体外诊断试剂生产质量控制要点

1、体外诊断试剂生产和质量控制要点体外诊断试剂生产和质量控制要点主讲人主讲人:顾燕黎顾燕黎 上海科华生物工程股份有限公司上海科华生物工程股份有限公司体外诊断试剂产品介绍一酶联免疫诊断试剂产品l乙型肝炎病毒表面抗原诊断试剂盒（酶联免疫法）二快速诊断试剂产品l人类免疫缺陷病毒抗体检测试剂盒（胶体金法）三PCR核酸诊断试剂产品l乙型肝炎病毒核酸定量检测试剂盒（PCR-荧光探针法）四临床化学诊断试剂产品l葡萄糖试剂盒（液体单试剂）（氧化酶法）一.酶联免疫诊断试剂产品【产品名称】【产品名称】 乙型肝炎病毒表面抗原诊断试剂盒（酶联免疫法）乙型肝炎病毒表面抗原诊断试剂盒（酶联免疫法）【包装规格】【包装规格】 9

2、6人份人份/盒盒【预期用途】【预期用途】 本试剂盒采用酶联免疫法原理检测本试剂盒采用酶联免疫法原理检测HBsAg，适用于血清或，适用于血清或血浆类标本血浆类标本。酶联免疫法反应原理l双抗体夹心法l双抗原夹心法标本抗-HBs抗-HBs-HRPHBsAg乙型肝炎病毒表面抗原诊断试剂盒（酶乙型肝炎病毒表面抗原诊断试剂盒（酶联免疫法）联免疫法）的原理采用抗-HBs包被反应板，加入待测样本，经孵育后，加入抗-HBs-HRP，当样本中存在HBsAg时，该HBsAg与包被抗-HBs结合并与抗-HBs-HRP结合形成抗-HBs-HBsAg-抗-HBs-HRP复合物，加入TMB底物产生显色反应，反之则无显色反应

3、。试剂盒组份试剂盒组份 1. 微孔反应板微孔反应板 2. 酶结合物酶结合物 3. 阳性对照阳性对照 4. 阴性对照阴性对照 5. 洗涤液洗涤液 6. 显色剂显色剂A 7. 显色剂显色剂B 8. 终止液终止液 9. 封片封片 10. 说明书说明书主要生产设备微孔反应板包被机微孔反应板包被机微孔反应板全自动封闭生产线微孔反应板全自动封闭生产线灌封流水线灌封流水线超声波洗瓶机超声波洗瓶机全自动进口分装机全自动进口分装机生物安全柜生物安全柜酶标仪酶标仪横枕式包装机横枕式包装机生产工艺流程图生产工艺流程图合并分装纯化包被结酶纯化配制配制配制抗-HBs血清酶标用抗-HBs抗-HBs-HRP酶结合物反应板包

4、板用单抗-HBs单抗-HBs腹水正常人血清、阳性血阴、阳性对照显色剂、终止液、洗涤液TMB、硫酸、吐温20成品半成品滴配半成品检定成品检定外购原辅料控制外购原辅料控制l原辅料必须从合格供应商目录所载厂家购入。l采购的生产用原辅料，均应符合药品的标准、包装材料标准、生物制品规程或其它标准，不得对产品的质量产生不良影响。 自制主要原料生产和质量控制要点自制主要原料生产和质量控制要点l 工艺用水l 抗原l 抗体l 酶标记物基因工程基因工程HBsAg生产和质量控制要点生产和质量控制要点生产工序质量控制要点细胞培养基因工程细胞株，经接种复苏后，进行细胞传代培养。无菌操作，培养基的配制，细胞培养温度，细胞

5、的形态及传代速度。纯化收集的细胞培养上清液经抗-HBs 亲和层析柱等纯化。层析柱填料的使用次数， 所用缓冲液的pH值， 上样、平衡、洗脱速度。基因工程基因工程HBsAg质量标准质量标准l效价：效价： ELISAl纯度：采用纯度：采用SDS-PAGEl功能性实验功能性实验 ：阴性对照、阳性对照、阴性参考：阴性对照、阳性对照、阴性参考品符合率、最低检出量、精密性、稳定性品符合率、最低检出量、精密性、稳定性l蛋白浓度：用双缩脲法测定蛋白浓度：用双缩脲法测定单抗单抗-HBs生产和质量控制要点生产和质量控制要点生产工序质量控制要点细胞复苏及传代培养单克隆抗体细胞株，经接种复苏后，进行细胞传代培养。无菌操

