蓝莓种苗生产程序与方法

1、3/5/20221 蓝莓（蓝莓（Blueberry），又名越桔，蓝浆果，属于），又名越桔，蓝浆果，属于杜鹃花科越桔属植物，全世界约有杜鹃花科越桔属植物，全世界约有400多个品种。蓝多个品种。蓝莓果实含有防止脑神经衰老、增强心脏功能、明目及莓果实含有防止脑神经衰老、增强心脏功能、明目及抗癌等独特功效物质抗癌等独特功效物质,因此被国际粮农组织列为人类五因此被国际粮农组织列为人类五大健康食品之一。近年来大健康食品之一。近年来,美国、加拿大、日本、智利美国、加拿大、日本、智利和欧洲的很多国家都把蓝莓视为保健与功能食品和欧洲的很多国家都把蓝莓视为保健与功能食品,倍受倍受人们青睐。人们青睐。 3/5/20

2、222组织培养操作室组织培养操作室3/5/20223组织培养室组织培养室3/5/20224组培苗组培苗3/5/20225组培苗炼苗组培苗炼苗3/5/20226盆栽盆栽3/5/20227育苗大棚育苗大棚3/5/20228待售的蓝莓盆栽苗待售的蓝莓盆栽苗 3/5/20229待售的蓝莓地栽两年苗待售的蓝莓地栽两年苗 3/5/202210蓝莓种植蓝莓种植3/5/2022113/5/202212品种的品种的DUS三性三性 ：1. 特异性特异性(distinctness)2. 一致性一致性(uniformity)3. 稳定性稳定性(stability)3/5/202213 种苗的经济特性（效率）种苗的经济

3、特性（效率）: 1.经济性经济性2.时效性时效性3.可生产性可生产性4.地域性地域性5.商品性商品性3/5/202214 第一节第一节 种苗生产的基本程序种苗生产的基本程序根据作物品种的生物学特性明确种苗生产的生态条件；根据作物品种的生物学特性明确种苗生产的生态条件；针对不同繁殖方式的作物种苗生产，明确主要的技针对不同繁殖方式的作物种苗生产，明确主要的技术措施；术措施；建立种苗生产基地；建立种苗生产基地；繁殖播种材料及处理；繁殖播种材料及处理；苗圃管理；苗圃管理；种苗质量评定；种苗质量评定；种苗出圃、包装、贮藏。种苗出圃、包装、贮藏。 3/5/202215一、根据作物品种的生物学特性明确种苗生

4、产的生态一、根据作物品种的生物学特性明确种苗生产的生态条件。条件。 种苗生产的生态条件主要是指自然条件种苗生产的生态条件主要是指自然条件,包括包括气候气候,土壤土壤,生物群落等生物群落等.气候条件主要有气候条件主要有:无霜期无霜期,日照日照,温度温度,年降雨量和雨季年降雨量和雨季分布等分布等,无霜期和有效积温是植物能否正常完成生育无霜期和有效积温是植物能否正常完成生育期的基本条件期的基本条件,光照对植物的影响包括光照时间光照对植物的影响包括光照时间,强度强度及光周期及光周期,土壤土壤生物群落生物群落3/5/202216长白山区拥有蓝莓野生资源长白山区拥有蓝莓野生资源强酸性沼泽地和弱酸性土壤强酸

5、性沼泽地和弱酸性土壤3/5/202217二、针对不同繁殖方式的作物种苗生产，明确主要的二、针对不同繁殖方式的作物种苗生产，明确主要的技术措施技术措施 。对于有性繁殖植物，在种苗生产中对于有性繁殖植物，在种苗生产中,保持品种纯度保持品种纯度,主要是防止各种形式的机械混杂主要是防止各种形式的机械混杂,田间去杂是主要田间去杂是主要的技术措施。的技术措施。 对于无性繁殖植物，当前作物的病毒病是引起品种退对于无性繁殖植物，当前作物的病毒病是引起品种退化减产的主要原因化减产的主要原因,所以在种苗生产过程中所以在种苗生产过程中,除了要注意除了要注意去杂选优去杂选优,防止混杂退化以外防止混杂退化以外,还应采取

