标准菌株使用标准操作规程

1、标准菌株使用标准操作规程标准菌株使用标准操作规程1检验目的对实验室的标准菌株进行合理的保存，并规范合理 的使用流程，保证菌株的性能稳定可靠。2范围微生物实验室保存的标准菌株。3职责微生物组工作人员正确执行本操作规程。4术语和定义4.1 标准菌株其特征进行了分类和描述，有明确的来源。ATCC(American Type Culture Collection )美国标准菌株 收藏中心。 4.2标准储备菌株标准菌株经过一代转接后获得的同种菌株。4.3 工作菌株标准储备菌株传代后得到的同种菌株。4.4 标准培养物标准菌株、标准储备菌株、工作菌株的统称。4.5 质控菌株ATCCg佳，但当无法获得时可以使

2、用 ATCC反化的菌株或我国国家菌种库储存的标准菌株。特殊情况，例如 定性试验可用已知的菌种作为质控菌株。室间质评的菌 株即可。5保存程序5.1 标准菌株5.1.1 商业购买的ATC砺准菌株干粉，-80 C低温保存, 可以2年以上。安甑真空包装的，-80 C可长期稳定保存。 将标准菌株进行编号和登记。5.1.2 复苏用1ml无菌的小牛血清或营养肉汤溶解。根据菌种的生 长特点，接种到新鲜培养基上选择适宜的培养条件培养 18-24h。酵母菌要求3天，形成抱子的微生物宜保存抱 子。5.2 标准储备菌株5.2.1 由复苏后的ATC砺准菌株制备。复苏后的标准菌 株要检查其纯度，必要时进行生化试验检查。刮

3、取培养 物上的菌体，用足量的菌悬浮于防冻培养基中。防冻液 可以是无菌脱纤维羊血、10旭油肉汤。储存足够量的标 准储备菌株，可用1-2年。一年52周需要52支以上。5.2.2 甘油肉汤保存法成分有蛋白月东、牛肉浸出粉、氯化钠、甘油、纯化木。 相当于20%勺甘油。挑取5环菌落加入到1ml甘油肉汤中 混匀。苛养菌可以适当增加菌量。-80 C保存。除链球菌 和嗜血杆菌以外细菌均可使用。保存期限 1-5年。5.2.3 全血保存法成分为脱纤维羊血。挑取5环菌落加入到1ml甘油肉汤 中混匀。苛养菌可以适当增加菌量。-80 C保存。主要用 于保存链球菌、嗜血杆菌及厌氧菌。保存期限 1-5年。 5.2.4标准储

4、备菌株进行编号和登记。5.3 工作标准菌株由标准储备菌株传代得到的菌株。标准储备菌株对 多向下传三代。过多的传种会增加变异的机会。标准储 备菌株根据菌种特点选择适宜的培养基和培养条件进行 培养18-24h即工作标准菌株。储存在2-8 C,可放四周。 个别营养要求高的为2周，例如肺炎链球菌和嗜血杆菌。 使用时应编号并登记。5.4 编号方法每个菌的保存管都要有唯一的编号，签字笔标注，便于 查找和管理。来源数字意义购买 的标 准菌 株1501ATCC2592215 年第 1 株 ATCC2592：储备 标准 菌株1501ATCC25922-3，由 1501ATCC2592装代 而来的3号标准储备菌

5、株5.5 记录管理5.5.1 菌种应有严格的登记。每个编号都要有详细的记录 包括来源、传代、保存方法、使用记录、使用原因、高 压灭菌记录等。附表标准菌株记录表标准储备菌株 记录表5.5.2 菌种保管应有专人负责，保存于专用冰箱中，双人 双锁，确保菌种安全。保管人员变动时，必须严格交接 手续。5.5.3 各种菌种应按规定时间接种，注意菌种有无污染及 变异，如发现变异时，应及时更换5.5.4 一个使用周期结束后，标准菌株、储备菌株、工作 菌株都要进行高压灭菌处理，并做好记录。6使用流程日质控周质控每周取出一支标准储备每月取出一支标准储备I；每周取出一支标准储备J储备1-iH-直接作为工作菌株使用，

6、第传代培养物可以作为第以后的6天 每天都用传 代培养物传也可以用最 后一天的的 工作菌株作7天后传代重新取一直 标准储备菌作为“储存标准菌株”进行每天传代平板作为第二2进行纯 度检查 和生化 鉴定。可以再重复一 周，规则同上。 但一般来说工7质量控制7.1 观察菌落的典型形态是否符合菌种。有没有杂菌生长。7.2 用氧化酶、触酶、上机等生化试验，鉴定菌种有没有 变化。7.3 如果有污染或怀疑有问题时，应准备新的首次传代物 或者获取新的标准菌株。8参考文献序 号唯一性编号文献名称9.1ISBN978-7-117-19862-2/R 19863全国临床检验操作规程第四 版9.2ISBN978-7-5478-1226-6/R - 395临床微生物学诊断与图解