6、作，培养基的配制，细胞培养温度。腹水制备福氏不完全佐剂免疫，7-10天后单克隆抗体细胞悬液注射于F1代小鼠 ，10天后采集小鼠腹水，离心，制得单抗-HBs腹水。对数生长期细胞接种。腹水纯化用制备的单抗-HBs腹水，经饱和硫酸铵二步沉淀，经离子交换层析柱纯化即为单抗-HBs。层析填料的使用次数， 所用缓冲液的pH值， 上样、平衡、洗脱速度。纯化的得率。单抗单抗-HBs质量标准质量标准l纯度纯度 ：采用：采用SDS-PAGE法法l蛋白含量蛋白含量 ：采用：采用Lowry法法l效价效价 ：ELISA效价效价l功能性检测：免疫活性、稳定性功能性检测：免疫活性、稳定性多抗多抗-HBs生产和质量控制要点生

7、产和质量控制要点生产工序质量控制要点抗血清制备用福氏佐剂和纯化HBsAg抗原 制成乳化胶乳剂注射实验动物 ，经多次免疫后，采集动物血清。动物的选择，乳剂配制的均一性。纯化 抗血清，经亲和层析柱粗提后，正常人全血清等多种亲和层析柱等纯化制得。亲和柱的制备及使用次数，所用缓冲液的pH等的控制， 纯化的收率。多抗多抗-HBs的质量标准的质量标准l纯度纯度 ：SDS-PAGE法检定法检定l蛋白含量蛋白含量 ：Lowry法法l效价效价 ：对流电泳法测定效价：对流电泳法测定效价l功能性检测：免疫活性、稳定性功能性检测：免疫活性、稳定性多抗多抗-HBs-HRP生产和质量控制要点生产和质量控制要点生产工序质量

8、控制要点酶的活化 HRP与 NaIO4反应，再加入乙二醇制成活化的酶溶液。 辣根过氧化物酶RZ值3.0 及活化时间的控制酶的偶联 酶溶液液加入抗-HBs抗体pH,温度及时间的控制还原酶反应液加入NaBH4溶液还原。还原时间的控制纯化 饱和硫酸铵纯化纯度控制辣根过氧化物酶质量标准辣根过氧化物酶质量标准l溶解性 ：应符合要求lPH值 ：应符合要求l活性测定 ：应符合要求lRZ值：应3.0 多抗-HBs-HRP质量标准l免疫活性l稳定性试验生产工序生产工序生产要点生产要点质量控制点质量控制点反应板制备反应板制备1包被液的配制包被液的配制pH值的控制值的控制2*反应板的包被反应板的包被包被液量的准确性

9、，反应板包被放置包被液量的准确性，反应板包被放置的温度、湿度及时间的控制的温度、湿度及时间的控制3反应板的洗涤、反应板的洗涤、加封闭液加封闭液液量的准确性液量的准确性4*反应板的封闭反应板的封闭房间温度的控制，封闭时间的控制房间温度的控制，封闭时间的控制5反应板的抽干反应板的抽干抽干机的真空度、温度抽干机的真空度、温度6*铝箔袋的热封铝箔袋的热封房间的湿度控制，铝箔袋的密封性房间的湿度控制，铝箔袋的密封性7*反应板的抽检反应板的抽检应符合相关质量要求应符合相关质量要求反应板制备生产和质量控制要点反应板制备反应板制备包被液配制包被液配制l质量控制点：包被缓冲液pH l测定方法：用pH计测定反应板

10、制备反应板制备反应板的包被反应板的包被l质量控制点：包被液量的准确性 要求：100l/孔 l操作： 将待包被的微孔反应板放置传送带上，开始包被，每块包被板应用目测法检查其96孔加液是否完整。前10块包被板检查加液量是否准确，检后的包被板放入报废专用盘内，作报废处理。 连续100块包被板检查合格后，进入正常包被过程。正常包被过程中每100块包被板应抽1块作过程检查。反应板制备反应板制备反应板的包被反应板的包被l质量控制点： 反应板包被放置的温度及时间的控制 要求： 2-8冷库包被过夜。 l操作：包被板应堆放整齐，并用一次性塑料布覆盖。注明产品名称、批号和时间，放入2-8冷库包被过夜。反应板制备反