6、以防治病毒病为还应采取以防治病毒病为中心的防止良种退化的各种措施。中心的防止良种退化的各种措施。3/5/202218技术路线：技术路线： 播种繁殖、扦插、组织培养等繁殖方法。播种繁殖、扦插、组织培养等繁殖方法。 3/5/202219成年母树及当年幼苗的安全越冬，土壤成年母树及当年幼苗的安全越冬，土壤PH值调整，扦插基质的选用，激素种类的应值调整，扦插基质的选用，激素种类的应用，移栽技术，温度、湿度、光照指标控用，移栽技术，温度、湿度、光照指标控制，规模化生产组织等一系列技术难题。制，规模化生产组织等一系列技术难题。 3/5/202220三、建立种苗生产基地。三、建立种苗生产基地。(一一)现代种

7、子生产基地的要求。现代种子生产基地的要求。专业化是每一种商品种苗要建立专门的生产基地专业化是每一种商品种苗要建立专门的生产基地,要要有专业技术人员有专业技术人员,严格按照种苗生产技术规程进行种严格按照种苗生产技术规程进行种苗生产苗生产;规模化是每个基地要有相当规模的面积规模化是每个基地要有相当规模的面积,要连片单一要连片单一品种种植品种种植;产业化是种苗生产基地实行产、供、销一体化，组织机产业化是种苗生产基地实行产、供、销一体化，组织机构和配套设施齐全构和配套设施齐全,生产的种子商品性好生产的种子商品性好,在市场上的竞在市场上的竞争力强争力强.3/5/202221(二二)基地的建设基地的建设1

8、.地域选择地域选择自然条件是基地建设的首要条件自然条件是基地建设的首要条件;生产水平和经济状生产水平和经济状况也是要考虑的重要因素况也是要考虑的重要因素.2.基地的建设基地的建设3.基地的管理基地的管理4.基地的扩大完善基地的扩大完善 3/5/202222脱毒种苗生产基地要求（马铃薯）：脱毒种苗生产基地要求（马铃薯）： 高纬度高纬度,高海拔高海拔,风速大风速大,气候冷凉地区气候冷凉地区 这些地区对于蚜这些地区对于蚜虫繁殖虫繁殖,取食活动取食活动,迁飞和传毒都可造成困难迁飞和传毒都可造成困难,起到隔离起到隔离作用作用. 原种田四周原种田四周10km以内没有马铃薯生产田或其他可寄以内没有马铃薯生产

9、田或其他可寄生马铃薯病毒病的寄主生马铃薯病毒病的寄主,如茄科作物等如茄科作物等.距毒源距毒源10km以上以上,即使带毒蚜虫迁飞到此即使带毒蚜虫迁飞到此,喙针上的非持久性病毒喙针上的非持久性病毒已失活而无传毒力已失活而无传毒力.3/5/2022231、生产设施、生产设施智能温室：温度、湿度、光照自动调控。智能温室：温度、湿度、光照自动调控。日光温室：具备降温、升温、通风条件，日光温室：具备降温、升温、通风条件，满足种苗的正常生长。满足种苗的正常生长。网室网室荫棚荫棚 其他其他3/5/2022242、园地选择、园地选择 蓝莓属于杜鹃花科植物，凡是有杜鹃花科植蓝莓属于杜鹃花科植物，凡是有杜鹃花科植物

10、分布的地方，都是种植蓝莓比较理想的地方。物分布的地方，都是种植蓝莓比较理想的地方。土壤土壤PH值是影响蓝莓最重要的一个土壤因子。蓝值是影响蓝莓最重要的一个土壤因子。蓝莓生长要求强酸性土壤条件，土壤莓生长要求强酸性土壤条件，土壤PH值值4.0-5.5为为适宜范围，最适为适宜范围，最适为4.3-4.8。保持土壤较高的有机。保持土壤较高的有机质含量是蓝莓生长必不可少的条件。质含量是蓝莓生长必不可少的条件。 3/5/2022253、园地准备、园地准备 园地选好后，就要针对性的进行土壤改良。在适园地选好后，就要针对性的进行土壤改良。在适宜蓝莓的种植区域，大部分的土壤条件都达不到栽植宜蓝莓的种植区域，大部

