夏桑菊颗粒分析方法确认方案

1、GMP文件 编号：T/YZK-AF-030-00技术标准/验证规程分析方法确认方案产品名称： 夏桑菊颗粒 验证类型： 确 认 部 门： 质量部 广明制药牛黄解毒片分析方法确认报告编号：T-YZK-AP-001-00 目 录1.概述2.确认目的3.适用范围4.确认小组成员与职责5.确认方案的起草与审批6.确认内容6.1确认相关文件材料检查6.2鉴别试验的确认 6.3含量测定的确认 7.偏差处理8.确认的结果与评价报告9.再验证周期10.参考文献 验证方案签字表：起草人审核人批准人起草时间审核时间批准时间1.概述夏桑菊颗粒收载于中国药典2015年版一部，鉴别（1）、鉴别（2）、鉴别（3）、指纹图谱

2、及迷迭香酸含量测定项下的检验方法已改变 ，为确保方法的准确性和可行性，为日常检测方法提供依据，因此按照2010新版GMP要求，需要进行分析方法确认。方法验证必须按照验证方案进行，此次验证方案包括：专属性、精密度、线性、范围、准确度，本确认方案使用薄层色谱法对鉴别检验方法进行确认，再使用高效液相色谱仪对含量测定的检验方法进行确认，证明此方法在本公司实验室的适用性。1.1确认方式 按中国药典2015年版一部修订版及2010年版药品GMP指南质量控制实验室与物料系统分析方法确认要求进行验证。2.确认目的  建立夏桑菊颗粒鉴别（1）、鉴别（2）、鉴别（3）、指纹图谱及迷迭香酸含量测定方法的确

3、认方案，在实验过程中严格按照中国药典2015年版一部操作步骤实行，确保试验结果真实可信，以确认夏桑菊颗粒按中国药典2015年版一部测定的方法是否适用于本实验室。3.适用范围   适用于本公司的鉴别（1）、鉴别（2）、鉴别（3）、指纹图谱及迷迭香酸含量测定项下的检验方法确认。4. 确认小组成员与职责部门及职务姓名确认工作中职责QC检验员执行确认方案；负责验证过程中相关的检验操作，收集整理数据，起草确认报告。QA监督员负责确认全过程的监控。质量保证部负责确认方案及确认报告的审核；审核确认过程中发生偏差的解决方案，以及采取纠正措施。QC主任负责起草确认方案，并组织实施确认工作，及

4、整理确认报告。质量负责人负责确认方案、报告的批准及确认过程中的协调工作5、人员培训情况序号1234参与人员是否已培训 是 否是 否是 否是 否培训情况合格 不合格合格 不合格合格 不合格合格 不合格确认人： 年 月 日复核人： 年 月 日6.确认内容6.1确认相关文件材料检查6.1.1对照品和样品：名称批号 来源 储存条件 迷迭香酸对照品 蒙花苷对照品夏枯草对照药材 野菊花对照药材 桑叶对照药材 夏桑菊颗粒 确认人确认人： 年 月 日复核人： 年 月 日 6.1.2确认前，对与此次确认相关的文件进行检查（见下表）文件名称文件编号是否现行文本检验方法验证（确认）管理规程 M/ZL-QC038-0

5、5 AE240型电子天平标准操作规程W/SOP-ZL-QC10-023-05AE240型电子天平维护保养及清洁标准操作规程W/SOP-ZL-QC11-023-05高效液相色谱仪标准操作规程W/SOP-ZL-QC10-022-05高效液相色谱仪维护保养及清洁标准操作规程W/SOP-ZL-QC11-022-05夏桑菊颗粒检验操作规程 W/SOP-ZL-06-C18-02 夏桑菊颗粒质量标准 T/ZLB-06-C18-02 确认确认人： 年 月 日确认人： 年 月 日 6.1.3试剂：无水乙醇 石油醚（30-60） 甲醇 环己烷 乙酸丁酯 异丙醇 甲酸 正己烷 三氯化铝 乙酸乙酯、均为分析纯。6.1

6、.4可接受标准：对照品、试液、试剂与试药符合验证要求且在效期内；所有文件都应为现行版本，且经过批准6.2.鉴别（1）的确认：6.2.1 专属性 6.2.1.1取本品10g，研细，加无水乙醇30ml，超声处理30分钟，过滤，滤液蒸干，残渣加无水乙醇2ml使溶解，作为供试品溶液。另取夏枯草对照药材0.5g,加水50ml，煎煮30分钟，过滤，滤液用石油醚（30-60）振摇提取2次，每次25ml，弃去石油醚液，水层蒸干，残渣加无水乙醇2ml使溶解，作对照药材溶液。再取迷迭香酸对照品，加甲醇制成每1ml含0.3mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法（通则0502）试验，吸取上述三种溶液各2-4l分别点