11、应板制备反应板的洗涤、加封闭液反应板的洗涤、加封闭液l质量控制点：液量的准确性 要求: 洗板液量：200l/孔 封闭液量：250l/孔 反应板制备反应板制备反应板的封闭反应板的封闭l质量控制点： 封闭温度：370.5 封闭时间：2小时 l操作：将加好封闭液的包被板整齐堆放在托盘内，注明批号、封闭开始时间和结束时间，放入恒温房。到达规定时间后，迅速取出包被板，转入下一道工序的生产。 反应板制备反应板制备反应板的抽干反应板的抽干l质量控制点：抽干机的真空度、温度 要求： 真空度：低于100Pa，维持4小时以上 温度：202 反应板制备反应板制备铝箔袋的热封铝箔袋的热封l质量控制点： 房间的湿度：4

12、0% 铝箔袋的密封性： 端面刀封温度2105 中封刀封温度2105 l操作： 房间湿度控制：生产操作前提前2小时，打开去湿机进行工作场地去湿，使车间湿度达到40%以下。 铝箔袋的密封性：在线袋袋检。反应板制备反应板制备 反应板的抽检反应板的抽检质量标准：阴性参考品符合率：用国家参考品或国家参考品标化的参考品进行检定，不得出现假阳性。阳性参考品符合率：用国家参考品或国家参考品标化的参考品进行检定，不得出现假阴性。 最低检出量：用国家参考品或国家参考品标化的参考品进行检定， HBsAg adr、adw及ay亚型的最低检出量应符合要求。 精密性：用国家参考品或国家参考品标化的参考品进行检定，CV（%

13、）应不高于15%（n=10）。生产工序生产工序生产要点生产要点质量控制点质量控制点阴、阳性对照的配阴、阳性对照的配制制1阴性血清的灭活阴性血清的灭活灭活的时间，温度灭活的时间，温度2*阴性对照的配制阴性对照的配制检测阴性检测阴性OD值值3阳性血清的灭活阳性血清的灭活灭活的时间，温度灭活的时间，温度4*阳性对照的配制阳性对照的配制检测阳性检测阳性OD值值阴、阳性对照制备的生产和质量控制要点阴、阳性对照制备的生产和质量控制要点阴、阳性血清的灭活阴、阳性血清的灭活l要求：要求： 灭活时间：灭活时间：1小时小时 温度：温度：60l操作：将操作：将血清置水浴箱内。随时注意测量血清血清置水浴箱内。随时注意

14、测量血清温度，当血清温度到达温度，当血清温度到达60时，开始计时至规时，开始计时至规定时间止。定时间止。 阴、阳性对照的配制控制阴、阳性对照的配制控制阴性对照的配制阴性对照的配制l质控点：阴性对照OD值l要求：OD值0.050 阳性对照的配制阳性对照的配制l质控点：阳性对照OD值l要求：OD值1.000 通用试剂制备的生产和质量控制要点通用试剂制备的生产和质量控制要点生产工序生产工序生产关键点生产关键点质量控制点质量控制点显色剂、终止液、显色剂、终止液、洗涤液等通用试洗涤液等通用试剂的制备剂的制备1显色剂显色剂B的配的配制制避光配制、分装避光配制、分装溶液配制的溶液配制的pH、电导的控制、电导

15、的控制配制后配制后12小时内进行分装小时内进行分装2显色剂显色剂A的配的配制制72小时内进行分装小时内进行分装溶液配制的溶液配制的pH、电导的控制、电导的控制3终止液的配制终止液的配制比重控制比重控制 4洗涤液的配制洗涤液的配制pH、电导的控制、电导的控制显色剂显色剂B的配制的配制l质量控制点：质量控制点： 1 溶液配制的准确性溶液配制的准确性 用用pH计测定溶液计测定溶液pH值应符合要求值应符合要求 用电导率仪测定溶液电导率应符合要求用电导率仪测定溶液电导率应符合要求 2 配制、分装环境：避光配制、分装环境：避光 3 配制后溶液分装的即时性：配制后溶液分装的即时性：12小时内进行分装小时内进

