孙克刚_《注射剂2008’新法规解析及应对方案系列培训班》

1、1注射制剂无菌保证注射制剂无菌保证工艺技术要求的探讨工艺技术要求的探讨注射剂注射剂2008新法规解析及应对方案系列培训班新法规解析及应对方案系列培训班2注射制剂无菌保证工艺技术要求注射制剂无菌保证工艺技术要求一、前言一、前言二、注射剂基本技术的要求二、注射剂基本技术的要求三、无菌保证工艺研究与验证要求三、无菌保证工艺研究与验证要求 四、无菌药品生产关键工艺的法规要求四、无菌药品生产关键工艺的法规要求 (以以最终湿热灭菌药品工艺最终湿热灭菌药品工艺为例为例)3一、前一、前 言言4 1970年年1975年，美国因输液污染所导致年，美国因输液污染所导致的并发败血症事件有的并发败血症事件有400多起，

2、这在美国国多起，这在美国国内引起强烈的反响。内引起强烈的反响。FDA从从1975年开始进年开始进行了深入、广泛的调查，发现这些事件并行了深入、广泛的调查，发现这些事件并不是出于企业违规生产，而是整个生产体不是出于企业违规生产，而是整个生产体系中的不稳定因素所致。系中的不稳定因素所致。 此后，此后，FDA于于1976年首次将验证列入年首次将验证列入GMP。承认在无保证系统中，过程控制优于结果承认在无保证系统中，过程控制优于结果检验。检验。 5 30多年过去了，注射剂染菌所致的药难事多年过去了，注射剂染菌所致的药难事件降临我国，件降临我国，“欣弗欣弗”事件使得无菌制剂事件使得无菌制剂的无菌保障问题

3、成为公众关注的焦点。的无菌保障问题成为公众关注的焦点。 -无菌检查的局限性无菌检查的局限性-研究无菌保证的途径研究无菌保证的途径6面临的主要问题面临的主要问题1. 剂型选择不合理剂型选择不合理 2. 无菌保证工艺选择不合理无菌保证工艺选择不合理3. 无菌保证工艺研究不全面无菌保证工艺研究不全面4. 无菌保证工艺缺乏必要的验证无菌保证工艺缺乏必要的验证5. GMP与发达国家要求还存在差距与发达国家要求还存在差距 7 整顿和规范药品研制、生产、流通秩整顿和规范药品研制、生产、流通秩序工作方案序工作方案（国食药监办（国食药监办2006465号）要求号）要求: 严格审评审批化学药品注射剂、中药严格审评

4、审批化学药品注射剂、中药注射剂和多组分生化注射剂等安全性风险注射剂和多组分生化注射剂等安全性风险较大的较大的3类品种。类品种。8二、注射剂基本技术的要求二、注射剂基本技术的要求9审评审批要求审评审批要求:一、国家局已受理但尚未批准注册的化学药一、国家局已受理但尚未批准注册的化学药品注射剂和多组分生化药注射剂应参照品注射剂和多组分生化药注射剂应参照技术要求技术要求进行研究。进行研究。二、已经批准注册的化学药品注射剂和多组二、已经批准注册的化学药品注射剂和多组分生化药注射剂也应参照分生化药注射剂也应参照技术要求技术要求进进行相关研究，并在申报再注册时提供相关行相关研究，并在申报再注册时提供相关研究

5、资料。研究资料。三、对已上市化学药品注射剂、多组分生化三、对已上市化学药品注射剂、多组分生化药注射剂进行仿制、改变剂型或者改变给药注射剂进行仿制、改变剂型或者改变给药途径研究时，研究者应当慎重考虑已上药途径研究时，研究者应当慎重考虑已上市品种的研究基础。市品种的研究基础。10以化学药品注射剂为例以化学药品注射剂为例:一、化学药品注射剂剂型选择的必要性、合一、化学药品注射剂剂型选择的必要性、合理性理性二、化学药品注射剂规格的合理性、必要性二、化学药品注射剂规格的合理性、必要性三、化学药品注射剂原、辅料质量控制及来三、化学药品注射剂原、辅料质量控制及来源源四、化学药品注射剂处方及制备工艺合理性、四

6、、化学药品注射剂处方及制备工艺合理性、可行性研究，特别是灭菌工艺的选择及验可行性研究，特别是灭菌工艺的选择及验证研究、工艺稳定性研究等证研究、工艺稳定性研究等11五、化学药品注射剂质量研究及质量标准制订五、化学药品注射剂质量研究及质量标准制订 六、化学药品注射剂稳定性研究六、化学药品注射剂稳定性研究 七、化学药品注射剂非临床安全性评价的技术七、化学药品注射剂非临床安全性评价的技术要求要求 八、化学药品注射剂临床研究技术要求八、化学药品注射剂临床研究技术要求 九、仿制化学药品注射剂的技术要求九、仿制化学药品注射剂的技术要求 十、化学药品注射剂说明书和标签内容的技术十、化学药品注射剂说明书和标签内