11、分的土壤条件都达不到栽植蓝莓的理想条件（蓝莓的理想条件（PH值值4.3-4.8，有机质含量，有机质含量8-12%），），只是接近蓝莓种植的土壤条件。因此，必须进行土壤只是接近蓝莓种植的土壤条件。因此，必须进行土壤改良，达到蓝莓栽植所需要的土壤条件。改良，达到蓝莓栽植所需要的土壤条件。 3/5/2022264、品种选择、品种选择 品种选择必须坚持品种区域化的原则。建园时品品种选择必须坚持品种区域化的原则。建园时品种选择错误，会给投资者带来时间和经济上的较大损种选择错误，会给投资者带来时间和经济上的较大损失。因此，建园时品种选择要慎重，一定要选择适合失。因此，建园时品种选择要慎重，一定要选择适合本

12、区域的优良品种。本区域的优良品种。3/5/202227核心种苗：核心种苗： 新品种或现有品种以及杂交种。新品种或现有品种以及杂交种。核心种苗的保持：核心种苗的保持： 核心种苗通过组培方法核心种苗通过组培方法进行保持与扩繁，这样可以保持核心种苗进行保持与扩繁，这样可以保持核心种苗特性一致。此外，也可以栽培在专用于保特性一致。此外，也可以栽培在专用于保存核心种苗的适宜防虫温室中。存核心种苗的适宜防虫温室中。3/5/202228母本苗生产：母本苗生产： 从原种上生产的扦插苗经生根即为母本苗，从原种上生产的扦插苗经生根即为母本苗，母本苗生产的扦插苗即为生产用种。母本苗应种植在隔母本苗生产的扦插苗即为生

13、产用种。母本苗应种植在隔离土壤的栽培槽中。离土壤的栽培槽中。原种的扩繁：原种的扩繁： 核心种苗在严格的保持条件下可以扩繁二核心种苗在严格的保持条件下可以扩繁二代以上，扩繁的繁殖苗要栽培在防虫温室中的花盆或栽代以上，扩繁的繁殖苗要栽培在防虫温室中的花盆或栽培槽中。所有植株的来源应记录清楚，这样每株种苗都培槽中。所有植株的来源应记录清楚，这样每株种苗都可根据繁殖的代数追溯到核心种苗。可根据繁殖的代数追溯到核心种苗。 3/5/202229四、繁殖播种材料及处理四、繁殖播种材料及处理 有性繁殖有性繁殖种子、类似种子的果实、其他种子、类似种子的果实、其他无性繁殖无性繁殖多用营养器官代替种子来作为播种材料

14、繁多用营养器官代替种子来作为播种材料繁殖后代殖后代. 3/5/202230有性繁殖有性繁殖种子质量要求种子质量要求(种子处理种子处理) 基质配制基质配制播种时间播种时间播种容器播种容器播种操作播种操作播后管理播后管理3/5/202231无性繁殖无性繁殖时期时期基质基质育苗操作育苗操作移栽移栽 种子诱发、药剂浸种种子诱发、药剂浸种脱毒技术脱毒技术组织培养组织培养其他其他3/5/202232五、苗圃管理五、苗圃管理整地整地,容器播种容器播种(穴盘、介质穴盘、介质 ） 播种：播种时期、播种量、播种方式播种：播种时期、播种量、播种方式苗床管理苗床管理 ：水、肥；光、温、气；草、病、虫；：水、肥；光、温

15、、气；草、病、虫；生长调节剂生长调节剂 ；其他壮苗措施；其他壮苗措施移栽移栽 幼苗管理幼苗管理 3/5/202233幼苗管理幼苗管理1.温度温度 2.湿度湿度3.光照光照4.施肥施肥5.浇水浇水6.间苗间苗7.病虫害防治病虫害防治3/5/202234五、苗圃管理五、苗圃管理去杂去劣：做到及早去杂去劣：做到及早,从严从严,彻底彻底 幼苗芽鞘颜色幼苗芽鞘颜色,叶片颜色叶片颜色,宽窄宽窄,形状形状,波曲与否波曲与否,上冲或者上冲或者下披下披,幼苗长势长相等特征综合鉴定幼苗长势长相等特征综合鉴定,去掉杂株去掉杂株,劣株和可劣株和可疑株疑株.苗期去杂一般结合间苗和定苗进行苗期去杂一般结合间苗和定苗进行,

