益母草总黄酮的提取及其对羟自由基的清除作用

1、益母草总黄酮的提取及其对羟自由基的清除作用【摘要】目的为充分利用益母草植物资源，幸免浪费，探讨益母草总黄酮的提取、辨别及对羟（0H）自由基的清除作用。方式采纳超声波乙醇浸提法从益母草中提取黄酮类物质，对所提取的黄酮类物质进行验证，并用分光光度法测定含量，用益母草总黄酮对羟自由基清除作用进行实验。结果测得样品中总黄酮的含量X=mL回收率为除其纯度和产率均较高。结论该方式采纳全物理进程，无任何污染，是提取益母草黄酮类物质的有效途径。益母草总黄酮提取液对Fenton体系产生的-0H自由基有专门好的清除作用。【关键词】超声波提取；益母草；植物提取物；黄酮类；辨别;羟自由基；清除Abstract:Obj

2、ectiveInordertomakefulluseoftheresourcesofLeonurusandavoidwasting,identifyingtheprocessofextractingtotalflavonefromLeonurusanditsdifferentiatingandtheeffectonscavengingofhydroxylradicals.MethodsTheflavoneswereextractedbyusingethanolasthesolventfromLeonuruswithultrasonicwaveandextractionspectrophotom

3、etrywasusedtoextractandchecktheflavonesofeffectofLeonurusonscavengingofhydroxylradicalswasstudied.ResultsThedensityofthetotalflavoneofLeonuruswasX=mlandtherateofrecoverywas%,whichhadahighlypurityandyieldrate.ConclusionThistestprovidestheextractionandpurifyingmethodstoobtainhighquantityandpurityofext

4、ractsfrommethodisapurelyphysicalprocessandhasnotanyisanidealwaytoextracttheflavonesofflavonefromleonurushaseffectsonscavengingofhydroxylradicals.Keywords:ultrasonicextraction；LeonurusL.；plantextracts；flavones；differentiation；hydroxylradical；scavenging益母草为唇形科植物益母草(LeonurusJaponicusHoutt.)的新鲜或干燥地上部份，原

5、名荒蔚。全草含生物碱、黄酮、酚类、氨基酸、有机酸、糖类；具有调经止血，爱惜心肌缺血再灌注损伤，抗血小板聚集，降低血液粘度等作用。在临床上可用来医治痛经、流产后出血、冠心病、心肌缺血、高粘血症、肾炎水肿、风湿关节疼痛等疾病，具有普遍的药理活性1L咱们曾采纳乙醇提取法对益母草总黄酮进行提取2,但该方式提取的效率仍然较低。最近几年来，随着超声技术应用于提取植物中的生物碱、甘类、生物活性物质、动物组织浆的毒质等的研究3,4,说明其具有能耗低、效率高、不破坏有效成份的特点。也可利用超声波产生的强烈振动、高的加速度、强烈的空化效应、搅拌作用等，加速植物材料中的有效成份进入溶剂，从而增加有效成份的提取率，缩

6、短提取时刻，而且还可幸免高温对提取成份的阻碍4。为此，现将咱们采纳超声波乙醇浸提法提取益母草总黄酮、辨别及提取物总黄酮对羟（-0H）自由基的清除作用的结果报告如下。1仪器与试剂仪器KQ5200DB型数控超声波清洗器（超声工作频率40kHz）昆山市超声仪器）；UV-755B紫外可见分光光度计（上海分析仪器总厂）；ZF-I型三用紫外分析仪（上海顾村光电仪器厂）；SHB-III循环水式多用真空泵（郑州长城科工贸）。试剂95%乙醇AR；亚硝酸钠AR；硝酸铝AR；氢氧化钠AR；三氯化铝AR；盐酸AR；氨水AR；冰醋酸AR；乙酸乙酯AR；乙酸镁AR；甲醇AR；镁粉AR；正丁醇AR；芦丁标准品（中国药品生物

7、制品检定所）；双氧水AR；硫酸亚铁AR；水杨酸AR；新鲜益母草（采自广西百色市）。2方式与结果总黄酮成份提取取新鲜益母草，烘干，粉碎。称取益母草粉末约6g,加80ml95%乙醇，超声波提取，抽滤。滤渣再加80nli95%乙醇，超声波提取，抽滤，归并两次滤液，减压回收乙醇至滤液仅剩25nli左右为止，放置250nli容量瓶中，用60%乙醇稀释至刻度，得样品液。测定方式依据以芦丁为对照品测定益母草中总黄酮的含量，加入铝离子试剂，同时操纵适宜pH值，使黄酮化合物与铝盐形成络合物，在可见光区能取得稳固的特点吸收峰。定量实验一总黄酮的含量测定波长的选择取样品液适量，在5%亚硝酸钠溶液存在的碱性条件下，经

8、硝酸铝显色后，以试剂为空白参比液在420700nm波长范围测定络合物的吸光度，络合物于510nm波优势有最大吸收，故测按时选用此波长。标准曲线的绘制别离周密吸取芦丁对照液(ml),于容量瓶中，别离加入5%亚硝酸钠溶液，摇匀，静置6min；再加10%硝酸铝溶液，摇匀，静置6min；再加4%氢氧化钠溶液，用60%乙醇稀释至刻度，摇匀，静置12min,以试剂作空白，于510nHi处测吸光度。吸光度测定结果见表1。表1紫外可见分光光度计测定吸光度（略）依照上表得回归方程：=+,L提取物含量的测定周密吸取样品液，置10ml容量瓶，按标准曲线的制备方式测定吸光度二，依照回归方程：二+,计算样品中总黄酮的含