7、容的技术要求要求 12本讲座主要探讨无菌保证工艺研究及评价本讲座主要探讨无菌保证工艺研究及评价包括：包括： 制备工艺的选择制备工艺的选择 工艺参数的确定工艺参数的确定 工艺的验证工艺的验证 注射剂灭菌工艺及其验证注射剂灭菌工艺及其验证13三、无菌保证工三、无菌保证工艺研究与验证要求艺研究与验证要求14最终灭菌产品的无菌保证水平规定为最终灭菌产品的无菌保证水平规定为:微生物污染概率不超过百万分之一微生物污染概率不超过百万分之一采用无菌生产工艺的产品采用无菌生产工艺的产品:其无菌保证水平为微生物污染概率不超其无菌保证水平为微生物污染概率不超过千分之一过千分之一 15与产品无菌保证相关的影响因素与产

8、品无菌保证相关的影响因素环境环境厂房、设备厂房、设备原材料（原辅料、包装材料）原材料（原辅料、包装材料）无菌保证工艺无菌保证工艺生产过程控制生产过程控制人员卫生人员卫生16 灭菌方法选择按欧盟灭菌方法选择按欧盟1999年年8月正式开始执月正式开始执行灭菌方法选择的决策树行灭菌方法选择的决策树 决策树的作用是在考虑各种复杂因素的情决策树的作用是在考虑各种复杂因素的情况下辅助选择最佳的灭菌方法况下辅助选择最佳的灭菌方法 凡是可以最终灭菌的产品务必要最终灭菌凡是可以最终灭菌的产品务必要最终灭菌171819决策树越往下，风险越大决策树越往下，风险越大需要提供的必要证据越多需要提供的必要证据越多20基本

9、原则基本原则: 无菌产品应在灌装到最终容器后进行最终无菌产品应在灌装到最终容器后进行最终灭菌（首选）灭菌（首选） 如因产品对热不稳定不能进行最终灭菌时，如因产品对热不稳定不能进行最终灭菌时，可采用最终灭菌方法的替代方法可采用最终灭菌方法的替代方法-过滤除过滤除菌和菌和/或无菌生产工艺（退而求其次）或无菌生产工艺（退而求其次）21同时明确如下要求：同时明确如下要求： 无菌药品生产企业，首先应根据特定的处方选择最佳的灭无菌药品生产企业，首先应根据特定的处方选择最佳的灭菌方法，然后再选择包装材料菌方法，然后再选择包装材料 使用热不稳定的包装材料不能作为选择无菌生产工艺的理使用热不稳定的包装材料不能作

10、为选择无菌生产工艺的理由由 因其他因素选择的包装容器不能进行最终灭菌，药品生产因其他因素选择的包装容器不能进行最终灭菌，药品生产企业仍有责任不断寻找可接受的替代容器，使得产品可以企业仍有责任不断寻找可接受的替代容器，使得产品可以在可接受的时间范围内采用最终灭菌的方法在可接受的时间范围内采用最终灭菌的方法 任何商业考虑均不能作为不使用具有最高无菌保证水平的任何商业考虑均不能作为不使用具有最高无菌保证水平的最终灭菌方法的理由最终灭菌方法的理由22常用的灭菌方式及其无菌保证水平常用的灭菌方式及其无菌保证水平1、过度杀灭法、过度杀灭法 微生物残存概率微生物残存概率10-62、残存概率法、残存概率法 微

11、生物残存概率微生物残存概率10-63、无菌生产工艺、无菌生产工艺 无菌保证一般只能达到无菌保证一般只能达到10-3水平水平23最终灭菌工艺的验证要求最终灭菌工艺的验证要求最终灭菌工艺：最终灭菌工艺：过度杀灭法（过度杀灭法（ Fo12） 残存概率法（残存概率法（8 Fo12）目标：灭菌后的微生物残存概率目标：灭菌后的微生物残存概率10-6 24过度杀灭设计方法：过度杀灭设计方法： 一种灭菌设计方法，只需要最少的关于产一种灭菌设计方法，只需要最少的关于产品生物负载的信息。最差条件的生物负载品生物负载的信息。最差条件的生物负载猜测用来确定所产生的杀灭力需要获得灭猜测用来确定所产生的杀灭力需要获得灭菌

