水套式二氧化碳细胞培养箱使用标准操作流程

1、文件等级：内部公开文件文件编号：AJ-XZ-150701Thermo Forma3111/3131水套式细胞培养箱使用标准操作流程1. 目的规范使用本公司水套式CO2细胞培养箱Thermo Forma3111及水套式CO2、N2细胞培养箱Thermo Forma3131（除特殊注明外，以下简称细胞培养箱）操作流程，确保本公司细胞技术员正确使用细胞培养箱。2. 范围和职责仪器使用操作人员应遵循本程序操作及使用规范，适用于使用本公司细胞培养箱的所有工作人员。3. 仪器设备及试剂Thermo Forma3111水套式CO2细胞培养箱Thermo Forma3131水套式CO2、N2细胞培养箱CO2减

2、压阀（上海减压器厂、YQT-731）N2减压阀（上海减压器厂、YQD-3）75%酒精84消毒液CO2及N2温度计4. CO2培养箱安装及调试4.1根据量程购买合适的CO2及N2减压阀，细胞培养箱位置摆放：应遵循方便使用原理，不得靠近细胞室出入口摆放，应摆放于本公司细胞室相对于更加洁净的区域，且必须注意CO2及N2钢瓶位置、培养箱开门方向和倒置显微镜位置，方便查看细胞状态及换气；4.2 CO2/氮钢瓶摆放：应遵循钢瓶容易更换，导气管长度合适原理；4.3 水套式细胞培养箱在使用前必须对箱体进行超纯水加注，将随机提供的橡胶管连接超纯水仪和细胞培养箱体左上侧加水口，打开超纯水仪阀门，缓慢给水箱加水，最

3、好能先进行超纯水灭菌处理，以超纯水刚好从最高水位线水溢出为止；4.4细胞室进行第一遍消毒或熏蒸后，紫外照射30分钟以上；4.5培养箱灭菌：本公司细胞培养箱不能进行自动除菌，必须进行手动除菌，箱体内隔板可以进行拆除单独清洗及高温高压灭菌，不能拆除的部件先用75%酒精擦拭一遍，自然晾干，然后用0.15%84消毒液再次擦拭，自然晾干，最后用75%酒精再擦拭最后一遍，敞开培养箱过夜，细胞室进行第二次灭菌操作；4.6第二天灭菌进入细胞室后，关上舱门，用导气管一端接入细胞培养箱进气口，一端连接CO2/N2减压阀，再通过减压阀上面的螺纹用扳手将减压阀连接到钢瓶上，旋紧至不漏气为止；4.7培养箱校准（以The

4、rmo Forma 3111CO2培养箱为例）：打开细胞培养箱电源，放入一支经过消毒处理后的温度计，启动自检程序，待程序稳定后，进入以下设置；4.7.1按 Mode 键使光标移至 Cal模式,，此时显示屏显示“Cal CALIBRATE”， 按  键使显示屏显示“TEMPCAL  XX.X”, 按动和键调整数字（即温度计读数），并按动Enter键加以保存，按动 Mode 键使光标移至 Run 模式退出设置。注意：一般情况下，细胞培养箱的起始温度不需要校准，若起始温度与温度计显

5、示温度不符时才需要进行起始温度校准。4.7.2 按 Mode 键使光标移至 Set 模式, 此时显示屏显示“SET POINTS”, 按  键使显示屏显示“TEMP  XX.X”, 再按 和 键直至显示“TEMP 37.0”后按“ENTER”键确认，按动 Mode 键使光标移至 Run 模式退出设置。 此时 Heat灯（即加热灯）会亮,  箱内温度会慢慢升高至37。注意：若环境温度低，升

6、温至37是一个比较漫长的过程，且必须要等温度升至37才能设置起始CO2浓度。4.7.3按 Mode 键使光标移至 Cal模式，此时显示屏显示“Cal CALIBRATE”，按动和键使显示屏显示“CO2 CAL   XX.X”，按动和键直至CO2 CAL 0%，并按动Enter键加以保存，按动 Mode 键使光标移至 Run 模式退出设置。4.7.4 按 Mode 键使光标移至Set模式，  此时显示屏显示“SET  POINT

7、S”，按动和键使显示屏显示“TEMP   XX.X ”，设置温度，按动和键可以选择所需的数字（一般细胞培养用温度为37），并按动Enter键加以保存。按动和键使显示屏显示“OTEMP  XX.X ”，设置超温报警温度，比设定高0.5-1即可，并按动Enter键加以保存。按动和键使显示屏显示“CO2  XX.X %”设定CO2浓度（细胞培养用CO2浓度一般为5%），并按动Enter键加以保存，按动 Mode 键使光标移至 Run 模式退出设置。4.7.5待温度达到设定值后。将CO2钢瓶开

8、启，开启前应先关闭减压阀，防止减压阀输出压力过高导致输气橡皮管暴裂，减压阀上进气压力表指示钢瓶内CO2压力，然后缓慢地顺时针拧减压阀旋扭。使减压阀输出压力指示为0.05Mpa左右，指针处于刻度线中间。待温度和CO2浓度达到设定值后，放入水盘，使湿度符合要求。4.7.6 待一切准备就绪即可进行细胞培养，可先用一两株细胞试用培养箱，确定无菌后即可进行大规模培养。5. 仪器操作及故障报警显示说明5.1.1-Mode为模式键，按动Mode键，光标会在Run、Set、Cal、Config四种模式中移动。5.1.2Run模式：Run为运行模式：正常运行时显示“CLASS  100”或者

