植物组织中丙二醛含量的测定

1、Forpersonaluseonlyinstudyandresearch;notforcommercialuse植物组织中丙二醛含量的测定袄一、实验目的蔗1.了解测定植物组织中丙二醛含量的意义。聿2.掌握植物体内丙二醛含量测定的原理及方法。赣二、实验原理薄丙二醛是由于植物器官衰老或在逆境下遭受伤害，其组织或器官膜脂质发生过氧化反应而产生的一种有机物。它的含量与植物衰老及逆境对植物的伤害程度有密切关系。测定植物体内丙二醛的含量，通常利用硫代巴比妥酸在酸性条件下加热与组织中的丙二醛产生显色反应，生成红棕色的三甲川，三甲川最大吸收峰在532nm处，最小吸收峰600nm处，消光系数为155(mM)-1

2、cm-1逆境一膜脂的过氧化作用一丙二醛破代巴峻酸 TBA丙二醛3,55三甲基恶哇24二|同(三甲川)粉纽鱼蓬测定植物组织中丙二醛含量会受到多种物质的干扰。其中最主要的是可溶性糖，糖与硫代巴比妥酸显色反应产物的最大吸收波长为450nm,在532nm处也有吸收。植物遭受干旱、高温、低温等逆境胁迫时可溶性糖增加，因此测定植物组织中丙二醛与硫代巴比妥酸反应产物含量时一定要排除可溶性糖的干扰。此外在 排除。532nm处的非特异背景吸收的影响也要加以腿低浓度的Fe3+存在能显著增加硫代巴比妥酸与丙二醛显色反应物在532nm、450nm处的吸收值，所以在硫代巴比妥酸与丙二醛的显色反应中需要有一定的Fe3+存

3、在，通常植物组织中每克干重含Fe3+的量为100300闯。根据植物样品量和提取液的体积，通常加入Fe3+的终浓度为0.5nmol/L。在532nm、600nm和450nm波长处测定吸光度值，即可计算丙二醛含量。莆三、试验用品莅1.实验材料蔽绿色植物叶片薄2.实验器皿嵋天平、研钵、容量瓶（50mL）、移液枪、量筒（5mL）、试管、10ml离心管、离心机、水浴锅、分光光度计B3.实验试剂蔗石英砂妍20%三氯乙酸（TCA）溶液：小心称取TCA10g,定容50mL。糖0.1%三氯乙酸（TCA）溶液：取250山20%的TCA稀释至50mL。蔽0.5%硫代巴比妥酸（TBA）:0.25g硫代巴比妥酸溶解50

4、mL20%的TCA。筮四、试验步骤蟆1.称取0.2g左右叶片放入研钵中，加入少许石英砂和2mL0.1%TCA研成匀浆，转移到试管，再用3mL0.1%TCA两次冲洗研钵，合并提取液。每个样做三个重复。妨2.向提取液中加入5mL0.5%TBA溶液，摇匀。节3.将试管放入沸水欲中，显色15min,到时间后立即取出放入冰浴中冷却至室温。蒂4.待试管冷却后转入10ml离心管中3000r/min,离心15min,取上清液，测量其体积。并以0.5%TBA溶液作为参比值，测OD600,OD532,OD450。腿五、结果与分析芨丙二醛含量：MDA(gol/gFw)=6.425X(OD532nm-皿0辿-0.55

5、9XOD450nmXVtVsXW肃K、注意事项方1.0.1%0.5%三氯乙酸对丙二醛-硫代巴比妥酸反应较合适，高于此浓度非特异性吸收偏高。芾2.丙二醛-硫代巴比妥酸显色反应加热时，时间控制沸水浴1015min,过长过短OD532值下降。蟆3.待测液浑浊可适当适当增加离心力及时间，最好使用低温离心机离心。螃4.可溶性糖与TBA显色反应的产物在532nm也有吸收（最大吸收在450nm）,当植物处于干旱、高温、低温等逆境时可溶性糖含量会增高，必要时要排除可溶性糖的干扰。黄5.低浓度的铁离子能增强MDA与TBA的显色反应，当植物组织中铁离子浓度过低时应补充Fe3+（最终浓度为0.5nmolL-1）。蚀

6、七.思考题滕1.通过丙二醛含量测定能解决什么理论问题和时间问题？着2.正常植物和逆境下植物相比，丙二醛含量有什么变化，分析原因。蒂3.不同植物同一逆境下，丙二醛含量变化不同，为什么？螈4.说明膜脂过氧化作用的对植物的影响。菱5.TBA为什么要溶解在三氯乙酸中？芄6.为什么要测定反应液在600nm下的吸光度？膀7.丙二醛反应液为什么加热时间过长会影响测定结果？8.如果可溶性糖含量影响丙二醛含量的测定，你有什么办法消除其影响？仅供个人用于学习、研究；不得用于商业用途Forpersonaluseonlyinstudyandresearch;notforcommercialuse.Nurfurdenpers?nlichenfurStudien,Forschung,zukommerziellenZweckenverwendetwerden.Pourl'etudeletrechercheuniquementddesfinspersonnelles;pasddesfinscommerciales.tojibk