12、物上的菌物上的PNSU为为10-6。在使用这个方法时，。在使用这个方法时，确效计划必须证明确效计划必须证明FBIO和和FPHY都大于都大于12分钟。分钟。25残存概率法：残存概率法： 一种灭菌设计方法，当所产生的杀灭力需一种灭菌设计方法，当所产生的杀灭力需要达到要达到PNSU为为10-6时，以（灭菌物品上或时，以（灭菌物品上或内的）生物负载的特性和产品对热的敏感内的）生物负载的特性和产品对热的敏感度为基础。度为基础。 应产品而定的设计方法应产品而定的设计方法26工艺验证要求：工艺验证要求：过度杀灭法和残存概率法均应进行工艺验证过度杀灭法和残存概率法均应进行工艺验证 验证内容：空载热分布验证内容

13、：空载热分布 满载热分布满载热分布 热穿透试验热穿透试验 微生物挑战试验（残存概率法）微生物挑战试验（残存概率法）灭菌前微生物污染水平灭菌前微生物污染水平-数量和耐热性数量和耐热性 -过程控制过程控制27热力灭菌的动力学原理热力灭菌的动力学原理 微生物耐热参数微生物耐热参数 （D值）值） 温度系数温度系数 Z值值 FT 值值 T灭菌时间灭菌时间 F0 值值标准灭菌时间标准灭菌时间 无菌保证值（无菌保证值（SAL） 灭菌率灭菌率L28对数规则：对数规则：ArrheniusArrhenius 质量作用定律质量作用定律 湿热灭菌的对数规则始于湿热灭菌的对数规则始于19211921年年BigeowBi

14、geow发表发表的论文的论文-用对数规则阐述灭菌工艺过程，他认为，用对数规则阐述灭菌工艺过程，他认为，灭菌过程可以用阿伦尼乌斯的一级反应式来描述。灭菌过程可以用阿伦尼乌斯的一级反应式来描述。根据质量作用定律，在恒定温度及保持其它条件根据质量作用定律，在恒定温度及保持其它条件不变的情况下，单位时间内被杀灭的微生物数正不变的情况下，单位时间内被杀灭的微生物数正比于比于t t0 0时原有的数目，即：时原有的数目，即： dN/dtdN/dtK(NK(N0 0N Nk k) ) 式中：式中：N N0 0为为t t0 0时，存活的微生物数；时，存活的微生物数； N Nk k为为t t时被杀灭的微生物数；时

15、被杀灭的微生物数； N N为为t t时存活的微生物数。时存活的微生物数。由此得出，灭菌时微生物的死亡遵循对数规则。由此得出，灭菌时微生物的死亡遵循对数规则。29微生物存活数与灭菌时间关系图微生物存活数与灭菌时间关系图 半对数座标半对数座标Y轴：微生物取对数轴：微生物取对数X轴：时间为轴：时间为10进制普通座标进制普通座标Y轴及轴及X轴均为普通座标轴均为普通座标tlgN102030123t N10203012330微生物灭活曲线微生物灭活曲线红色为理想状态：直线红色为理想状态：直线自然界存在的芽孢可能为自然界存在的芽孢可能为A、B、C生物指示剂测试的线性较好生物指示剂测试的线性较好LgNtABC

16、生物指示剂生物指示剂31微生物耐热参数（微生物耐热参数（D值）值）: D值是指在特定灭菌条件下，使微生物数量值是指在特定灭菌条件下，使微生物数量下降一个对数单位或杀灭下降一个对数单位或杀灭90%所需要的时所需要的时间（分钟）。间（分钟）。32D-值：在基本温度时使微生物数量下降一个对数值：在基本温度时使微生物数量下降一个对数 值（或值（或90%）所需的时间）所需的时间33灭菌灭菌温度系数（温度系数（Z值）值）: Z 值系指使某一种微生物的值系指使某一种微生物的D 值变化一值变化一个对数单位，灭菌温度应升高或下降的度个对数单位，灭菌温度应升高或下降的度数数. 在没有特定要求时在没有特定要求时 :

17、 湿热灭菌条件下湿热灭菌条件下Z值通常取值通常取10； 干热灭菌条件下干热灭菌条件下Z值通常取值通常取20； 干热去热原时干热去热原时Z值通常取值通常取54。3435 FT 值值T(): 灭菌时间灭菌时间FT 值指值指T()灭菌值，系指一个给灭菌值，系指一个给定定Z 值下，灭菌程序在温度值下，灭菌程序在温度T()下的等效灭菌下的等效灭菌时间。时间。 FTDTlgN式中式中:DT 为在为在T()下微生物的下微生物的D 值；值；lgN 为为T()下灭菌程序使微生物数下降下灭菌程序使微生物数下降的对数单位数。的对数单位数。36F0值值: 标准灭菌时间（用于湿热灭菌），系灭标准灭菌时间（用于湿热灭菌）

