细胞染色方法总结

1、WORD格式Hoechst染色 :hoechst可以穿过活细胞膜与细胞核结合(主要为凋亡活细胞)在紫外光下专业资料整理WORD格式将核染为蓝色.Hoechst染细胞核会影响共聚焦显微镜对该样本其他荧光的观察效果.hoechst专业资料整理WORD格式有 hoechest33342和大，但是hoechst33342hoechst33258两种hoechsts33258对细胞的毒性作用更小一些，所以一般来说，hoechst33342二者区别不hoechsts33258用于细专业资料整理WORD格式胞固定后再染色，而hoechst33342那么可以对活细胞直接进展染色！专业资料整理WORD格式染色步

2、骤专业资料整理WORD格式PI (Propidium Iodide碘化丙啶 ) 染色 :是一种可对DNA染色的细胞核染色试剂，常用于细胞凋亡检测 .碘化丙啶Propidium Iodide, PI是一种核酸染料 (红色，它不能透过完整的细胞膜， 但凋亡中晚期的细胞和坏死细胞由于细胞膜通透性的增加， PI 能够透过细胞膜而使细胞核染红 .用 PI 单一染色观测培养细胞，只能表示细胞的坏死情况，而不是凋亡当然晚期凋亡 PI 亦可着色。但是如果您只是想知道细胞的死亡情况，而不是仔细区分坏死或凋亡，那么 PI 单一染色也可以。但是如果您一定要认定细胞的凋亡，那么 PI 单一染色显然不够！annexin

3、-v 染色细胞凋亡早期,细胞膜标志发生改变.其中,磷脂酰丝氨酸(Annexin-V,PS) 外翻 ,Annexin-V 在 Ca+ 存在的条件下与其高亲和力特异性结合 . 这样 ,Annexin-v 染色阳性 ,表示细胞处于早期凋亡状态 .Annexin-V 结合不同的荧光抗体 ,就可以利用流式细胞仪、荧光显微镜以及共聚焦激光扫描显微镜检测细胞凋亡的发生。 Annexin V 用 FITC 标记发绿色荧光；如果用 PE 标记就发红色荧光。JC-1 染色 JC-1 是一种阳离子染料，可以在线粒体内聚集，低浓度时主要以单体(monomer)存在，发射光以绿光 (525nm)为主；而在高浓度时那么可

4、以形成多聚体(aggregation)，发射光以红光 (-590nm)为主。线粒体本身存在一定的极性2+(polarization)，其外膜为负极，内膜为正极。电位差由Ca、Na 和 H 流调控。当线粒体状态良好时对JC-l 摄取量少，因而在线粒体内主要以单体的形式存在绿光强度 /红光强度的比值较高。在线粒体发生去极化(depolarization)时，线粒内JC-l 的浓度较高，多以多聚体的形式存在， 绿光强度 /红光强度的比值降低。 JC-1染色的绿光强度 /红光强度仅取决于线粒体的膜电势(membrane potential)，而与线粒体的形态、 体积和密度都无关， 因而能更好地反映线粒

5、体的功能状态。由于凋亡发生的早期存在线粒体的去极性，因此，JC-1 染色被用于检测凋亡的早期发JC-l 染色非常简单。 首先可将成品 JC-1 以 DMSO 配成储存液 (15mg/ml) ，储存于 -20，用时以培养液稀释至 10ug/ml 终浓度。对贴壁细胞可以直接弃去培养液，漂洗细胞后直接参加染色液， 10-30min 后在荧光显微镜下或者激光共聚焦下观察。线粒体状态好时细胞以绿色为主， 当红光信号增强时， 红绿相叠，以橙色为主。该染色运用于悬浮细胞时还可以通过流式细胞仪进展检测，收集红 /绿信号强度，计算其强度比。专业资料整理WORD格式钙黄绿素 -AM(Calcein-AM): Ca

6、lcein -AM 本身并不是荧光分子， 但通过活细胞内的酯酶作用， Calcein -AM 能脱去 AM基，产生的 Calcein 能发出强绿色荧光激发： 490 nm，发射： 515 nm。因此 Calcein -AM 仅对活细胞染色细胞活力鉴定台盼蓝染色法原理：细胞损伤或死亡时，台盼蓝可穿透变性的细胞膜，与解体的 DNA 结合，使其着色。而活细胞能阻止染料进入细胞内。故可以鉴别死细胞与活细胞。用品：1. 4%台盼蓝母液：称取 4g 台盼蓝，加少量蒸馏水研磨，加双蒸水至 100ml，用滤纸过滤， 4 度保存。使用时。用 PBS 稀释至 0.4%。2. 吸管、血细胞计数板、显微镜步骤：1、制

7、备单细胞悬液。并作适当稀释106细胞 /ml2、染色：细胞悬液与0.4%台盼蓝溶液以 9:1 混合混匀。3、计数：在三分钟内，用计数板分别计数活细胞和死细胞结果统计：镜下观察，死细胞被染成淡蓝色，而活细胞拒染。根据下式求细胞活力：活细胞率 %= 活细胞总数 /活细胞总数 +死细胞总数× 100本卷须知：台盼蓝染细胞时，时间不宜过长。否那么，局部活细胞也会着色，会干扰计数。台盼蓝染色原理通常认为细胞膜丧失完整性，细胞即可被认为已经死亡。台盼蓝(Trypan Blue)是检测细胞膜完整性最常用的生物染色试剂。*的正常细胞能够排斥台盼蓝，而死亡的细胞， 膜的完整性丧失， 通透性增加， 细胞

8、可被台盼蓝染成蓝色。 依据此原理，细胞经台盼蓝染色后， 可通过显微镜， 直接镜下计数或拍照后计数， 实现对细胞存活率比较准确的定量分析。试述台盼蓝染发鉴别死活细胞的原理，试分析染色时间过长本来是活细胞也被染色的原因专业资料整理WORD格式死细胞的细胞膜无屏障作用， 台盼蓝马上进入细胞而显蓝色。 活细胞细胞膜有选择透性，对台盼蓝的透性小， 进入细胞慢。 假设染色时间过长， 台盼蓝可能通过胞吞或胞饮作用进入细胞。专业资料整理WORD格式方法特染细胞类型点Hoechst 染色活细胞 (主要是早期凋亡细胞 )PI 染色坏死细胞或凋亡晚期细胞annexin-v染色早期凋亡细胞JC-1 染色早期凋亡细胞台盼蓝染色死细胞Calcein-AM染色活细胞染色部位激发光颜色