16、行分装显色剂显色剂A的配制的配制l质量控制点：质量控制点： 1溶液配制的准确性溶液配制的准确性 用用pH计测定溶液计测定溶液pH值值 用电导率仪测定溶液电导率用电导率仪测定溶液电导率 2配制后溶液存放：配制后溶液存放：72小时内进行分装小时内进行分装终止液的配制终止液的配制l质量控制点：质量控制点： 溶液配制的准确性：溶液配制的准确性： 用婆美计测定溶液的比重应符合要求用婆美计测定溶液的比重应符合要求 洗涤洗涤液的配制液的配制l质量控制点：质量控制点： 溶液配制的准确性溶液配制的准确性 用用pH计测定溶液计测定溶液pH值值 用电导率仪测定溶液电导率用电导率仪测定溶液电导率 酶结合物制备酶结合物

17、制备生产和质量控制要点生产和质量控制要点生产工序生产工序生产关键点生产关键点质量控制点质量控制点酶结合物的制酶结合物的制备、滴配备、滴配1酶稀释液的配酶稀释液的配制制pH的控制的控制2*酶结合物的滴酶结合物的滴配配通过比较阳性参考品、通过比较阳性参考品、阴性参考品、精密性以阴性参考品、精密性以及最低检出率情况，用及最低检出率情况，用方阵滴定法进行方阵滴定法进行EIA法法测定确定酶结合物的浓测定确定酶结合物的浓度度半成品检定质量标准半成品检定质量标准l物理检查 l试剂空白l阴性对照l阳性对照 l阴性参考品符合率l阳性参考品符合率l最低检出量l精密性l稳定性实验 :试剂的分装、贴签生产和质量控制要

18、点试剂的分装、贴签生产和质量控制要点除菌过滤除菌过滤l质量控制点：过滤膜的起泡点实验l要求：滤器灭菌12130分钟；0.22m滤芯泡点3.5bar 分装分装l质量控制点：液量的准确性、试剂瓶的密封性 要求： 分装液量应大于等于标示量 ； 分装好的试剂瓶应无漏液现象。 贴签贴签l质量控制点：批号打印的准确性 要求：批号等打印正确、清晰l操作： 贴瓶开始后，前30瓶应仔细检查瓶贴质量，包括瓶贴位置，批号等打印是否正确、清晰，粘贴是否牢固、平整等。 合格后，每50瓶抽1瓶进行检查。 合并包装合并包装生产和质量控制要点生产和质量控制要点生产工序生产工序生产要点生产要点质量控制点质量控制点合并包装合并包

19、装1包装盒的包装盒的压印压印生产日期、批号打印的准确生产日期、批号打印的准确性、清晰度性、清晰度2合并合并合并组分的齐全性合并组分的齐全性印刷类包装品的物料平衡印刷类包装品的物料平衡成品检定质量标准成品检定质量标准l物理检查 l试剂空白l阴性对照l阳性对照l阴性参考品符合率l阳性参考品符合率l最低检出量l精密性l稳定性实验 成品入成品入库库入库入库l控制点：产品放行报告；入库数l要求： 凭由质量管理部经理签署的成品出厂合格报告，成品检定书办理入库手续，入库数应与成品出厂合格报告中所报数量一致。P2生物安全实验室管理生物安全实验室管理l人员卫生 进入P2实验室必须加穿洁净防护服，带一次性乳胶手套

20、和一次性口罩。只允许工作人员进入，禁止非工作人员进入实验室。l生物安全柜 实验室的操作严格按操作规程进行操作，对存在感染性或潜在感染性的操作须在生物安全柜内进行。做好相应的消毒、使用记录。l消毒及灭菌 所有直接或间接接触病原微生物的仪器、设备、器具，均需进行消毒处理，能高压的选择121高压灭菌30分钟处理，不能高压的选择1%次氯酸钠消毒。实验中产生的具有感染性或潜在感染性的穿透性利器废物置入黄色塑料利器盒中，其他非利器废物置入黄色医疗废物塑料袋中。l 实验室应指定专人负责感染性或存在潜在感染性材料的保藏，做好标识，建立台帐。二.金标产品【产品名称】【产品名称】l人类免疫缺陷病毒(HIV1/2)

