重编程表观遗传学诱导多能干细胞DNA甲基化论文

1、小鼠三种胚胎干细胞表观相关基因的分析【摘要】 细胞核的重编程可以通过将体细胞的细胞核移入卵母细胞,将体细胞和胚胎干细胞进行融合,以及向体细胞中转入几个转录因子例如Oct4, Sox2, C-myc, Klf4和Nanog的方法实现,然而细胞核的重编程需要经历复杂的过程,其中最为重要的就是细胞核所发生的表观遗传学变化,本文主要综诉了细胞核重编程的研究概况,产生干细胞的四种不同的方法和现代表观遗传学中干细胞的表观遗传学特性以及体细胞的表观遗传学变化。我们从培养ES细胞着手,通过一年的摸索初步建立了小鼠胚胎成纤维细胞的体外培养平台,并在此基础上利用小鼠胚胎成纤维细胞经过丝裂霉素c处理的方法建立了合格

2、的胚胎细胞滋养层。同时综合国内外文献,采用对小鼠注射激素,超数排卵,冲取3.5天的受精卵,接种于小鼠胚胎成纤维细胞制作的滋养层细胞上,在体外培养下使受精卵正常发育,并孵化,进而使受精卵在体外贴壁,等内细胞团长大时用机械的方法挑取内细胞团,从而建立了三株小鼠的胚胎干细胞系,经过分子水平的鉴定,基本确定细胞系的成功。基于胚胎细胞完整的培养体系,我们成功培养了ES细胞系,核移植胚胎干细胞系,IPS细胞系各两株,在实验室培养扩大后分别提取了各个细胞系. 更多还原【Abstract】 Somatic cells can be reprogrammed through transferring

3、nuclear contents of somatic cell into oocytes, or by fusion with embryonic cells, or inserting several transcription factors (Oct4, Sox2, C-myc, Klf4 and Nanog) into somatic cell genome. This is a complex progress in which the most important is the epigenetic changs of the cell nucleus Here we discu

4、ssed the recnt advance in the reprogramming of cell nucleolus, four different approach to generate embritic stem cells, the eptgenetic characteri. 更多还原 【关键词】 重编程； 表观遗传学； 诱导多能干细胞； DNA甲基化； 【Key words】 Reprogramming； Epigenetics； Ips(induced pluripotent stem cells)； DNA Methylation； 摘要 5-7 Abstrac

5、t 7-8 1 引言 9-29 1.1 细胞重编程研究进展 9-23 重编程研究概论 9-11 产生干细胞的方法 11-23 1.2 表观遗传学研究概论 23-28 干细胞的表观遗传特性 23-27 体细胞的表观重编程 27-28 1.3 本研究的目标和主要内容 28-29 2 材料与方法 29-49 2.1 小鼠胚胎成纤维细胞的分离培养和滋养层的准备 29-35 2.2 小鼠胚胎干细胞的体外分离和鉴定 35-41 2.3 表观相关基因的分析 41-49 3 结果和讨论 49-63 3.1 小鼠胚胎成纤维细胞的分离和滋养层的制备 49-50 3.2 小鼠胚胎细胞的建立 50-55 3.3 所建细胞系的分子水平鉴定 55-57 3.4 细胞系的复苏培养 57-5