宣传10炎症应用中文版

1、应用案例综述炎症利用 RNAscope 技术对组织中免疫及炎症生物标记物的特异性检测检测组织中的免疫生物标记可视化任何 RNA轻松检测靶向目标高灵敏度- 单检测对自体免疫疾病、传染病和肿瘤而言，了解机制是分析发病机理，评估疾病发展，探索治疗新方法的关键。RNAscope 原位杂交（ISH）过去几十年，免疫学领域大大受益于新兴免疫测定，流式细胞术和免疫组化学的发展。但是，这些检测受限于抗体的可用性和特异性。而 RNAscopeISH 技术能检测任何物 种、任 高特异性- 特异性靶向检测适用于任何物种任何组织任何方法可靠，操作简单- 高通量全自动自动检测和方便的手动检测技术能精确地特定细胞和组织中

2、的 RNA 转录。RNAscope ISH 检测能帮助您在淋巴瘤和非淋巴样组织中检测到特异性表达的免疫标记， 同时还能获取形态学信息。比如，RNAscope 显色原位杂交（CISH）技术能帮助您识别福尔固定石蜡包埋（FFPE）肾癌组织中 CD274mRNA 的表达模式（图 1）。何的表达。在检测低表达或蛋白（图2） 的 mRNA 以及对无特异性抗体的目标时，RNAscopeISH 特别有效。提供仅需一次分析水平检测 以单拷贝检测形式实现对表达的化和量化特异性的可视形态学分析 在组织切片中对表达的实现单细胞内图 1. 人肾癌组织中的 CD274 mRNA 表达（FFPE）， 使用 RNAscop

3、e 2.0 HD 试剂盒 - 棕色。每个棕色点表示一个 CD274 mRNA。图 2. 人肺癌组织中 IL6 mRNA 的表达（FFPE），使用RNAscope2.0 HD 试剂盒 - 红色。每个红色点表示一个 IL6 mRNA。Doc #:50-004 03/18/2015生物应用 (MBA), 不用于诊断。请参考相关。组织特异性 RNA使 用 高 灵 敏 度 RNAscope ISH 检 测IL17RA+ 脊髓神经元报告者：Meng 等人 ,2014灵敏和特异的检测在表达检测方面，RNAscopeISH 技术具有高特异性和高灵敏度的特点。信号放大同时加上背景抑制技术能够检测 RNA 单，甚

4、至能检测部分降解的标本（图 3）。独中枢神经系统中表达的炎性细胞因子白细胞介素 17（IL-17）与多种自身免疫性疾病的发病机制有关，如多发性硬化症，类风湿性关节炎和牛皮癣。近日，Meng 等人通过大鼠诱导痛觉过敏模型研究了 IL-17 对炎症疼痛的作用，结果显示，脊髓中的 IL-17 会增加疼痛感。在他们的研究中，研特的双 Z 探针设计能够排除交叉杂交至非预期目标，并能区别同源度最高可达 85% 的 RNA 序列。为每个靶设计的 20 对双 Z 探针可用于检测完整的或部分降的 RNA。究测量了大鼠 FFPE 组织中 IL-17 及其受体 IL17RA 的表使用简单，稳定可靠达模式。RNAsc

5、opeCISH 显示，大鼠脊髓中 IL17RA 在约 7微米的椭圆形和圆形细胞中表达（图 4）。其他辅助数据显示， 这些细胞为神经元。这项研究表明，IL17/ IL17RA 信令参与脊髓中炎性疼痛的传导。我们做了大量试验，为了确保 RNAscope 检测能用于各种组织类型 -FFPE 组织和新鲜冷冻组织均可。RNAscope ISH 的工作流程和 IHC 类似，而且可以实现自动化。现已有成千的现成的目录探针和许多探针池可用。定制探针的设计和制作可在 3 周内完成。图 3. 为了大幅度提高的 RNA 原位杂交的信噪比，RNAscope 采用图 4. 脊髓 RNAscope 染色的代表性显微相片。

6、(A) 脊髓阳性染色，使用 RNAscope 阳性对照探针，POLR2A。(B) 放大 A 中白色框；箭头指向细胞质中包含棕色点的细胞。(E) 脊髓 RNAscope 染色，IL-17RA 探针。(F 和 G) 分别放大E 中右下角和左上角框；箭头指向包细胞质中含棕色点的细胞，表明，IL-17RA- 特异性 mRNA 在那些细胞中。复染显示：IL-17RA mRNA 的阳性细胞为约 7 微米的椭圆形和圆形。白色箭头指向 A 和E 背角的浅层，图片来自 Meng 等人（2013 年）。设计探针，其含两个探针（双Z 探针），能杂交并串联到靶序列上，从而放大信号。因为两个探针彼此相邻地杂交到非特异性