21、抗体诊断试剂盒(胶体金法)【包装规格】【包装规格】l 50人份/盒【预期用途】【预期用途】l本试剂盒适用于对人血清/血浆或全血中的(HIV1/2)抗体的快速检测。金标产品检验原理 本品采用胶体金免疫层析技术，在玻璃纤本品采用胶体金免疫层析技术，在玻璃纤维膜上预包被金标记维膜上预包被金标记HIVgp160HIVgp160和和gp36gp36抗原等，抗原等，在硝酸纤维膜检测线和质控线上分别包被在硝酸纤维膜检测线和质控线上分别包被HIVgp41HIVgp41、gp36gp36混合抗原和抗体等，当检测进行混合抗原和抗体等，当检测进行时，样品中时，样品中HIVHIV抗体可与金标记抗体可与金标记HIVHI

22、V抗原结合形成抗原结合形成复合物，由于层析作用复合物沿试纸条向前移动。复合物，由于层析作用复合物沿试纸条向前移动。 若样品中含有可被检测的若样品中含有可被检测的HIVHIV抗体，则与检抗体，则与检测线预包被的测线预包被的HIVHIV抗原结合形成抗原结合形成“金标记金标记HIVHIV抗抗原原HIVHIV抗体抗体HIVHIV包被抗原包被抗原”复合物而凝聚显色；复合物而凝聚显色；若样品中没有若样品中没有HIVHIV抗体或抗体或HIVHIV抗体的含量低于检测抗体的含量低于检测限时，则不形成复合物而不显色。限时，则不形成复合物而不显色。示 意 图 阴性加样区加样区 阳性 无效检测线质控线主要组成成份主要

23、组成成份 lHIV(1/2)抗体胶体金试纸条抗体胶体金试纸条/板板 50 Tests l样品稀释液（磷酸盐缓冲液）样品稀释液（磷酸盐缓冲液） 1瓶瓶4.0ml/瓶瓶l说明书说明书1份份金标产品主要生产设备点样仪点样仪切割机切割机核酸蛋白仪核酸蛋白仪电子防潮箱电子防潮箱全自动喷点系统全自动喷点系统划膜机划膜机多功能薄膜封口机多功能薄膜封口机干燥箱干燥箱金标产品生产工艺流程图金标产品生产工艺流程图氯化金胶体金标记抗原HIVgp36HIVgp160金标记抗原金反应垫烧金标金喷金干燥包被抗原HIVgp36A抗原检测线包被液抗HIVgp160单抗质控线包被液配制配制反应膜划膜干燥试纸大板组装试纸条切割试

24、纸板封装氯化钠等配制样品稀释液待检成品合并出厂成品检定滴配 滴配检定半成品检定半成品检定成品检定分装、帖签物料质控点工序关键工序gp160抗原制备的生产和质量控制抗原制备的生产和质量控制生产工序质量控制要点细胞培养取工程细胞株，经接种复苏后，进行大规模细胞连续培养，收集培养上清液。上清液经灭活、过滤、超滤，得浓缩上清液，置-20保存。无菌操作，培养温度，溶氧值，pH值，细胞密度，细胞表达水平。 纯化浓缩上清液经亲和层析柱纯化，用适宜的缓冲溶液淋洗、洗脱，收集洗脱峰，经浓缩即得纯化的gp 160抗原。层析柱填料的使用次数，所用缓冲液的pH值，上样、淋洗、洗脱速度。gp160抗原质量标准抗原质量标

25、准l物理性状：为澄清溶液 l纯度：采用SDS-PAGEl分子量 ：免疫活性l稳定性gp36抗原制备的生产和质量控制抗原制备的生产和质量控制生产工序质量控制要点发酵用gp36工程菌发酵，收集菌体。 工程菌诱导温度，工程菌诱导时间。纯化菌体经超声破碎，制得粗制gp36抗原。粗制gp36抗原经亲和层析柱纯化，用适宜的缓冲液进行透析，经浓缩即得纯化的gp 36抗原。超声破碎时间，层析柱填料的使用次数，所用缓冲液的pH值控制，上样、淋洗、洗脱速度。gp36抗原质量标准抗原质量标准l纯度l分子量 l功能性试验 l稳定性gp41抗原制备的生产和质量控制抗原制备的生产和质量控制生产工序质量控制要点发酵用工程菌