7、于同一硅胶G薄层板上，以环己烷-乙酸乙酯-异丙醇-甲酸（15：3:3.5:1）为展开剂，展开，取出，晾干，在紫外光（365nm）下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光主斑点；在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。6.2.1.2空白样品的制备：称取未加夏桑菊稠膏的供试品 0.2 g，加无水乙醇30ml，充分振摇溶解，作为空白样品溶液。同上述普通样品的制备的方法进行点板、展开剂显色。 6.2.1.3可接受标准：普通样品的色谱图中，主成分的斑点与其它干扰物的斑点均应完全分离，互不干扰；空白样品的色谱图中，应无其它干扰物的斑点影响。结果见下表。确认内容 标准要

8、求 检测结果 结果评价专属性 被测物的斑点应得到良好分离确认确认人： 年 月 日复核人： 年 月 日6.2.鉴别（2）的确认：6.2.2专属性 6.2.2.1取野菊花对照药材1g，加无水乙醇20ml，超声处理30分钟，过滤，滤液浓缩至2ml，作为对照药材溶液。另取蒙花苷对照品，加甲醇制成每1ml含0.1mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法操作规程试验，吸取（鉴别1）项下的供试品溶液及上述两种溶液各5ul，分别点于同一硅胶G薄层板上，以乙酸丁酯-甲酸-水（5:3:3:)5以下放置过夜的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以2%三氯化铝乙醇溶液，挥干，在紫外光（365nm）下检视。供试品色谱

9、中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光主斑点；在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。6.2.2.2空白样品的制备：称取未加夏桑菊稠膏的供试品约0.2g，加无水乙醇30ml，充分振摇溶解，作为空白样品溶液。同上述普通样品的制备的方法进行点板、展开剂显色。 6.2.2.3可接受标准：普通样品的色谱图中，主成分的斑点与其它干扰物的斑点均应完全分离，互不干扰；空白样品的色谱图中，应无其它干扰物的斑点影响。结果见下表。确认内容 标准要求 检测结果 结果评价专属性 被测物的斑点应得到良好分离确认确认人： 年 月 日复核人： 年 月 日6.2.鉴别（3）的确认：6.2.3专属性 6.

10、2.3.1取桑叶对照药材1g，加水100ml，煎煮1小时，滤过，滤液蒸至近干，残渣加无水乙醇10ml，超声处理10分钟，滤过滤液浓缩至2ml，作为对照药材溶液。照薄层色谱法操作规程试验，吸取（鉴别1）项下的供试品溶液及上述两种溶液各2ul，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正己烷-乙酸乙酯-甲酸（12:8:1:)为展开剂，在相对湿度60以下展开，取出，晾干，放置30分钟，在紫外光（365nm）下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光主斑点。 6.2.3.2空白样品的制备：称取未加夏桑菊稠膏的供试品 约 0.2 g，加无水乙醇30ml，充分振摇溶解，作为空白样品溶液。同上

11、述普通样品的制备的方法进行点板、展开剂显色。 6.2.3.3可接受标准：普通样品的色谱图中，主成分的斑点与其它干扰物的斑点均应完全分离，互不干扰；空白样品的色谱图中，应无其它干扰物的斑点影响。结果见下表。确认内容 标准要求 检测结果 结果评价专属性 被测物的斑点应得到良好分离确认确认人： 年 月 日复核人： 年 月 日6.3.指纹图谱 照高效液相色谱法操作规程测定。6.3.1色谱条件与系统适用性试验 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈为流动相A，以1%醋酸溶液为流动相B，按下表中的规定进行梯度洗脱；流速为每分钟0.9ml；柱温为35；检测波长为320nm。理论板数按迷迭香酸峰计算应不低于2