18、，系灭菌过程赋予待灭菌物品在菌过程赋予待灭菌物品在121下的等效下的等效灭菌时间（分钟）。灭菌时间（分钟）。FH值值: 标准灭菌时间（用于干热灭菌），系灭标准灭菌时间（用于干热灭菌），系灭菌过程赋予待灭菌物品在菌过程赋予待灭菌物品在170下的等效下的等效灭菌时间（分钟）。灭菌时间（分钟）。37灭菌率灭菌率L： L 指在某一温度指在某一温度T()下灭菌下灭菌lmin 所获得所获得的标准灭菌时间。的标准灭菌时间。L=10 (Ti-TR) /Z Ti灭菌温度灭菌温度 TR标准参照温度标准参照温度 Z 微生物死亡率常数微生物死亡率常数3839时间时间 温度温度 致死率致死率湿热灭菌的致死率湿热灭菌的致

19、死率40无菌生产工艺的验证要求无菌生产工艺的验证要求无菌生产工艺：无菌生产工艺：过滤除菌无菌生产工艺过滤除菌无菌生产工艺无菌组装工艺无菌组装工艺41工艺验证要求：工艺验证要求：-培养基模拟灌装试验培养基模拟灌装试验 对生产系统的验证对生产系统的验证-除菌过滤系统适应性试验除菌过滤系统适应性试验 包括过滤系统相容性测试、过滤前后滤包括过滤系统相容性测试、过滤前后滤膜完整性测试、滤膜的微生物截留量测试膜完整性测试、滤膜的微生物截留量测试42微生物挑战试验微生物挑战试验43微生物挑战试验微生物挑战试验 生物指示剂生物指示剂-简称为简称为BIBI（biological biological indic

20、atorindicator）: :是对特定灭菌工艺具有一定是对特定灭菌工艺具有一定耐受性并且能够定量测定灭菌效力的微生耐受性并且能够定量测定灭菌效力的微生物制剂，适用于制备生物指示剂的微生物物制剂，适用于制备生物指示剂的微生物多为芽胞类细菌，这是因为，除辐射灭菌多为芽胞类细菌，这是因为，除辐射灭菌外，芽胞类细菌比常规的生长态微生物对外，芽胞类细菌比常规的生长态微生物对灭菌工艺具有更强的耐受性。生物指示剂灭菌工艺具有更强的耐受性。生物指示剂既可用来测定一个给定的灭菌工艺条件的既可用来测定一个给定的灭菌工艺条件的灭菌效果，也可判别它是否符合灭菌效果，也可判别它是否符合无菌保证无菌保证要求。要求。4

21、4微生物挑战试验微生物挑战试验 所谓湿热灭菌工艺的生物指示剂微生物所谓湿热灭菌工艺的生物指示剂微生物挑战试验，系指将一定量已知挑战试验，系指将一定量已知D D值的耐热孢值的耐热孢子接入被灭菌的产品中，在设定的湿热灭子接入被灭菌的产品中，在设定的湿热灭菌条件下灭菌，以验证设定的灭菌工艺是菌条件下灭菌，以验证设定的灭菌工艺是否确实能赋予产品所需的否确实能赋予产品所需的SAL SAL 为为10106 6而进而进行的试验及评价过程。行的试验及评价过程。45微生物挑战试验微生物挑战试验 USPUSP和和BPBP对这方面有专门的论述。一般说来，对这方面有专门的论述。一般说来，对生物指示剂选择的原则性要求是

22、：对生物指示剂选择的原则性要求是： 孢子（菌株）稳定孢子（菌株）稳定 耐热性强于被灭菌物品中常见的污染菌耐热性强于被灭菌物品中常见的污染菌 系非致病菌系非致病菌 易于培养，孢子萌发率要在易于培养，孢子萌发率要在90%90%以上以上 有效期长有效期长 保存及使用方便保存及使用方便 安全性好安全性好46微生物挑战试验微生物挑战试验 湿热灭菌工艺验证用生物指示剂的来源主要湿热灭菌工艺验证用生物指示剂的来源主要有两类有两类: : 一类是采用标准生物指示剂，这类生物指示一类是采用标准生物指示剂，这类生物指示剂可从市场购买；剂可从市场购买； 另一类需用从日常生产污染菌监控分离出的另一类需用从日常生产污染菌