9、“SYSTEM  OK”，有故障时会显示各种报警信息。5.1.3Set模式：“SET  POINTS”为设定模式，按动和键可以选择里面的设定功能，按动和键可以选择所需的数字，并按动Enter键加以保存。（1）TEMP   XX.X 为设定温度功能； （2）OTEMP  XX.X 为设定超温报警功能，比设定温度高0.5-1即可；（3）CO2  XX.X %为设定CO2浓度功能。5.1.4Cal模式：“Cal CALIBRATE”为校准模式，按动和键可以选择里面的设定功能，按动和键可以选择

10、所需的数字，并按动Enter键加以保存。（1）TEMPCAL   XX.X为校准温度功能；（2）CO2 CAL   XX.X为CO2浓度调零功能5.1.5Config模式：“SYS  CONFIG”为系统配置模式，按动和键可以选择里面的设定功能，按动和键可以选择所需的数字，并按动Enter键加以保存。（1）AUDIBLE  ON/OFF 为声响报警功能（按动和键可以选择开启/关闭）；（2）NEW  HEPA  XXX 为更换HEPA过滤

11、器的剩余天数功能（按动Enter键重新安排天数 ）；（3）REPL  HEPA  XX  为设定更换HEPA过滤器的剩余月数功能（最高月数为12）（4）ACC CODE XXX为设定操作锁定模式功能，000为取消密码锁定；（5）TEMP LO XX.X为设定温度的低限报警功能；（6）TEMP  HI   XX.X为设定温度的高限报警功能；（7）TMP  RLY  ON/OFF为附加装置功能，与标准配置无关；（8）CO

12、2  LO  X.X  % 为设定CO2浓度的低限报警功能；（9）CO2  HI   X.X  % 为设定CO2浓度的高限报警功能；（10）CO2  RLY  ON/OFF为附加装置功能，与标准配置无关；（11）T/C  ZR#  -XXXX为确认新CO2热导探头功能，此为ZERO数字确认；（12）T/C  SP#  -XXXX

13、为确认新CO2热导探头功能，此为SPAN数字确认；（13）RS   485  XX  为附加装置功能，与标准配置无关。5.1.6 -加热和CO2进气显示：（1）Temp显示屏为温度显示。（2）Heat为加热灯，灯亮表示正在加热，灯灭表示停止加热。（3）% CO2显示屏为CO2浓度显示。（4）Inject为CO2进气灯，灯亮表示正在进气，灯灭表示停止进气。5.1.7 故障报警显示：Silence键功能为故障报警消声，报警时有红灯闪烁，同时有嘀嘀声响，按动此键可以将报警声音暂停，如果故障在15分钟内

14、不能解决，报警声响会再次响起：（1）SYS  IN  OTEMP 为超温报警，即时报警； （2）CO2  SNSR  ERR 为CO2探头故障，即时报警；（3）REPLACE  HEPA   为更换HEPA过滤器，即时报警；（4）ADD  WATER为缺水报警，即时报警； （5）DOOR  OPEN 为玻璃内门报警，延时15分钟报警； （6）CO2 

15、0;IS  HIGH  为CO2浓度的高限报警，延时15分钟报警；（7）CO2  IS  LOW为CO2浓度的低限报警，延时15分钟报警； （8）TEMP  IS  HIGH  为温度的高限报警，延时15分钟报警；（9）TEMP  IS  LOW为温度的低限报警，延时15分钟报警。6. 操作步骤1、 进入细胞室前必须进行衣服更换，穿上白大褂，换好拖鞋或鞋套，进入细胞室后即戴上无粉乳胶手套，用75%酒精对手套

16、进行消毒处理。2、 细胞培养箱的门分为外门和玻璃内门，外门采用的是密封条技术，内门是玻璃门，有门卡卡住。 开启箱门前，请先对箱体外门位置喷洒75%酒精，然后一手抓住外门的边，一手内门外延，然后稍微用力即可打开外门，切勿用力过猛，打开最大角度为90°。随后向上旋转门卡即可打开玻璃内门，双手将细胞培养瓶（皿）端出，将细胞培养瓶（皿）放在超净工作台上，随后关闭箱门。然后将细胞放在在倒置显微镜上观察细胞状态，以确定是否进行传代等操作。3、 日常维护：从培养箱取放物品前，用酒精清洁双手（或手套），尽量缩短开门时间和减少开门次数。 经常检查水套水位，假如水位低就要进行超纯水加

17、注；-培养箱中的空气是经过过滤的洁净空气。长时间敞开或频繁开关培养箱，容易造成污染。 定期检查二氧化碳钢瓶气体气压情况，在即将用完前进行换气操作；HEPA过滤器一般使用时间一般为半年，可手动调节到12个月，到期后，细胞培养箱显示屏会显示“REPLACE  HEPA ”，此时必须更换HEPA过滤器。培养箱需要每隔一段时间（一般为三个月或半年）进行一次箱体除菌和校正CO2浓度及温度，每次开关培养箱电源后必须进行CO2浓度及温度的重新校正。培养瓶皿放入培养箱前，用酒精消毒表面，并稍等至酒精挥发后再放入，以免培养箱内滞留过多乙醇蒸气。用肥皂、清水和实验室常使用的消毒剂来清洗增湿盘。用蒸馏和浓度为70的酒精冲洗增湿盘。增湿盘可进行高压灭菌。频繁将细胞拿出观察，容易给培养箱造成污染，同时也会影响细胞生长条件的恒定。 一旦发现培养箱出现报警或其他异常情况，请及时按照操作说明进行处理