梅毒检测不同方法的比较

1、梅毒检测不同方法的比较         【摘要】  目的：对甲苯胺红不加热血清试验(TRUST)、酶联免疫吸附试验(TPELISA)检测方法的有效性进行综合分析，选择适合采供血机构筛查梅毒的方法。方法：用TRUST、TPELISA方法对献血者进行梅毒筛查，阳性标本用梅毒螺旋体明胶凝集试验(TPPA)方法确证。结果：TRUST方法灵敏度为39.02%，假阳性率为3.03%，漏检率为60.98%；ELISA方法灵敏度为98.73%，假阳性率为20.59%，漏检率为1.22%。结论：TRUST、ELISA两种试

2、剂作为献血员筛查梅毒的首选组合方案，更有利于血液质量安全。 【关键词】  梅毒；检测；TRUST；ELISA；TPPAComparison of the Different Methods Examing Treponema   Abstract： Objective To select the best screening method suiting for blood donors by assessing the validity of TRUST，ELISA and TPPAMethods TRUST and ELISA were used to scr

3、een patients with syphilis from blood donors，and TPPA was used to confirmed positive results detected by ELISA or TRUSTResults The sensitivity，false positive rate and false negative rate of TRUST were 39.02%，3.03%，and 60.98% respectivelyThe sensitivity，false positive rate and false negative rate of

4、ELISA were 98.73%，20.59% and 1.22%Conclusion The combination of TRUST and ELISA is the first choice to screen patients with syphilis from blood donors.Moreover this screening contributes to blood safety.   Key words: Treponema；Examing; TRUST；ELISA；TPPA   WHO认为全球输血不安全因素之一是传染性因子未有效

5、筛检，因此选用特异性强、灵敏度高的筛检方法和试剂对安全输血意义重大。梅毒是严重危害人类健康的疾病之一，当前我国梅毒流行呈逐年上升的趋势1，2，在一些高危人群中尤为严重。梅毒螺旋体侵入人体后，刺激机体产生针对螺旋体表面抗原的特异性抗体，而且还破坏机体组织产生抗磷脂的反应素即非特异性抗体。目前国内血站普遍采用快速血浆反应素环状卡片试验（RPR）3或甲苯胺红不加热血清试验（TRUST）筛查献血者非特异性抗体，由于其特异性和敏感性存在着相对差异，因而不能满足筛选献血者的需要1。而梅毒螺旋体抗原血清学试验如梅毒螺旋体血凝试验（TPHA）、梅毒螺旋体明胶凝集试验（TPPA）法等大多为确证试验。近年来，针对

6、梅毒螺旋体特异性抗体检测，建立了酶联免疫吸附试验（TPELISA）用于采供血机构对献血者血液的检测。为了比较TPELISA、TRUST检测试剂的敏感性和特异性，笔者同时采用上述两种试验方法筛查献血者血液，并对其中任一方法检测为阳性样本的血清再用TPPA方法进行鉴定。现将结果报告如下。1  材料与方法1.1  标本来源 选用在15 368例次无偿献血者筛查中产生的104例阳性标本以及由江苏省临床检验中心发放的室间质控血清。1.2  试剂 ELISA TpIgG试剂盒（北京吉比爱科技有限公司提供）；TRUST（上海荣盛生物技术有限公司提供）；TPP

7、A试剂盒（日本富士公司产品）。1.3  仪器 酶标仪和洗板机(Labsystems Dragon),梅毒旋转仪(厦门新创科技有限公司)。1.4  试验方法 同时采用TPELISA和TRUST两种方法对15 368例次无偿献血标本进行梅毒筛检,若TRUST或ELISA任何一种试剂检测为阳性,均用检出阳性的试剂三孔复试(一孔为原始样本,两孔为血袋样本),两孔以上阳性视为阳性,前提是原始样本须阳性或可疑,若两种试剂均为阳性则用TPELISA试剂三孔复试,共筛检出阳性标本104例。各项试验操作均按试剂说明书进行,复试阳性标本用TPPA试剂确证。2  结

8、果2.1  筛检结果 在104例筛检阳性标本中，TRUST纸板法检出阳性33例，ELISA检出阳性102例，TPPA确认阳性82例。以TPPA确认试验作为判断标准，其中TRUST纸板法只检测出32例阳性，ELISA检测出81例阳性，见表1、表2。从表1中可看出，与TPPA确认试验相比较，TRUST方法灵敏度为39.02%（32/82），假阳性率3.03%（1/33），漏检率60.98%（50/82）；而ELISA方法灵敏度为98.78%（81/82），假阳性率为20.59%（21/102），漏检率1.22%（1/82）。表1  104例阳性标本TPELISA、TR