26、发酵，收集菌体。工程菌诱导温度，工程菌诱导时间。纯化超声破碎，制得粗制gp41抗原。粗制gp41抗原经亲和层析、分子筛等纯化，收集目的蛋白峰，即得纯化的gp 41抗原。超声破碎时间，层析柱填料的使用次数，所用缓冲液的pH值，上样、淋洗、洗脱速度。 gp41抗原质量标准抗原质量标准l纯度：采用SDS-PAGE法检定应符合要求l分子量 l功能性试验 l稳定性 抗抗HIV单抗制备的生产和质量控制单抗制备的生产和质量控制生产工序质量控制要点细胞复苏及传代培养单克隆抗体细胞株，经接种复苏后，进行细胞传代培养。无菌操作，培养基的配制，细胞培养温度。腹水制备福氏不完全佐剂免疫，7-10天后单克隆抗体细胞悬液

27、注射于F1代小鼠 ，10天后采集小鼠腹水，离心，制得单抗-HIV腹水。对数生长期细胞接种。纯化用制备的抗HIV 单抗腹水，经亲和层析柱纯化等即得抗HIV 单抗。层析柱填料的使用次数，所用缓冲液的pH值，上样、平衡、洗脱速度。单抗质量标准单抗质量标准l纯度纯度 l分子量分子量 l功能性检测功能性检测l稳定性试验：稳定性试验：37放置放置1515天，检测上述标本，天，检测上述标本，可达到上述功能性检测标准可达到上述功能性检测标准。 金反应垫制备的生产和质量控制要点金反应垫制备的生产和质量控制要点生产工序生产工序生产关键点生产关键点质量控制点质量控制点金反应垫的金反应垫的制备制备1 1胶体金的制备胶

28、体金的制备颜色、波长的控制颜色、波长的控制2 2* *金标抗原的制备金标抗原的制备pHpH值、颜色、波长的控制值、颜色、波长的控制3 3* *滴配滴配适当地调整两种金标抗原的浓度适当地调整两种金标抗原的浓度和比例，比较灵敏度和特异性结和比例，比较灵敏度和特异性结果，确定最佳的工作浓度。果，确定最佳的工作浓度。4 4* *喷金喷金包被量的控制包被量的控制5 5抽干抽干真空度、时间的控制真空度、时间的控制6 6保存保存避光、干燥的控制避光、干燥的控制金反应垫的制备金反应垫的制备胶体金的制备胶体金的制备l控制点：胶体金颜色、波长的控制l要求： 胶体金颜色：红色； 波长：5284nm金反应垫的制备金反

29、应垫的制备金标抗原的制备金标抗原的制备l质量控制点：GP160和GP36抗原标记时 pH值、颜色、波长的控制l要求：用PH计测定，pH值：6-7； 颜色：红色 波长：5334nm金反应垫的制备金反应垫的制备滴滴 配配l质量控制点：金标抗原的灵敏度和特异性l要求：通过HIV快速诊断试剂国家参考品l测定方法：适当地调整两种金标抗原的浓度和比例，比较灵敏度和特异性结果，确定最佳的工作浓度。用HIV快速诊断试剂国家参考品检验，应符合要求。金反应垫的制备金反应垫的制备喷喷 金金l质量控制点：包被液量的准确性 l要求：2l/mm l方法： 将待包被的玻璃纤维放置于面板，开始包被，每张玻璃纤维应用目测法检查

30、加液是否完整。连续5张玻璃纤维检查合格后，进入正常包被过程。正常包被过程中每100张金反应垫应抽1张作过程检查。金反应垫的制备金反应垫的制备金反应垫的抽干金反应垫的抽干l质量控制点：真空度、时间的控制l要求： 真空度：低于100Pa 时间：维持2小时以上 金反应垫的保存金反应垫的保存l质量控制点：金反应垫的存放l要求：避光、干燥（湿度30% ）l操作： 用目测法检测保存金反应垫的铝箔袋的密封性。 存放金反应垫的干燥柜 每天监测湿度2次。金反应垫的制备金反应垫的制备金反应膜制备生产和质量控制要点生产工序生产工序生产关键点生产关键点质量控制点质量控制点金反应膜制备金反应膜制备1 1质控线包被液的配

31、制质控线包被液的配制pHpH值及浓度的控制值及浓度的控制2 2检测线包被液的配制检测线包被液的配制pHpH值及浓度的控制值及浓度的控制3 3* *包被抗原滴配包被抗原滴配适当地调整抗原的浓度和比例，适当地调整抗原的浓度和比例，比较灵敏度和特异性结果，确定比较灵敏度和特异性结果，确定最佳的工作浓度。最佳的工作浓度。4 4* *划膜包被划膜包被点样量的控制、质控线及检测线点样量的控制、质控线及检测线间距的控制间距的控制5 5抽干抽干真空度、时间控制真空度、时间控制6 6保存保存避光、湿度的控制避光、湿度的控制金反应膜制备金反应膜制备质控线包被液的配制质控线包被液的配制l控制点： 包被缓冲液pH值及