16、不但可以剔除不但可以剔除杂劣株杂劣株,还可以保证田间留苗数和制种产量还可以保证田间留苗数和制种产量.拔节期或分枝去掉明显的异株拔节期或分枝去掉明显的异株,也可以结合叶型也可以结合叶型,株型株型进行除杂进行除杂. 3/5/202235健康种苗生产标准应尽量做到具体化，保证健康种苗生产标准应尽量做到具体化，保证操作性。操作性。具体的内容应包括：对防虫温室的要求，具体的内容应包括：对防虫温室的要求，基质状况，栽培（株行距、水肥管理等），基质状况，栽培（株行距、水肥管理等），器具消毒要求，清洁卫生的管理要求，定器具消毒要求，清洁卫生的管理要求，定期喷药的间隔和药剂种类，株系登记要求期喷药的间隔和药剂种

17、类，株系登记要求等。等。 3/5/202236六、种苗质量评定六、种苗质量评定 1.基础种苗分级基础种苗分级(1)育种家种子育种家种子 (2)一级原种一级原种 (3)二级原种二级原种 2.合格种苗分级合格种苗分级(1)一级种苗一级种苗(2)二级种苗二级种苗(3)三级种苗三级种苗3/5/202237七、种苗出圃、包装、贮藏七、种苗出圃、包装、贮藏种苗出圃标准种苗出圃标准 种苗出圃时期种苗出圃时期 3/5/202238嫁接苗嫁接苗:以实生苗作砧木，从优良母本取枝以实生苗作砧木，从优良母本取枝或芽嫁接繁育的种苗。或芽嫁接繁育的种苗。浆根苗浆根苗:又称裸根苗，指起苗后不带土、经又称裸根苗，指起苗后不带

18、土、经用稀泥浆沾根的种苗。用稀泥浆沾根的种苗。土团苗土团苗:起苗带泥头的种苗。起苗带泥头的种苗。 袋育苗袋育苗:采用营养袋培育的种苗。采用营养袋培育的种苗。3/5/202239出苗：出苗：浆根苗：起苗前充分灌（淋）水，尽量起全根，将部浆根苗：起苗前充分灌（淋）水，尽量起全根，将部分过长的枝梢剪除，叶片剪除程度视天气情况而定，分过长的枝梢剪除，叶片剪除程度视天气情况而定，并浆根、捆扎。并浆根、捆扎。土团苗：土团不松散，挖起后及时包扎泥头。起苗后土团苗：土团不松散，挖起后及时包扎泥头。起苗后剪除嫩枝梢及部分叶片。剪除嫩枝梢及部分叶片。袋育苗：育苗袋无严重破损，袋泥不松散。袋育苗：育苗袋无严重破损，

19、袋泥不松散。3/5/202240 待包装的种苗应经检疫，经检疫机关待包装的种苗应经检疫，经检疫机关检疫确认无检疫性病虫害，办理检疫证明检疫确认无检疫性病虫害，办理检疫证明后方可出圃外运。后方可出圃外运。3/5/202241包装：包装：袋育苗：用绳进行十字式包扎。若营养袋破损而袋育苗：用绳进行十字式包扎。若营养袋破损而土团完好，则应换袋包装再用塑料绳或麻绳等材土团完好，则应换袋包装再用塑料绳或麻绳等材料绑牢。若土团松散，则按浆根苗处理。料绑牢。若土团松散，则按浆根苗处理。土团苗：用薄膜或稻草将土团包裹、外用塑料绳或麻绳土团苗：用薄膜或稻草将土团包裹、外用塑料绳或麻绳等材料将土团包扎紧密。若土团松

20、散，则按浆根苗处理。等材料将土团包扎紧密。若土团松散，则按浆根苗处理。浆根苗：按大小分级，浆根后每捆（扎）用薄膜、浆根苗：按大小分级，浆根后每捆（扎）用薄膜、稻草等材料包扎根部保湿。稻草等材料包扎根部保湿。3/5/202242贮存：贮存： 短时间内无法定植的应置于荫棚内，短时间内无法定植的应置于荫棚内，并注意淋水保湿。并注意淋水保湿。3/5/202243种苗运输：种苗运输： 种苗在运输途中忌受热和日晒雨淋，勿堆压，种苗在运输途中忌受热和日晒雨淋，勿堆压，若叶片有萎蔫现象或根部水分不够时，只能根部浇若叶片有萎蔫现象或根部水分不够时，只能根部浇少量水，勿浇叶片，以防落叶。远程运输，途中时少量水，勿