9、UST、TPPA三种试剂检测结果分布（略）表2  三种试剂检测结果(略)2.2  用TRUST、TPPA、ELISA试剂分别对质控血清不同稀释倍数样本进行检出灵敏度测试（见表3） 从以上三种检测方法对不同稀释倍数的血清测定结果看，ELISA方法灵敏度明显高于TRUST法。表3  三种试剂对质控血清不同稀释倍数样本检测结果（略）3  讨论   梅毒螺旋体梅毒亚种引起的梅毒是重要的性传播疾病之一，主要是通过性接触传播，但也可经输血感染、胎儿垂直传播。因此检测梅毒螺旋体抗体是预防经输血传染性病的重要手段之一，无论对献血者和受血者来

10、说都是非常重要的。从本血库近几年来献血者梅毒筛查结果来看，献血人群中的梅毒阳性率呈逐年上升的趋势。梅毒的防治已成为十分重要的医学和社会问题。加强献血者梅毒筛查工作，选择特异性好，灵敏度高的筛查试剂，对确保临床安全输血具有重要的意义。            从以上结果中可看出，TRUST方法灵敏度仅有39.02%（32/82），与临床报道有差异46，表明临床患者与献血员两类人群血液中梅毒抗体浓度与性质存在不同，使用单一的RPR或TRUST类试剂筛查献血员不安全；而TRUST假阳性率为3.03%（1

11、/33），ELISA灵敏度为98.78%（81/82）与唐跃华等报道接近4。但ELISA方法假阳性率高达20.59%（21/102），高于相关报道，有待进一步探讨。从表1、表2中可看出，在全部82例确证阳性标本中，ELISA方法检出阳性81例，漏检1例，TRUST法检出阳性32例，漏检50例。所有漏检部分均被TRUST、ELISA方法相互检出，说明这两种试剂具有很强的互补性。这与试剂不同的抗原差异和灵敏度有关。   从表3不难看出，TRUST检出灵敏度最低，造成阳性漏检，说明该试剂质量有待提高，而TPPA检出灵敏度也低于ELISA方法，表明存在方法学灵敏度的差异符合有关报道

12、7。ELISA、TRUST、TPPA三种方法，ELISA试剂的灵敏度优于TPPA，特异性优于TRUST，三种方法中TRUST法的特异性最差8。三种方法在特异性、敏感性上有一定的差异，其原因主要是采用的抗原度方法不同。TRUST试验是测定血清中反应素的非特异性试验，采用非特异性类脂质抗原（心磷脂）检测抗心磷脂抗体，此类抗原的大部分可以与其他非特异性抗体有交叉反应，易受某些传染病及自身免疫性疾病等因素的影响，从而出现生物学假阳性911，同时由于此试验对期梅毒、期梅毒和治疗后梅毒检测的不同步性往往可出现假阴性，造成漏检10；而TPPA是测定血清中梅毒螺旋体的特异性抗体，采用稀释血清和吸附抗原的方法，

13、特异性较高，当然成本也相对较高，常作为梅毒确证试验；梅毒特异性抗体酶联免疫试剂作为新一代诊断试剂，采用高度纯化的重组梅毒螺旋体抗原，表达了梅毒螺旋体优势表位抗原连接后再进行克隆，表达的多表位嵌合抗原，避免了单片段抗原混合干扰，因此敏感性高，特异性强。   从表1中可看出，经TPPA确认的82份阳性标本中，有1份为TRUST方法检出，而ELISA方法未能检出，说明ELISA方法尚不能完全取代TRUST方法，而且TRUST方法快速、简便，因此，目前采用此法进行梅毒检测还是必要的。ELISA方法是近年来采用的检测梅毒特异性抗体的方法，其存在假阳性的问题（20.59%）,但灵敏度高

14、(98.78%)，且与TPPA鉴定试验吻合度较高12，因此采用此法进行血液的梅毒检测也是必要的，可行的。   综上所述，TRUST方法虽然易受人为因素影响，敏感性低，容易造成阳性漏检，但操作简便，出结果较快；TPELISA方法敏感性与特异性较之TRUST法均有所提高，有间接法，双抗原夹心法，适合大批量筛选。在TPPA确认的阳性标本中有31份标本是两种方法共同检出，其余标本或TRUST法阳性或ELISA法阳性。因此，笔者认为同时采用TRUST、ELISA两种方法组合筛查梅毒更有利于血液质量的保证，质量成本也更为经济。   血站本着对献血员负责的态度，如果TRUST法和ELISA法检出均为阳性的可直接告之献血者，如果