml）  1mol/L 磷酸氢二钠（ml）  最终pH值877850815775735685625565510450390330280   123150185225265315375435490550610670720   6.06.16.26.36

12、.46.56.66.76.86.97.07.17.2TE（用于悬浮和贮存DNA）成分及终浓度  配制100ml溶液各成分的用量10mmol/L TrisHCl1mmol/L EDTA水   1ml 1mol/L Tris-HCl（pH7.4-8.0，25）200ul 0.5 mol/L EDTA（pH 8.0）98.8ml Tris缓冲液（Tris-HCl buffer）将121g的Tris碱溶解于约0.9L水中，再根据所要求的pH（25下）加一定量的浓盐酸（11.6N），用水调整终体积至1L。浓盐酸的体积（ml）  pH8.6142

13、128.53846566671.376   9.08.88.68.48.28.07.87.67.47.2 二.电泳缓冲液、染料和凝胶加样液电泳缓冲液50×Tris-乙酸（TAE）缓冲液成分及终浓度  配制1L溶液各成分的用量2mol/L Tris碱1mol/L 乙酸100 mmol/L EDTA水   242g57.1 ml的冰乙酸（17.4 mol/L）200ml的0.5 mol/L EDTA（pH 8.0）补足1L 5×Tris-硼酸（TBE）缓冲液成分及终浓度  配制1L溶液各成分的用量4

14、45 mmol/L Tris碱445 mmol/L 硼酸盐10 mmol/L EDTA水   54g27.5g 硼酸20 ml的0.5 mol/L EDTA（pH 8.0）补足1L 染料1溴酚蓝（bromophenol blue）加1g水溶性钠型溴酚蓝于100ml水中，搅拌或涡旋混合直到完全溶解。1二甲苯青FF（xylene cyanole FF）溶解1g二甲苯青FF于足量水中，定容到100ml。10mg/ml的溴化乙锭（ethidium bromide）小心称取1g溴化乙锭，转移到广口瓶中，加100ml水，用磁力搅拌器搅拌直到完全溶解。用铝箔包裹装液管，于4贮存。凝胶上样

15、液（gel loading solutions）6×碱性凝胶上样液（室温贮存）成分及终浓度  配制10ml溶液各成分用量0.3 N 氢氧化钠6 mmol/L EDTA18聚蔗糖（400型）0.15溴甲酚绿0.25二甲苯青FF水   300ul 10N 氢氧化钠120ul 0.5mol/L EDTA（pH8.0）1.8g15mg25mg补足到10ml 6×聚蔗糖凝胶上样液（室温贮存）成分及终浓度  配制10ml溶液各成分用量0.15溴酚蓝0.15二甲苯青FF5 mmol/L EDTA15聚蔗糖（400型）水 

16、0; 1.5ml 1溴酚蓝1.5ml 1二甲苯青FF100ul 0.5mol/L EDTA（pH8.0）1.5g补足到10ml 6×溴酚蓝/二甲苯青/聚蔗糖凝胶上样液（室温贮存）成分及终浓度  配制10ml溶液各成分用量0.25溴酚蓝0.25二甲苯青FF15聚蔗糖（400型）水   2.5ml 1溴酚蓝2.5ml 1二甲苯青FF1.5g 补足到10ml 6×甘油凝胶上样液（4贮存）成分及终浓度  配制10ml溶液各成分用量0.15溴酚蓝0.15二甲苯青FF5 mmol/L EDTA50甘油水  

17、 1.5ml 1溴酚蓝1.5ml 1二甲苯青FF100ul 0.5mol/L EDTA（pH8.0）3ml 3.9ml 6×蔗糖凝胶上样液（室温贮存）成分及终浓度  配制10ml溶液各成分用量0.15溴酚蓝0.15二甲苯青FF5 mmol/L EDTA40聚蔗糖水   1.5ml 1溴酚蓝1.5ml 1二甲苯青FF100ul 0.5mol/L EDTA（pH8.0）4g 补足到10ml 10×十二烷基硫酸钠/甘油凝胶上样液（室温贮存）成分及终浓度  配制10ml溶液各成分用量0.2溴酚蓝0.2二甲苯青FF

18、200 mmol/L EDTA0.1SDS50甘油 水   20mg20mg4ml 0.5mol/L EDTA(pH8.0)100ul 10 SDS5ml补足到10ml 三.常用培养基LB培养基将下列组分溶解在0.9L水中：蛋白胨  10g酵母提取物  5g氯化钠  10g如果需要用1N NaOH（1ml）调整pH至7.0，再补足水至1L。注：琼脂平板需添加琼脂粉12g/L,上层琼脂平板添加琼脂粉7g/L。SOB培养基将下列组分溶解在0.9L水中：蛋白胨  20g酵母提取物  

19、;5g氯化钠  0.5g1 mol/L 氯化钾  2.5ml用水补足体积到1L。分成100ml的小份，高压灭菌。培养基冷却到室温后，再在每100ml的小份中加1ml灭过菌的1mol/L氯化镁。SOC培养基成分、方法同SOB培养基的配制，只是在培养基冷却到室温后，除了在每100ml的小份中加1ml灭过菌的1mol/L氯化镁外，再加2ml灭菌的1mol/L葡萄糖（18g葡萄糖溶于足够水中，再用水补足到100ml，用0.22um的滤膜过滤除菌）。TB培养基将下列组分溶解在0.9L水中：蛋白胨  12g酵母提取物  24g

20、甘油  4ml各组分溶解后高压灭菌。冷却到60，再加100ml灭菌的170mmol/L KH2PO4/0.72 mol/L K2HPO4的溶液（2.31g的KH2PO4和12.54gK2HPO4溶在足量的水中，使终体积为100ml。高压灭菌或用0.22um的滤膜过滤除菌）。2×YT培养基将下列组分溶解在0.9L水中：蛋白胨  16g酵母提取物  10g氯化钠  4ml如果需要用1N NaOH（1ml）调整pH至7.0，再补足水至1L。注：琼脂平板需添加琼脂粉12g/L,上层琼脂平板添加琼脂粉7g/L。YPD培养基将下列组分溶解在0.9L水中：蛋白胨  20g酵母提取物  10g葡萄糖  20g用水补足体积为1L后，高压灭菌。建议在高压灭菌之前，对色氨酸营养缺陷型每升培养基添加1.6g色氨酸，因为YPD培养基是色氨酸限制型培养基。为了配制平板，需要在高压灭菌前加入20g琼脂粉。四.常用抗生素氨苄青霉素（ampicillin）（100mg/ml）溶解1g氨苄青霉素钠盐于足量的水中，最后定容至10ml。分装成小份于-20贮存。常以25ug/ml50ug/ml的终浓度添加于生长培养基。羧苄青霉素（carbenicill