32、包被浓度l要求： 包被缓冲液pH值：用pH计测定 包被浓度：用核酸蛋白仪检测其蛋白浓度应符合要求金反应膜制备金反应膜制备检测线包被液的配制检测线包被液的配制l质量控制点： 包被缓冲液pH值及包被浓度l要求： 包被缓冲液pH值：pH计测定 包被浓度：用核酸蛋白仪检测其蛋白浓度应符合要求金反应膜制备金反应膜制备包被抗原滴配包被抗原滴配l控制点：包被抗原滴配的灵敏度和特异性l要求：通过HIV快速诊断试剂国家参考品l测定方法：适当地调整抗原的浓度和比例，比较灵敏度和特异性结果，确定最佳的工作浓度。用国家参考品检验，应符合要求。金反应膜制备金反应膜制备划膜包被划膜包被l控制点：点样量、质控线及检测线间距

33、l要求：点样量0.5-1.5l/mm ；两线间距5-6.5mml操作： 将待包被的硝酸纤维素膜放置于轨道，用卡尺检测质控线和检测线出样管的间距，符合要求后开始包被。观察包被液体出样情况，连续5分钟无异常，则进入正常包被过程。正常包被过程中每卷金反应膜抽1张进行检查。金反应膜制备金反应膜制备金反应膜的抽干金反应膜的抽干l质量控制点：真空度、时间的控制l要求： 真空度：低于100Pa 时间：维持2小时以上金反应膜制备金反应膜制备金反应膜的保存金反应膜的保存l控制点：金反应膜存放l要求：避光、干燥（湿度30% ）l操作： 用目测法检测保存金反应膜的铝箔袋的密封性。 存放金反应膜的干燥柜 每天监测湿度

34、2次。样品稀释液制备生产和质量控制要点样品稀释液的样品稀释液的配制配制l质量控制点： pH值l要求：用pH计进行测量试纸大板的组装及分装生产和质量控制要点试纸大板的组装及分装生产和质量控制要点生产工序生产工序生产关键点生产关键点质量控制点质量控制点试纸大板的组试纸大板的组装及分装装及分装1 1* *试纸大板的装试纸大板的装配配加样垫、金反应垫、金反应膜、加样垫、金反应垫、金反应膜、吸水纸等各组分衔接的控制吸水纸等各组分衔接的控制2 2* *试纸条的切割试纸条的切割试纸条切割宽度的控制试纸条切割宽度的控制3 3CTCT盒的组装盒的组装试纸条完整性的检验试纸条完整性的检验4 4装铝箔袋装铝箔袋铝箔

35、袋的密封性铝箔袋的密封性试纸大板的组装及分装试纸大板的组装及分装试纸大板的装配试纸大板的装配l质量控制点：质量控制点： 加样垫、金反应垫、金反应膜、吸水纸等加样垫、金反应垫、金反应膜、吸水纸等各组分各组分应应衔接紧密衔接紧密试纸大板的组装及分装试纸大板的组装及分装试纸试纸条条的的切割切割l质量控制点：试纸条切割宽度 要求：3002mm*8mm 试纸大板的组装及分装试纸大板的组装及分装CTCT盒的组装盒的组装l质量控制点：应检查试纸条的完整性 试纸大板的组装及分装试纸大板的组装及分装控制控制装铝箔袋装铝箔袋l质量控制点： 铝箔袋应密封样品稀释液的配制、分装及贴签样品稀释液的配制、分装及贴签生产工

36、序生产工序生产关键点生产关键点质量控制点质量控制点样品稀释液的制备样品稀释液的制备1 1配制配制溶液配制溶液配制pHpH的控制的控制2 2分装、灯检分装、灯检液量的准确性，分装液量应不液量的准确性，分装液量应不低于标示量低于标示量3 3标签打印标签打印批号打印的准确性及清晰度批号打印的准确性及清晰度合并包装的生产和质量控制要点合并包装的生产和质量控制要点l质量控制点：质量控制点：1.1.包装盒的批号打印准确、清晰。包装盒的批号打印准确、清晰。2.2.合并组分的齐全性，物料的损耗是合并组分的齐全性，物料的损耗是否符合规定要求。否符合规定要求。成品检验质量标准成品检验质量标准外观 ：试纸条外观平整