23、监控分离出的最耐热微生物孢子制备，并测得相关参数（最佳最耐热微生物孢子制备，并测得相关参数（最佳生长条件、耐热性等）后方可使用。生长条件、耐热性等）后方可使用。 47菌菌 种种 名名 称称常规常规D121值值/min嗜热脂肪芽胞杆菌嗜热脂肪芽胞杆菌 Bacillus stereatherno philus1.53.0枯草芽胞杆菌枯草芽胞杆菌 Bacillus subtilis ATCC52300.30.7凝结芽胞杆菌凝结芽胞杆菌 Bacillus coagulans0.40.8梭状芽胞杆菌梭状芽胞杆菌 Clostridium sporogenes0.40.8湿热灭菌工艺验证中常用的生物指示剂湿

24、热灭菌工艺验证中常用的生物指示剂 48例例: 国产非治病性嗜热肪芽胞菌芽胞（国产非治病性嗜热肪芽胞菌芽胞（ATCC 7953） D值值-D121值值1.74存活时间存活时间- 121oC饱和蒸汽下饱和蒸汽下, 存活时间不存活时间不 少于少于3.9分钟分钟死亡时间死亡时间- 121oC饱和蒸汽下饱和蒸汽下, 死亡时间不死亡时间不 少于少于19分钟分钟孢子量孢子量- 5105-6cfu/支支49使用方法使用方法: : 将生物指示剂和被灭菌物品一起放置在灭菌柜将生物指示剂和被灭菌物品一起放置在灭菌柜（锅）内，上、中层、中央和排气口（冷点处）（锅）内，上、中层、中央和排气口（冷点处）灭菌后取出，然后直

25、接置于灭菌后取出，然后直接置于56 60 56 60 o oC C培养培养24 24 48 48小时，并另取一支未经灭菌生物指示剂一起小时，并另取一支未经灭菌生物指示剂一起培养，作为阳性对照。培养，作为阳性对照。结果判断结果判断: : 根据颜色判断灭菌效果，培养后全部保持紫色灭根据颜色判断灭菌效果，培养后全部保持紫色灭菌合格。若由紫色变为黄色判为灭菌不合格。对菌合格。若由紫色变为黄色判为灭菌不合格。对照管应紫变黄色为该指示剂有效。照管应紫变黄色为该指示剂有效。50例例: 进口进口3MTMATTESTTM (1262) 蒸汽灭菌生物蒸汽灭菌生物培养指示剂培养指示剂(嗜热脂肪杆菌芽胞菌片嗜热脂肪杆

26、菌芽胞菌片) 在在121饱和蒸汽条件下，存活时间大于或等饱和蒸汽条件下，存活时间大于或等于于5分钟，杀灭时间小于或等于分钟，杀灭时间小于或等于15分钟。分钟。 灭菌完毕，取出生物指示剂后至少冷却灭菌完毕，取出生物指示剂后至少冷却10分钟分钟以上，方可挤破生物指示剂内安瓿。否则有可能以上，方可挤破生物指示剂内安瓿。否则有可能导致安瓿的碎片伤人。导致安瓿的碎片伤人。 只有对照管为阳性，其生物结果才算有效。只有对照管为阳性，其生物结果才算有效。51使用方法使用方法1 1、将压力蒸汽灭菌生物培养指示剂放于一标准测试、将压力蒸汽灭菌生物培养指示剂放于一标准测试包中；包中；2 2、按照国家规范，分别将测试

27、包放于锅内不同位置；、按照国家规范，分别将测试包放于锅内不同位置；3 3、灭菌完毕，取出生物指示剂；、灭菌完毕，取出生物指示剂；4 4、挤破内含的安瓿，与一支对照管一起放于、挤破内含的安瓿，与一支对照管一起放于5656培培养锅培养；养锅培养；5 5、4848小时后，阅读结果。小时后，阅读结果。52微生物挑战试验微生物挑战试验挑战试验合格标准挑战试验合格标准 生物指示剂的选用应构成挑战性的必要条件：可生物指示剂的选用应构成挑战性的必要条件：可用药典，如用药典，如USPUSP中规定的生物指示剂；对存中规定的生物指示剂；对存活概率灭菌程序的产品而言，应当强调，所用生活概率灭菌程序的产品而言，应当强调