9、量X=mlo回收实验周密量取样品液，加入标准芦丁对照品（ml）,同前样品测定方式操作测定吸光度，求出回收率为。定性实验一总黄酮的辨别颜色反映紫外光下呈色反映：取该样品溶液点在滤纸上，在可见光下呈灰黄色，在紫外光下呈灰褐色并有荧光斑点。浓氨水反映：取该样品溶液点在滤纸上，将滤纸在氨水上方熏，当即在紫外光下观看，呈极明显的黄褐色荧光斑点。三氯化铝反映：取样品溶液点在滤纸上，滴加1%三氯化铝乙醇溶液，吹干，在可见光下呈灰黄色,在紫外光下呈黄色荧光斑点。乙酸镁反映：取样品溶液点在滤纸上，滴加1%乙酸镁甲醇溶液，吹干，紫外光下呈黄色斑点。盐酸一镁粉反映：取乙醇提取液1ml于试管中加镁粉，再加入浓盐酸数滴

10、（1次加入），在泡沫处呈紫红色。纸层析取样品溶液10u1点在滤纸上。用正丁醇：醋酸：水二4：1：5（体积比）为展开剂，上行展开5h,掏出晾干。喷1%氯化铝乙醇溶液。吹干后于紫外光下，可见荧光斑点。总黄酮提取物对0H的清除作用参照Fenton反映的方式成立反映体系模型5,利用H202与Fe2+混合产生0H,但由于0H具有很高的反映活性，存活时刻短，假设在反映体系中加入水杨酸，就能够有效地捕捉-0H,并产生有色产物。反映式如下：H202+Fe2+fFe3+0H+0H-20H+COOHOH-C00H0H0H+H20（无色）（有色）该产物在510nm处有强吸收，假设在此反映体系中加入具有清除0H功能的

11、被测物，便会与水杨酸竞争0H,从而使有色产物生成量减少，采纳固定反映时刻法，在相同体积的反映体系LH2021nl1,9mmol/LFe2+lml,9mmol/L1ml水杨酸一乙醇溶液）加入一系列不同浓度的益母草总黄酮提取液，并以蒸储水为参比，与试剂空白液比较,在510nm处测量各浓度下的吸光度，便能测定被测物（总黄酮）对-0H的清除作用，其清除率计算公式：清除率（）=Y0-YxYOXlOO先以实验的提取液总黄酮作为样品，别离取不同体积的样品定容到10ml,别离测其对0H的清除作用。从图1中可看出，随着益母草总黄酮提取液对由Fenton体系产生的-0H有必然的清除作用，随着益母草总黄酮提取液浓度

12、的增加，对0H自由基的清除能力也增强，说明当黄酮类物质的浓度增加时，其清除率也增大。图1益母草总黄酮提取液浓度与自由基清除率的关系（略）3讨论实验结果说明，本实验方式工艺简单，回收率为,提取效率远高于乙醇提取法2,是乙醇提取法的倍。提取、纯化方式而取得的黄酮类物质其纯度较高。超声波能够强化乙醇浸提法，达到省时、高效、节能的目的，此方式采纳全物理进程，无任何污染，是一层次想的提取黄酮类物质的途径，具有广漠的应用前景。黄酮类化合物是一大类天然产物，普遍存在于植物界，是许多中草药的有效成份，具有很高的药用价值。在自然界中最多见的是黄酮和黄酮醇，其他包括双氢黄（醇）、异黄酮、双黄酮、黄烷醇、查尔酮、橙

13、酮、花色甘及新黄酮类等6o天然来源的生物黄酮分子量小，能被人体迅速吸收，能通过血脑屏障，能进入脂肪组织，进而表现出如下功能：排除疲劳、爱惜血管、防动脉硬化、扩张毛细血管、疏通微循环、抗脂肪氧化、抗衰老、活化大脑及其他脏器细胞的功能。黄酮类化合物具有抗肿瘤、抗心脑血管疾病、消炎镇痛、免疫调剂、降血糖、医治骨质疏松、抑菌抗病毒、抗氧化、抗衰老、抗辐射等作用2,7o最近几年来，世界上掀起了植物药开发的热潮,植物药以其天然低毒的特点倍受青睐，而黄酮类化合物以其广谱的药理作用引人注视，益母草散布普遍，木组实验结果说明，益母草中含有较为丰硕的黄酮，其提取物总黄酮对羟自由基具有专门好的清除作用。因此，益母草具有普遍开发和利用价值，值得综合利用，增强资源开发。【参考文献】1阮金兰，杜俊蓉，曾庆忠，等.益母草的化学、药理和临床研究进展和.中草药，2003,34(11)：15-19.2黄锁义，黎海妮，余美料，等.益母草总黄酮的提取及辨别J.时珍国医国药，2005,16(5):398-399.3刘祥义.超声波提取元宝枫叶总黄酮方式研究J.云南化工，2003,30(1)：27-28.4谢明杰，宋明，邹翠