21、浇叶片，以防落叶。远程运输，途中时间太长的，可在包装前剪除嫩梢，叶片全剪除或每间太长的，可在包装前剪除嫩梢，叶片全剪除或每片叶留片叶留1/2-1/3。3/5/202244注册及有证苗木注册及有证苗木： 柑桔苗木注册制度柑桔苗木注册制度以省为单位建立机构并实施，以省为单位建立机构并实施，机构由政府、农业、科研等部门联合组成，承担注册服机构由政府、农业、科研等部门联合组成，承担注册服务和组织无病毒繁殖材料的鉴定，保护和制定检疫条例务和组织无病毒繁殖材料的鉴定，保护和制定检疫条例等管理工作，提供无病毒繁殖材料。对经检查、核实合等管理工作，提供无病毒繁殖材料。对经检查、核实合格的柑桔繁殖场（圃）及个体

22、苗木殖者，发给生产、销格的柑桔繁殖场（圃）及个体苗木殖者，发给生产、销售许可证，并定期或不定期地经常进行普查（检查），售许可证，并定期或不定期地经常进行普查（检查），及时分布普查（检查、调查）情况。有证苗木方可供生及时分布普查（检查、调查）情况。有证苗木方可供生产使用。产使用。3/5/202245 第二节第二节 种苗生产的方法种苗生产的方法繁殖方式、播种材料繁殖方式、播种材料设施设施基质基质容器容器技术技术3/5/202246种苗生产的方法：种苗生产的方法：播种育苗播种育苗无性繁殖育苗无性繁殖育苗组织培养育苗组织培养育苗无病毒苗育苗无病毒苗育苗工厂化育苗工厂化育苗3/5/202247一、播种育

23、苗一、播种育苗播种育苗是种苗生产的主要方法之一。播种培育的种苗，根系发播种育苗是种苗生产的主要方法之一。播种培育的种苗，根系发达，生长旺盛，对环境适应性强。播种育苗操作相对简单，常规达，生长旺盛，对环境适应性强。播种育苗操作相对简单，常规的播种育苗技术，如土壤的耕作、种子的处理、播种期的选择、的播种育苗技术，如土壤的耕作、种子的处理、播种期的选择、幼苗密度及播种量的确定、播种苗的管理等都已较为成熟。幼苗密度及播种量的确定、播种苗的管理等都已较为成熟。目前，各国对于如何利用新技术目前，各国对于如何利用新技术解除种子休眠解除种子休眠的研究比较多，的研究比较多，播种育苗基质播种育苗基质作为育苗成败的

24、关键因素，也成为研究的重点，此外，作为育苗成败的关键因素，也成为研究的重点，此外，随着人们对菌根认识的不断加深，随着人们对菌根认识的不断加深，菌根化育苗菌根化育苗技术的研究已经成为技术的研究已经成为热点。热点。3/5/202248二、无性繁殖育苗二、无性繁殖育苗无性繁殖育苗是利用植物细胞全能性和再生能力的特点，通过植无性繁殖育苗是利用植物细胞全能性和再生能力的特点，通过植物体的部分营养器官，如根、茎、枝、叶、花和果实，甚至是细物体的部分营养器官，如根、茎、枝、叶、花和果实，甚至是细胞、组织和原生质等，在适宜的条件下，通过细胞的分裂、分化胞、组织和原生质等，在适宜的条件下，通过细胞的分裂、分化而

25、发育成各种组织和器官，再生成完整的新个体。用无性繁殖形而发育成各种组织和器官，再生成完整的新个体。用无性繁殖形成的群体称为无性系。成的群体称为无性系。无性繁殖育苗的方法主要包括扦插、嫁接、分株无性繁殖育苗的方法主要包括扦插、嫁接、分株(孽孽)、埋、埋(压压)条和植物组织培养。其中扦插、嫁接等方法属于传统的无性条和植物组织培养。其中扦插、嫁接等方法属于传统的无性繁育方法繁育方法.在种苗生产中仍是主要的育苗手段在种苗生产中仍是主要的育苗手段.3/5/202249扦插繁殖扦插繁殖 是常用的一种无性繁殖方法，有枝插（茎是常用的一种无性繁殖方法，有枝插（茎插）、叶插、根插等。插）、叶插、根插等。分生繁殖