28、，所用生物指示剂的耐热性应大于产品中常见污染菌的耐物指示剂的耐热性应大于产品中常见污染菌的耐热性，生物指示剂的用量也应大于产品中该污染热性，生物指示剂的用量也应大于产品中该污染菌的水平。菌的水平。 经生物指示剂验证后，应能证明在设定的经生物指示剂验证后，应能证明在设定的F F0 0条件条件下，产品的无菌保证水平低于下，产品的无菌保证水平低于1010-6-6。53微生物挑战试验微生物挑战试验方案制订方案制订 制订验证方案时，应当综合考虑相关法规制订验证方案时，应当综合考虑相关法规要求、灭菌热分布及热穿透试验数据、产要求、灭菌热分布及热穿透试验数据、产品的热稳定性、日常生产监控中所获得的品的热稳定

29、性、日常生产监控中所获得的灭菌前产品中的微生物污染水平和污染菌灭菌前产品中的微生物污染水平和污染菌的耐热性数据。方案还包括验证记录的各的耐热性数据。方案还包括验证记录的各种表格。种表格。54微生物挑战试验微生物挑战试验湿热灭菌程序通常分为两类：湿热灭菌程序通常分为两类： 过度杀灭程序（过度杀灭程序（Overkill Design Overkill Design ApproachApproach） 残存概率程序（残存概率程序（Product-Specific Design Product-Specific Design Approach Approach ）55微生物挑战试验微生物挑战试验挑战试

30、验挑战试验( (生物指示剂验证试验生物指示剂验证试验 ):): 生物指示剂的装载生物指示剂的装载 灭菌灭菌 检查和培养检查和培养 结果评价结果评价 验证试验的频率验证试验的频率 56微生物挑战试验微生物挑战试验 作为一项生物挑战性试验，尽管生物指作为一项生物挑战性试验，尽管生物指示剂验证不能替代物理验证，但它能如实示剂验证不能替代物理验证，但它能如实反映灭菌工艺条件对微生物的杀灭效果，反映灭菌工艺条件对微生物的杀灭效果，从而证明该灭菌工艺所赋予相关产品的无从而证明该灭菌工艺所赋予相关产品的无菌保证水平是否符合要求。生产指示剂在菌保证水平是否符合要求。生产指示剂在试验中扮演了各种可能因素造成的产

31、品中试验中扮演了各种可能因素造成的产品中的的“污染菌污染菌”的角色，以这种方式进行的的角色，以这种方式进行的验证更切合实际，更能说明所设定的灭菌验证更切合实际，更能说明所设定的灭菌程序是否安全。程序是否安全。57微生物挑战试验微生物挑战试验 对热稳定性很好的产品而言，通常采用过度对热稳定性很好的产品而言，通常采用过度杀灭程序，该程序能赋予产品足够大的安全系数，杀灭程序，该程序能赋予产品足够大的安全系数，使在使在121121下下D D值约为值约为1.0min1.0min的细菌孢子至少下降的细菌孢子至少下降1212个对数单位。在过度杀灭程序的一半时间时，个对数单位。在过度杀灭程序的一半时间时，可使

32、该孢子至少下降可使该孢子至少下降6 6个对数单位。由于杀灭微生个对数单位。由于杀灭微生物孢子（生物指示剂）的灭菌条件极为苛刻，因物孢子（生物指示剂）的灭菌条件极为苛刻，因此，从灭菌程序的标准灭菌时间此，从灭菌程序的标准灭菌时间F F0 0来看，毋须担来看，毋须担心产品灭菌后的无菌保证问题。心产品灭菌后的无菌保证问题。58微生物挑战试验微生物挑战试验 并不是所有的灭菌程序都可进行生物指并不是所有的灭菌程序都可进行生物指示剂验证。有些产品的热稳定性相当差，示剂验证。有些产品的热稳定性相当差，灭菌温度仅能控制在灭菌温度仅能控制在100100左右，整个灭左右，整个灭菌程序的菌程序的F F0 0值还不到

33、值还不到1min1min，对此类程序进，对此类程序进行生物指示剂验证就没有太多的意义。此行生物指示剂验证就没有太多的意义。此类产品的无菌保证水平主要是通过无菌生类产品的无菌保证水平主要是通过无菌生产工艺来实现，灭菌仅能作为提高产品无产工艺来实现，灭菌仅能作为提高产品无菌保证水平的手段。菌保证水平的手段。59微生物挑战试验微生物挑战试验 WHO GMPWHO GMP中强调，化学或生物指示剂可中强调，化学或生物指示剂可用于灭菌过程的监控，但不得代替物理监用于灭菌过程的监控，但不得代替物理监控（温度、时间）。控（温度、时间）。 FDAFDA均认为生物指示剂验证并不能取代均认为生物指示剂验证并不能取代