37、，材料附着牢固。每条宽不小于3mm。 物理检查：膜面无破损、划痕。 阴性参考品符合率 ：应符合要求阳性参考品符合率 ：应符合要求最低检出限参考品符合率：应符合要求精密性试验：应符合要求滤血功能：应符合要求稳定性试验：试剂盒各组分置3715天 ，应符合性能要求。三.PCR核酸诊断试剂产品【产品名称】【产品名称】乙型肝炎病毒核酸定量检测试剂盒（PCR-荧光探针法）【包装规格】【包装规格】 32人份/盒【预期用途】【预期用途】 本试剂盒采用PCR技术、实时荧光探针技术、用于对临床血清或血浆标本中的乙型肝炎病毒核酸DNA的定量检测。PCR诊断试剂的原理本品系由乙型肝炎病毒特异性引物、荧光探针、以及Ta

38、q酶等成分组成，采用PCR体外扩增的方法，用过荧光信号的变化，定量检测人血清或血浆标本中的HBV DNA。【试剂盒组份】样品处理液样品处理液A样品处理液样品处理液BHBV PCR反应液反应液AHBV PCR反应液反应液BHBV PCR反应液反应液C工作标准品工作标准品工作标准品工作标准品工作标准品工作标准品工作标准品工作标准品阴性对照阴性对照 生产工艺流程图生产工艺流程图Tris、PEG 6000、氯化钠、辛酸钠、EDTA-Na2样品处理母液引物、探针、Taq酶、dNTP、UNG酶样品处理试剂样品处理液A样品处理液BPCR工作母液PCR扩增反应试剂PCR反应液APCR反应液B PCR反应液C基

39、因工程菌株工作标准品质粒配制配制配制配制培养、抽提工作标准品工作标准品工作标准品工作标准品HBV DNA阴性血阴性对照配制配制分装待检半成品半成品检定半成品待检成品贴签、合并出厂成品成品检定物料工序关键工序质控点功能性试验工作参数标定PCR产品生产和质量控制要点生产工序生产工序质量控制点质量控制点原辅料的检验原辅料的检验主要原辅料按质量标准要求进行检验，合格才能用主要原辅料按质量标准要求进行检验，合格才能用于生产于生产提取试剂的配制及分装提取试剂的配制及分装配制完成的试剂立即分装配制完成的试剂立即分装 ，分装的装量准确性控制，分装的装量准确性控制扩增试剂的配制及分装扩增试剂的配制及分装配制完成

40、的试剂应立分装配制完成的试剂应立分装 ，分装的装量准确性控制，分装的装量准确性控制*工作标准品的制备工作标准品的制备工作标准品的定标工作标准品的定标半成品检定半成品检定应符合相应标准应符合相应标准成品检定成品检定应符合相应标准应符合相应标准工作标准品的定标工作标准品的定标 根据测定的HBV质粒含量，取适量HBV质粒用模拟血清稀释后，以质控参考品为标准进行标定，使最终稀释浓度为约107Copies/ml，即为工作标准品。 然后将工作标准品进行10倍系列梯度稀释，稀释后为工作标准品、工作标准品、工作标准品。质量标准l阴性对照：阴性对照的检测结果应为阴性，l工作标准品： 工作标准品Q1Q4的测定值符

41、合下表的范围，并且其线性相关系数|r|0.950。工作标准品 已知拷贝数（IU/ml） 拷贝数允许范围（IU/ml）Q1（工作标准品）K11073.54K11062.83K1107Q2（工作标准品）K21063.54K21052.83K2106Q3（工作标准品）K31053.54K31042.83K3105Q4（工作标准品）K41043.54K41032.83K4104l阴性参考品符合率：检测国家标准品，对8份阴性参考品检测结果不得出现假阳性。l阳性参考品符合率：检测国家标准品，对9份阳性参考品检测结果不得出现假阴性。l最低检出限：检测国家标准品中，线性和灵敏度参考品L0L5必须检出，L6仅供参考。与标准值的线性回归系数R97.0%。l精密性：测定公司工作标准品10次，