肿瘤免疫治疗思考和对策

1、关于肿瘤免疫治疗思考和对策第一页，共25页幻灯片第二页，共25页幻灯片第三页，共25页幻灯片第四页，共25页幻灯片第五页，共25页幻灯片第六页，共25页幻灯片第七页，共25页幻灯片一、树突状细胞在肿瘤免疫中的应用一、树突状细胞在肿瘤免疫中的应用第八页，共25页幻灯片z树突状细胞（DC）是机体内最重要的一群抗原提呈细胞，是机体免疫应答的有力启动者，以DC为物质基础的免疫疗法是近年来新发展起来的一种新的生物治疗手段。第九页，共25页幻灯片DC激发肿瘤特异性免疫应答的三个环节激发肿瘤特异性免疫应答的三个环节z 1. 肿瘤特异性抗原的递呈；肿瘤特异性抗原的递呈；z2. 肿瘤特异性肿瘤特异性CTL细胞和

2、非特异性杀伤细胞的活细胞和非特异性杀伤细胞的活化；化；z 3. 效应细胞向肿瘤部位的迁移和清除肿瘤的限制效应细胞向肿瘤部位的迁移和清除肿瘤的限制因素的识别。因素的识别。z主要目的是诱导患者机体产生肿瘤特异性的、主要目的是诱导患者机体产生肿瘤特异性的、持久的免疫应答。持久的免疫应答。第十页，共25页幻灯片主要治疗策略主要治疗策略z（1）直接输注）直接输注DCs，以激发机体免疫功能的，以激发机体免疫功能的主动免疫；主动免疫；z（2）以经自体）以经自体DCs体外扩增、激活的体外扩增、激活的T淋巴淋巴细胞（细胞（CTL）为物质基础的过继免疫疗法，）为物质基础的过继免疫疗法，使肿瘤患者产生有效、持久的抗

3、肿瘤免疫效使肿瘤患者产生有效、持久的抗肿瘤免疫效应。应。第十一页，共25页幻灯片 3.DC体外扩增的方法z DC 在组织中含量甚微，细胞表面缺乏特征性的标志，不易与其它细胞分离。细胞来源的困难一度限制了对DC生物学特性等方面的深入研究。z 在应用中发现治疗时使用的DC可能并不完全成熟，相当一部分回输的DC是非功能性的幼稚DC，从而大大降低了治疗效果；而如果仅仅应用未成熟的DC往往只能导致机体的免疫耐受。 国内外许多实验室都致力于研究通过体外培养获得大量高纯度功能性成熟DC的方法第十二页，共25页幻灯片 z 目前用于临床和实验研究的DC 大多是通过体外分离DC的前体细胞，在含有有关细胞因子的培养

4、体系中诱导获得。z 骨髓、脐血、外周血CD34+细胞或外周血单个核细胞均可作为体外培养DC的来源。z 适当的细胞因子配伍和应用顺序对DC的培养具有重要作用。 第十三页，共25页幻灯片肿瘤抗原特异性肿瘤抗原特异性DCs的制备的制备z细胞性肿瘤抗原体外冲击DC：包括采用灭活的肿瘤细胞或凋亡的肿瘤细胞负载DC; z合成的肿瘤细胞抗原或抗原肽体外冲击DC;z肿瘤抗原提取物负载DC：目前常用的提取物包括肿瘤细胞碎片、酸性洗脱肽及mRNA抽提物; z 基因修饰的DC：包括肿瘤抗原编码的基因及某些细胞因子（GM-CSF、IL-7、IL-12等）通过病毒导入DC。 第十四页，共25页幻灯片二、细胞毒性二、细胞

5、毒性T细胞在肿瘤免疫中的运用细胞在肿瘤免疫中的运用第十五页，共25页幻灯片zCTL抗凋亡能力测定 FLIP、Bcl-2、Baxz51Cr释放试验 对相应肿瘤细胞的杀伤作用 对自体PBMC的杀伤作用zT细胞趋化实验第十六页，共25页幻灯片A病人选择病人选择z 已经病理组织学确诊为非小细胞肺癌z 已失去手术机会或不愿接受手术治疗z 住院病人z 临床分期（TNM）：期及期以上 z 年龄65岁z 预计生存期1.0年z 生存质量评分60分z 心、肝、肾等脏器功能基本正常z 知情同意的志愿受试者第十七页，共25页幻灯片B肿瘤治疗肿瘤治疗za）将病人随机分为A、B、C三组，zA组：对照组，行常规的正规放疗或

6、化疗；zB组：试验组，正规化疗+肿瘤抗原特异性自体T细胞过继免疫治疗；zC组：试验组，正规放疗+肿瘤抗原特异性自体T细胞过继免疫治疗；zb) 肿瘤抗原特异性CTL输注程序：在减瘤治疗后，分3次回输体外扩增的自体T淋巴细胞（1109/次），即在最大程度降低机体的肿瘤负荷后，重建患者的细胞免疫功能。第十八页，共25页幻灯片C疗效评价疗效评价z a) 二个疗程后，按WHO的判定标准，评定疗效z l CR（完全缓解）z l PR（部分缓解）z l MR（稳定）z l NC或PD（无变化或进展）z b) 生存质量评分（Karnofsky的标准）z 根据肿瘤患者治疗前后的精神、睡眠、食欲、疲乏、疼痛、家庭

7、理解与配合、同事的理解与配合、自身对癌症的认识、对治疗的态度、行为状态、日常活动z 情况、面部的表情等进行等级综合评分。z c） 临床症状体征改变的分析。z d） 生存期、中位生存期的分析。z e） 免疫功能状况的分析z 采用免疫荧光标记法分析患者治疗前后的T细胞及其亚群功能变化（CD3、CD4、CD8、CD25、CD28、CD4+/CD28+、CD8+/CD28+、CD4+-IFN-+、CD8+-IFN-+、 CD4+-IL-10+、CD8+-IL-10+、CD56、CD40L、CD95L） z 采用ELISA法分析患者治疗前后的血清细胞因子水平变化（IL-2、sIL-2R、IL-10、IL

8、-12、IFN-）z 患者治疗前后自体T淋巴细胞对相应肿瘤细胞的杀伤效应测定（51Cr释放试验）z 肽-MHC四聚体的测定第十九页，共25页幻灯片三、免疫分子的分析及临床意义三、免疫分子的分析及临床意义第二十页，共25页幻灯片Dual Parameter HistogramsFSC SizeSSCgranularityLymphsMonosGrans25第二十一页，共25页幻灯片CD3CD4CD3CD8HumanLymphocytesMouse-anti-CD4Mouse-anti-CD3Mouse-anti-CD8CD3CD4CD3CD8Immunophenotyping第二十二页，共25页幻灯片抗体的基本结抗体的基本结构是一个构是一个Y Y型的多型的多肽链，由两条完肽链，由两条完全相同的重链和全相同的重链和轻链组成。轻链组成。第二十三页，共25页幻灯片抗体抗体（Antibody,AbAntibody,Ab）是血液和组织液是血液和组织液中的一类糖蛋白，以中的一类糖蛋白，以球蛋白的形式存在球蛋白的形式存在血清中，也是血清中，也是B B淋巴细胞识别抗原后增殖淋巴细胞识别抗原后增殖分化为浆细胞所产生的体液免疫应答效分化为浆细胞所