34、物理验证，这是由生物指示剂验证的复杂物理验证，这是由生物指示剂验证的复杂性所决定的。性所决定的。60容器密封性试验容器密封性试验61容器密封性试验容器密封性试验 FDA-GMP211.94（药品容器和密封（药品容器和密封材料）要求，药品容器和密封材料应是清材料）要求，药品容器和密封材料应是清洁的，按药品性质的指示进行灭菌和去热洁的，按药品性质的指示进行灭菌和去热原。标准及检测方法、清洁方法、去热原原。标准及检测方法、清洁方法、去热原及灭菌方法应形成书面文件，并遵照执行。及灭菌方法应形成书面文件，并遵照执行。 EU-应采用经验证的适当方法完成产品应采用经验证的适当方法完成产品的密封。的密封。(无

35、菌产品的最终处理无菌产品的最终处理)62容器密封性试验容器密封性试验 在对产品包装进行评估测试的初期，常采用在对产品包装进行评估测试的初期，常采用物理和微生物学检测手段。物理检测有许多优点，物理和微生物学检测手段。物理检测有许多优点，如灵敏度较高、使用方便、检测迅速及低成本等。如灵敏度较高、使用方便、检测迅速及低成本等。在产品有效期内，均可使用物理检测方法来确定在产品有效期内，均可使用物理检测方法来确定包装完整性是否符合规定要求。进行包装完整性包装完整性是否符合规定要求。进行包装完整性检测的一个重要原因在于，确保无菌产品始终保检测的一个重要原因在于，确保无菌产品始终保持无菌状态。因此，在产品包

36、装的研发阶段，应持无菌状态。因此，在产品包装的研发阶段，应考虑采用微生物侵入试验，或采用经验证过的并考虑采用微生物侵入试验，或采用经验证过的并且比微生物检测更为有效的物理试验方法，来检且比微生物检测更为有效的物理试验方法，来检测产品包装的完整性。但是，对于效期内成品的测产品包装的完整性。但是，对于效期内成品的稳定性试验来说，因进行微生物侵入试验较为困稳定性试验来说，因进行微生物侵入试验较为困难，故建议采用物理检测方法。难，故建议采用物理检测方法。63容器密封性试验容器密封性试验 微生物侵入试验是对最终灭菌容器密封件系统微生物侵入试验是对最终灭菌容器密封件系统完好性的挑战性试验。在验证试验中，取

37、输液瓶完好性的挑战性试验。在验证试验中，取输液瓶或西林瓶或西林瓶( (小瓶小瓶) )，灌装入培养基，在正常生产线，灌装入培养基，在正常生产线上压塞、压盖灭菌。此后，将容器密封面浸入高上压塞、压盖灭菌。此后，将容器密封面浸入高浓度运动性菌液中，取出、培养并检查是否有微浓度运动性菌液中，取出、培养并检查是否有微生物侵入，确认容器密封系统的完好性。此同时，生物侵入，确认容器密封系统的完好性。此同时，需作阳性对照试验，确认培养基的促菌生长能力。需作阳性对照试验，确认培养基的促菌生长能力。64过滤系统的验证过滤系统的验证65过滤系统的验证过滤系统的验证法规的要求法规的要求 FDA Aseptic Pro

38、cessing Guidelines FDA无菌工艺指南无菌工艺指南:与过滤器完整性相关的与过滤器完整性相关的性能测试应包括：模拟生产条件，在最苛性能测试应包括：模拟生产条件，在最苛刻生产环境下进行微生物挑战试验。刻生产环境下进行微生物挑战试验。 EU GMP 欧盟欧盟GMP 无菌药品附录无菌药品附录 所有除菌工艺必须进行验证所有除菌工艺必须进行验证66PIC/S无菌工艺验证无菌工艺验证(2004年年7月月) 9.5.1 不管使用什么样的过滤器或过滤器组合不管使用什么样的过滤器或过滤器组合,验证都应包括微生物挑战试验验证都应包括微生物挑战试验,模拟模拟 “最差情况最差情况”生产条件生产条件.用

39、于挑战试验微生物用于挑战试验微生物(如缺陷假单胞菌如缺陷假单胞菌)的选择必须证明适当的选择必须证明适当.产品的性质可能影响过滤器产品的性质可能影响过滤器,因此验证应在有产品的时候进行因此验证应在有产品的时候进行.如果产品具有细如果产品具有细菌抑制作用或杀菌性菌抑制作用或杀菌性,应使用产品替代品进行试验应使用产品替代品进行试验,该替代介质不含产品有效成分该替代介质不含产品有效成分.可以将类似产品归可以将类似产品归类类,然后只对其中一个产品做试验然后只对其中一个产品做试验.过滤器完整性过滤器完整性试验的限度应来自过滤器验证数据试验的限度应来自过滤器验证数据.过滤器生产商过滤器生产商也应评估过滤器前