26、分生繁殖 将植物体分生出来的幼植物体（如吸芽、将植物体分生出来的幼植物体（如吸芽、珠芽）或者植物营养器官的一部分（如走茎与变态珠芽）或者植物营养器官的一部分（如走茎与变态茎等）与母株分离或分割，另行栽植。茎等）与母株分离或分割，另行栽植。嫁接繁殖嫁接繁殖 是将优良品种的枝或芽作为接穗嫁接在是将优良品种的枝或芽作为接穗嫁接在生长强健、抗性强的砧木上，其组织相互愈合后，生长强健、抗性强的砧木上，其组织相互愈合后，培养成独立个体的繁殖方法。培养成独立个体的繁殖方法。压条繁殖压条繁殖 是利用枝条的生根能力，将母枝的枝条是利用枝条的生根能力，将母枝的枝条或茎蔓埋压在土中生根，生根后再与母枝割离。或茎蔓埋

27、压在土中生根，生根后再与母枝割离。3/5/202250一些繁育技术随着科学技术的发展有了很大改进，一些繁育技术随着科学技术的发展有了很大改进，如如全光照喷雾扦插育苗技术全光照喷雾扦插育苗技术的诞生解决了生根难树种的诞生解决了生根难树种的无性繁育问题。的无性繁育问题。而而细胞、组织和器官培养细胞、组织和器官培养是现代无性育苗的新技术，是现代无性育苗的新技术，因其繁育效率高，繁殖系数大，便于开展机械化因其繁育效率高，繁殖系数大，便于开展机械化管理，实现了工厂化育苗；因其可以有效减轻病管理，实现了工厂化育苗；因其可以有效减轻病毒等微生物的污染，生产出了无毒苗，便于实现毒等微生物的污染，生产出了无毒苗

28、，便于实现脱毒育苗；通过体胚的诱导，还可以制成人造种脱毒育苗；通过体胚的诱导，还可以制成人造种子等。子等。 3/5/202251三、组织培养育苗三、组织培养育苗 植物组织培养育苗是指在无菌条件下将离体植物组织培养育苗是指在无菌条件下将离体的植物器官（如根、茎、叶、茎尖、花、果等）、的植物器官（如根、茎、叶、茎尖、花、果等）、绀织（如形成层、表皮、皮层、髓部细胞、胚乳绀织（如形成层、表皮、皮层、髓部细胞、胚乳等）、细胞（如大孢子、小孢子及体细胞）、胚等）、细胞（如大孢子、小孢子及体细胞）、胚胎（成熟和未成熟的胚）以及原生质休等培养在胎（成熟和未成熟的胚）以及原生质休等培养在人工控制的环境里，使其

29、再生形成完整的植株，人工控制的环境里，使其再生形成完整的植株，经过炼苗、移苗，成为种苗。经过炼苗、移苗，成为种苗。3/5/202252四、无病毒苗育苗四、无病毒苗育苗脱毒种苗生产技术及繁育体系：脱毒种苗生产技术及繁育体系：茎尖组织培养（或其他技术）茎尖组织培养（或其他技术）防虫温室生产脱毒苗防虫温室生产脱毒苗利用无病毒块茎快速繁殖利用无病毒块茎快速繁殖3/5/202253五、工厂化育苗五、工厂化育苗工厂化育苗是工厂化育苗是20世纪世纪70年代发展起来的一项育苗技年代发展起来的一项育苗技术。术。其主要特点是选用泥炭、蛭石、珍珠岩等轻质材其主要特点是选用泥炭、蛭石、珍珠岩等轻质材料作育苗基质，用以不同规格的专用盘作育苗盘料作育苗基质，用以不同规格的专用盘作育苗盘装填基质，采用精量播种，在温室内一次成苗，装填基质，采用精量播种，在温室内一次成苗，是一种全新的育苗体系。是一种全新的育苗体系。3/5/202254工厂化育苗方法：工厂化育苗方法：容器苗育苗容器苗育苗补光育苗补光育苗无土栽培育苗无土栽培育苗育苗设备机械化育苗设备机械化3/5/202255林木种苗生产许可证申领程序林木种苗生产许可证申领程序（一）申请林木种苗生产种苗生产许可证的的单位和个人向林业行政主管部门提交如下材料：1、申请书；2、注有生