12、0 000。 时间（分钟） 流动相A（%）流动相B（%） 050 833 9267 5051 338 6792 5160 8 92 6.3.2参照物溶液的配制 取绿原酸对照品，迷迭香酸对照品和蒙花苷对照品适量，精密称定，分别加甲醇制成每1ml含绿原酸25ug迷迭香酸15ug和蒙花苷25ug的溶液，即得。6.3.3测定法 分别精密吸取参照物溶液和（含量测定）项下的供试品溶液各10ul，注入液相色谱仪，测定，记录60分钟色谱图，即得。6.3.4.结果判断：供试品指纹图谱中，应分别呈现与参照物色谱保留时间相应的色谱峰。按中药色谱指纹图谱相似度评价系统计算560分钟的色谱峰，供试品指纹图谱与对照指纹图

13、谱的相似度不得低于0.90。结果见下表检测项目标准要求测试结果结果评价备注指纹图谱的相似度相似度应大于0.90附图谱图确认确认人： 年 月 日复核人： 年 月 日6.4含量测定（迷迭香酸）6.4.1回收率试验1）色谱条件：色谱柱：C18柱；以乙腈：1%醋酸(19：:81)为流动相；检测波长为329nm。理论板数按迷迭香酸峰计算应不低于5000。2）对照品溶液的制备：取迷迭香酸对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含25ul的溶液，即得。3）供试品溶液的制备：取同一批已知含量的供试品，研细，共称取6份，每份称取样量为规定取样量的约50%（约0.62）g，精密称定，置具塞锥形瓶中。再分别精密加入

14、迷迭香酸对照品约3.0mg（直接加入），精密加入75%甲醇25ml，超声处理（功率500W，频率40kHz）30分钟，放冷，再称定重量，用75%甲醇补足减失的重量，摇匀，过滤，取续滤液，即得。4）测定法：分别吸取对照品溶液和供试品溶液各20ul,注入液相色谱仪，测定。试验结果见下表：5）可接受标准：将实测值与理论值比较，计算回收率。要求：各浓度下的平均回收率均为98.0%102.0%，6个回收率数据的相对标准差（RSD）应2.0。回收率 =检出率 样品含量×100%对照品取样量迷迭香酸回收率试验结果编号取样量（g）样品含量（mg）对照品加入量（mg）检出率（mg）回收率（%）平均回收

15、率（%） RSD（%）123456结果评价 确认确认人： 年 月 日复核人： 年 月 日6.4.2.重复性1）供试品的制备：取100%处方量的供试品取约1.25g，精密称定，置具塞锥形瓶中。精密加入75%甲醇25ml，超声处理（功率500W，频率40kHz）30分钟，放冷，再称定重量，用75%甲醇补足减失的重量，摇匀，过滤，取续滤液，即得。2）测定法：吸取供试品溶液10ul,注入液相色谱仪，按上述色谱条件中连续进样6次，测定其峰面积，计算其相对标准偏差。试验结果见下表。3）可接受标准：采用6次的测定结果进行评价，其相对标准偏差应不大于2.0%. 序号主份名峰面积平均值RSD%123456 迷迭

16、香酸 综合评价 确认确认人： 年 月 日复核人： 年 月 日6.4.3.稳定性试验 精密吸取同一供试品溶液，分别于0、1、3、7、13小时进样，按上述色谱条件测定。结果见下表 附图： 放置时间 迷迭香酸对照品平均峰面积RSD（%）0小时1小时3小时7小时13小时 结果评价 确认确认人： 年 月 日复核人： 年 月 日6.4.4专属性1）普通样品的制备：取重复性项下处理得的样品作为的供试品溶液。2）空白样品的制备：称取未加迷迭香酸的供试品约1g，按上述供试品的制备方法进行处理样品。3）测定法：按上述色谱条件进行测定，吸取普通样品和空白样品各20ul,各进样1次，注入液相色谱仪中，进行测定。试验结

17、果见下表。4）可接受标准：色谱图中，各主份应分离良好，空白样品无干扰。检测项目标准要求测试结果结果评价备注专属性色谱峰应分离良好，无干扰附图谱图确认确认人： 年 月 日复核人： 年 月 日6.4.5线性关系考察 分别精密量取迷迭香酸对照品 mg/ml甲醇溶液（1、2、3、4、5、6mL），分别加入75%甲醇制备成浓度为 、 、 、 、 、 ug/mL的对照品溶液。各精密吸取10uL注入液相色谱仪，记录色谱图，测定峰面积。以迷迭香酸对照品的浓度（ug/mL）为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准曲线。可接受标准：相关系数R 应大于0.999。结果见下表 附标准曲线表。 浓度（ug/mL）C峰面积A回归方程为A相关系数R结果评价 确认确认人： 年 月 日复核人： 年 月 日 7.偏差处理确认过程中应严格按照本确认