40、后允许的最大压差也应评估过滤器前后允许的最大压差,这应对照批这应对照批记录做检查确保在无菌过滤期间没有超过这个数记录做检查确保在无菌过滤期间没有超过这个数值值. 9.5.2 除了过滤器类型验证除了过滤器类型验证,每个日常生产中使每个日常生产中使用的单个产品过滤器的完整性也应在使用前后分用的单个产品过滤器的完整性也应在使用前后分别做试验别做试验.67过滤器的验证证明及过滤器生产工艺过滤器的验证证明及过滤器生产工艺 完整测试标准完整测试标准 起泡点及扩散流起泡点及扩散流 最大操作温度最大操作温度 最大操作压力最大操作压力 可以最多灭菌的次数次数，温度，时间可以最多灭菌的次数次数，温度，时间 确保其

41、过滤器符合法规要求确保其过滤器符合法规要求 无纤维脱落无纤维脱落 溶出物评估溶出物评估68滤器的选择与特征表现滤器的选择与特征表现 滤器的类型滤器的类型 滤器的组能滤器的组能 粒子脱落粒子脱落 可抽取物可抽取物 化学配伍性化学配伍性 吸附作用吸附作用 热压迫阻抗性热压迫阻抗性 水力压迫阻抗性水力压迫阻抗性 毒性试验毒性试验 物理完整性试验物理完整性试验69完整性试验完整性试验 完整性试验的理论完整性试验的理论 完整性试验结果与细菌滞留的关系完整性试验结果与细菌滞留的关系 制品制品-湿润的完整性试验湿润的完整性试验VS水水-湿润的完整性试验湿润的完整性试验 制品制品-湿润的起泡点（比值）湿润的起

42、泡点（比值） 制品制品-湿润的起泡点（统计方法）湿润的起泡点（统计方法） 制品制品-湿润的扩散性流动湿润的扩散性流动/前推流动试验规格前推流动试验规格 使用自动化完整性试验仪执行不需下游端操作的使用自动化完整性试验仪执行不需下游端操作的上游端试验上游端试验 一种减菌级滤器何时必须执行完整性试验一种减菌级滤器何时必须执行完整性试验 失败分析失败分析/寻找并解决问题寻找并解决问题7071非破坏性物理完整性试验非破坏性物理完整性试验 起泡点试验起泡点试验 扩散性流体扩散性流体/前推流体前推流体 压力保持压力保持/消退试验消退试验 自动化完整性试验仪器自动化完整性试验仪器 压力保持压力保持/消退与扩散

43、流体消退与扩散流体/前推流体之间的前推流体之间的关联性关联性72 滤孔大小的估测滤孔大小的估测 毒性与滤器可抽取物试验毒性与滤器可抽取物试验 对计算之制品对计算之制品-湿润的起泡点之统计调整湿润的起泡点之统计调整73四、无菌药品生四、无菌药品生产关键工艺的法规要求产关键工艺的法规要求74无菌药品的生产原则无菌药品的生产原则 为降低微生物、微粒和热原污染的风险，为降低微生物、微粒和热原污染的风险，无菌药品的生产应有各种特殊要求。这在无菌药品的生产应有各种特殊要求。这在很大程度上取决于生产人员的技能、所接很大程度上取决于生产人员的技能、所接受的培训及其工作态度。质量保证极为重受的培训及其工作态度。

44、质量保证极为重要，无菌药品的生产必须严格按照精心制要，无菌药品的生产必须严格按照精心制订并经验证的方法及规程进行。产品的无订并经验证的方法及规程进行。产品的无菌或其它质量特性绝不能仅依赖于任何形菌或其它质量特性绝不能仅依赖于任何形式的最终操作或成品检验。式的最终操作或成品检验。75注射剂的无菌保证要求注射剂的无菌保证要求 人员人员 厂房设施、设备管理厂房设施、设备管理 物料管理物料管理 生产管理生产管理 灭菌工艺及其验证灭菌工艺及其验证 无菌生产工艺无菌生产工艺 无菌检查无菌检查76厂房设施、设备管理厂房设施、设备管理 洁净度级别洁净度级别 ABCD级及响应的操作工序级及响应的操作工序 洁净区的控制洁净区的控制 无菌操作区与有菌操作区应分开无菌操作区与有菌操作区应分开 关键操作区的悬浮颗粒、微生物、气流方向和关键操作区的悬浮颗粒、微生物、