两种灭菌方法对番茄种子灭菌效果的评价.docx

1、研究报告唐琳等:两种灭菌方法对番茄种子灭菌效果的评价两种灭菌方法对番茄种子灭菌效果的评价唐琳I,刘建国2,马欣荣3（1.温州医学院附属口腔医院，浙江温州325027；2.遵义医学院附属口腔医院，贵州遵义563003；3.中国科学院成都分院生物研究所，四川成都610041）摘要:评价备茄种子经0.1%升汞和3%4%次氧酸钠溶液天菌的效果。方法:将番茄种子浸于3%4%次氯放钠溶液中充分振荡20min,以灭菌水充分漂洗种子34次。另将番茄种子浸于75%酒精12min,弃酒精后加入足量的0.1%升汞溶液充分振荡10-15min,再以灭菌水充分漂洗种子4-5次。将种子点播于TMTI固体培养基中。观察记录

2、种子经两种灭菌法后的最早出芽时间、子叶形成时间和全部出芽时间。结果：经两种灭茵剂消毒后的畚茄种子的最先出芽时间、子叶形成时间及全部出芽时间均有极显若性差异（p0.01）o结论:番茄种子消毒以3%4%次氯酸钠溶液为佳。关键词：番茄种子；灭菌；次氯酸纳；升汞中图分类号：S641.2文献标志码：A文章编号：10014705（2008）0990174）2EvaluationtheEfficiencyofSterilizingTomatoSeedswithTwoSterilantsTANGlin1,LIUJian-guo2,MAXin-rong(1.School&HospitalofStomatolog

3、y,WhenzhouMedicalCollege,Whenzhou325027,China；2.AffiliatedStomatologicalHospital,ZunyiMedicalCollege,Zunyi563003,China)Abstract:Objective:Toevaluatetheefficiencyofsterilizingtomatoseedswith0.1%mercuricchlorideand3%-4%sodiumhypochloritesolution.Methods：Tomatoseedswerefirstlyimmersedin3%-4%sodiumhypoc

4、hloritesolutionfor20minwithshakingandthenrinsedthreeorfourtimeswithsteriledistilledwater.Tomatoseedswerefirstlyimmersedin0.1%mercuricchloridefbr10to15minwithshakingandthenrinsedfourorfivetimeswithsteriledistilledwater.GerminatedtheseedsonTMT1medium.Observedthefbrmostgerminatingtime,thecotyledonsemer

5、gingtimeandthewholegerminatingtimeofsterilizationoftomatoseedswithtwosterilantsrespectively.Results：Theformostgerminatingtime,thecotyledonsemergingtimeandthewholegenninatingtimeoftomatoseedswithtwosterilantsrespectivelyhavesignificantdifference(p9011L40478510015T33948059014L53585812017t3353794120132

6、.2统计分析图1反映了经统计分析以0.1%升汞溶液和3%4%次氯酸钠溶液消毒的番茄种子在TMT1培养基中光照培养后的最早出芽时间、子叶形成时间和全部出芽时间，均有显著性差异(P0.01)o图1两种灭菌法统计分析图(po.o5*,po.or,)3讨论植物组织培养是离体无菌培养，因而必须对来自有菌空间的外植体进行消毒灭菌，此时必须做到既要把外植体表面的微生物彻底杀死，又不伤害其组织和表层细胞，以获得不污染且存活的外植体。种苗污染大体上有四方面的原因:(1)种子本身灭菌效果不好；(2)培养基灭菌不彻底;(3)空气带菌;(4)实验操作不当。其中最重要的是种子灭菌效果。由于作物种子在其生长发育过程中易受

7、自然界各种细菌和真菌的浸染，种子不仅表面带菌，而且内部也可能被感染，所以对种子进行彻底的灭菌就非常重要，而且也比较困难。迄今各种灭菌方法已有不少报道5O一般常用的灭菌剂有：75%酒精、0.1%升汞、3%4%次氯酸钠等，其它抗菌素、双氧水、硝酸银、漠水等亦可采用。升汞被用作消毒剂已有百年历史(1881年Koch首先发现其杀菌效力),1:(500-2000)的升汞溶液对多数细菌有灭菌作用。它杀菌力强,但剌激性和腐蚀性大，毒性也大，对细菌的渗透性小，遇有机物效果降低。升汞对金属器皿有腐蚀作用，对人畜有剧毒。次氯酸钠灭菌的原理是水解形成次氯酸，次氯酸再进一步分解形成新生态氧,新生态氧的极强氧化性使菌体

8、和病毒上的蛋白质等物质变性，从而使病源微生物致死。不同植物种子对不同消毒剂有不同的耐受能力，种子消毒时间过长，虽然灭菌效果好，但种子发芽率会下降。本试验对比了使用0.1%升汞溶液和3%4%次氯酸钠溶液消毒番茄种子的效果。结果表明:两种灭菌剂在最先出芽时间、子叶形成时间及全部出芽时间上均有显著统计学差异(P0.01)。分析其原因可能为番茄种皮较薄，而升汞毒性较大,从而破坏番茄种的萌芽活性，致使其最先出芽时间长且全部出芽时间不同步。在播种数量不大的情况下,影响后续试验的进行。相较于0.1%升汞溶液，番茄种子灭菌以3%4%次氯酸钠溶液为佳。参考文献：1PierikRLM.Invitroculture

9、ofhigherplantsM.DordrechtBostonLancaster:MartinusPublishers,1987；89-94.2 吴良欢，陶勤南.水稻有机营养试验供试无菌苗的筛选和培育方法J.浙江农业大学学报,1997,23(6):711-715.3 吴良欢，陶勤南.植物有机营养无菌培养试验方法的研究与应用J.土壤学报,1999,36(4)：551-558.4 DoddsJH,RobertsLW.Experimentsinplanttissueculture(2nd)M.London,NewYork,NewRocbelleMelbourneSydney:CambridgeUniversityRress