7、靶序列上是不太可能实现的，所以此设计概念能确保靶向特异性信号的选择性扩增。使用方法概览：炎症非靶目标的单 Z 形探针杂交无信号特异性靶目标的双 Z 形探针杂交信号放大利用 RNAscope 技术进行特异性定量 RNA 检测用 RNAscopeISH 进行 IHC 特异性验证报告者：stvik 等人 , 2014利用 RNAscopeISH 确定与形态案例分析：Brenna 等人 , 2013表达模式有人提出，炎性肠病的发病机理与补体途径有关。但尚未发现发炎肠道中补体因子的来源。stivik 等人在阳性克罗恩氏病患（CD）的结肠活检切片上，利用 RNAscopeISH 和免疫组织化学染色（IHC

8、）来检测补体因子B 的mRNA（CFB）和蛋白（fB）（图 5）。在腔内上皮细胞中发现 CFB mRNA和FB 蛋白，而 Lieberkuhn 隐窝上皮仅有少量或无CFB 表达。三磺酸（TNBS）诱导的结肠炎是研究炎症性肠疾病（IBD）发病机理、细胞机制和潜在治疗策略时广泛使用的模型。Brenna 等人系统地建立了 TNBS- 诱发结肠炎大鼠模型，并对大鼠和人类 IBD 结肠黏膜组织的转录模式进行了比较。使用 RNAscopeISH 来验证分析的结果。人类 IBD和TNBS 诱导的结肠炎中TLR2 和TLR4 的表达均显著增加（图6）。原位杂交结果清楚地表明，TNBS 给予后，结肠上皮细胞中的

9、 TLR2 和 TLR4 增加。RNAscopeISH 检测验证了芯片结果，并进一步确定了炎性细胞因子的组织来源。通过 IHC 染色通常很难确定蛋白的细胞来源。此项研究中，RNAscopeISH 的结果确定 CFB结肠上皮细胞。的主要来源为图 5:IHC 和 RNAscopeISH 显示了阳性 CD 组和健康对照组结肠活检切片中，补体因子B 蛋白（fB）和mRNA（CFB）的表达。使用相同活检组织的连续切片来 蛋白和 mRNA。RNAscope 和 IHC 染色表明，CFB mRNA 和补体因子 B 蛋白均集中于腔内上皮细胞，而结肠粘膜上皮 Lieberkuhn 隐窝中仅有少量或无染色。原始放

10、大倍数，20 和 40 ( 嵌入 )。数据来源：stvik 等人 (2014)。图 6.RNAscope 原位杂交（ISH）检测TNBS- 结肠炎粘膜活检组织中 TLR2 和 TLR4 表达。（A 和 C）第 0 天时，TLR2 和 TLR4 在上皮和粘膜免疫细胞中的分散表达。（B 和 D）TNBS 给予第 7 天时，TLR2 和 TLR4 在上皮的表达增加。数据来源：Brenna 等人 (2013).对照组炎症生物标记物目录探针炎症生物标记物分析的探针选择范围广泛。每个探针的规格可用于 20 张切片。货号探针名称使用方法概览：炎症货号探针名称货号探针名称货号探针名称货号探针名称货号探针名称订

11、购信息RNAscope 检测有手动和自动两种模式可供选择，以满足不同的需求。手动检测的工作流程与 IHC 类似，而且只需要一个杂交烘箱（HybEZ 系统），用以准确杂交时的温度和湿度。RNAscope 自动检测适用于 Ventana Discovery XT 和Discovery Ultra 系统和 Leica Biosystem 的 BOND RX 系统。RNAscope 试剂盒参考文献在 和形态。订购及技术咨询请info_china此文章阅读。仅用于研究，不可用于诊断。请参考相关。RNAscope 和 HybEZ 为 Advanced Cell Diagnostics 公司的商标或在美国或其它的商标。其他所有商标均为其所有者所有。保留最终解释权。2015 Advanced Cell Diagnostics, Inc. Doc#:50-004 03/18/2015货号名称310035RNAscope 2.0 HD 试剂盒 - 棕色3100