实验立项申请书

1、附件1：项 目编 号实验室开放项目申请表项目名称： 周口水果市场猕猴桃软腐病病害分析 项 目 类 别： 实验项目设计型 申请人： 刘勇亮 申请人所在学院： 生命科学与农学学院 实 验 室 名 称： 微生物工程 导师姓名职称： 填表日期： 2014年3月15日 周口师范学院教务处制填 写 说 明一、本表要按顺序逐项填写，内容要实事求是，表达要明确、严谨。空缺项要填“无”。要求一律用A4纸双面打印，于左侧装订成册。本表一式四份，指导教师、实验室、院（系）、教务处各一份。二、项目编号由教务处统一编制填写。项目类别分为以下五种：科技创新型，自选型，实验项目设计型，参与科研型，参加各种比赛型。三、申请参

2、加周口师范学院实验室开放项目团队人数不得超过10人（1人为项目负责人，参与合作研究者19人），运行周期一般为1年。四、指导教师主持科研项目情况限填两项；代表性科研成果限填三项，若为论文需按照论文题目、发表刊物名称及年、卷、期、页码填写，若为科研成果奖，需按照成果名称、授奖机构及获奖等级填写，若为专利，需按照专利名称、专利性质（国家发明专利或实用新型专利）、授权机构填写。以上成果限第一作者或第一完成人。 五、项目所需费用主要用于补贴学生参加开放实验项目所需的材料消耗、实验项目设计中必要的设备制作、研制费用，不列支人员劳务等其它费用。 一、项目申请人情况 申请人姓名刘勇亮性别男民族汉学号20130

3、7030023所在学院生命科学与农学学院专业、班级生物技术、2013级生物技术项目名称周口水果市场猕猴桃软腐病病害分析项目类别实验项目设计通讯地址生命科学与农学学院2013级生物技术班联系电历自何年月至何年月学习单位（高中以上，含高中）任职2010.92013.6汝南高中课代表2013.9至今周口师范学院班长申请人参加科研的经历自何年月至何年月参加项目名称项目来源担任的工作取得的成果申请人入校以来的主要专业必修课成绩课程名称类别成绩课程名称类别成绩动物学专业课90无机化学专业课95植物学专业课93微生物学专业课91生物化学专业课88免疫学专业课84有机化学专业课92项

4、目组其他成员（不包括申请人和导师）姓名性别学号所在学院专业分工签名李素平女201307030024生命科学与 农学学院生物技术文献检索张猛男201307030028生命科学与农学学院生物技术参与实验杨信男201307030042生命科学与农学学院生物技术参与实验校万莹男201307030012生命科学与农学学院生物技术数据收集与分析二、指导教师简况指导教师性别民族年龄研究方向职称部门所在实验室主持科研项目情况起止时间项目名称项目来源代表性科研成果三、指导教师对申请人的评价对申请人的专业基础、工作态度、学风及研究能力的评价 该同学学习认真，学风端正，成绩优秀，专业基础扎实，实验操作能力强，具有一

5、定独立思考解决问题的能力，科研能力强对申请项目的价值、可行性、工作基础等方面的评价猕猴桃是猕猴桃科猕猴桃属的落叶缠绕性藤本植物，猕猴桃果实酸甜可口，是一种鲜美而富含营养的水果。每100g果肉中含有Vc100420mg，其Vc含量比柑桔高68倍，比苹果高32倍以上，此外果肉中还含有机酸1.21.4%，糖814%，蛋白质7.6%，脂肪0.3%以及少量的钙。然而，几乎所有的鲜食水果都会携带真菌进入消费市场，由于这些真菌多为田间潜伏侵染，需要一定的时间才能至腐，往往在果蔬进出口通关时难以用肉眼察觉而被疏漏，所以不断的对猕猴桃进行深入研究意义重大。猕猴桃性味甘酸而寒，有解热、止渴、通淋、健胃的功效。可以

6、治疗烦热、消渴、黄疸、呕吐、腹泻、石淋、关节痛等疾病，而且还有抗衰老的作用。唐代医药学家陈藏器介绍猕猴桃的功效为“调中下气、主骨节风、瘫缓不随、长年白发”。现代医学研究分析，猕猴桃果实中含有糖类，蛋白质中氨基酸丰富，蛋白酶十二种，维生素B1、C、胡萝卜素以及钙、磷、铁、钠、钾、镁氯、色素等多种成分。其维生素C含量是等量柑橘中的五至六倍。有报道称：猕猴桃能阻断致癌物质亚硝胺合成的活性成分，阻断率达98%，有抑制癌细胞的作用。所以，猕猴桃是滋补强身，抵抗癌症的上等果品，是人们生活中常见也很受欢迎一种水果。本研究小组成员具有微生物培养鉴别的相关理论知识和实验技能，并跟随老师参加过相关研究的实验设计、

7、实验准备及整个实验过程，为开展本课题研究奠定了良好的基础。实验所用仪器的使用方法及生理指标的测定方法已经熟练掌握，无技术问题。四、 项目说明及评审意见实验项目内容、创新点1. 周口水果市场猕猴桃软腐病病害分析步骤选取材料 表面杀菌 平板培养 分离纯化 对比鉴定2. 实验设计2.1实验材料：腐烂的猕猴桃，PDA+链霉素平板培养基，恒温培养箱，解剖刀，次氯酸钠，70%酒精，无菌水，秒表，吸水纸2.2实验方法：取材及表面消毒选择典型的单个病斑，用解剖刀从病源边病组织数块（每个果实4小块，一共5个果实），于70%酒精中浸泡30秒，无菌水冲洗一次，次氯酸钠浸泡1分钟，无菌水冲洗3次，吸水纸吸干组织表面的

8、水。平板培养： 将组织块移至PDA+链霉素的平板培养基上，每皿放4块，25恒温箱内培养。选取生长旺盛的菌落一个或几个，用打孔器取边缘的菌丝，移至新的PDA+链霉素的培养基中，分别在25恒温培养基中培养。分离纯化： 待菌落接触前，分别取含菌落边缘菌丝的菌蝶数块，移至新PDA平板纯化，每板1个菌碟，得到一纯，25下，全黑暗培养。在菌落长至2/3平板时，用打孔器取菌落边缘菌碟，移至新PDA平板纯化，每板一个培养基块，得到二纯，25下，全黑暗培养。此后，在菌落长满至2/3平板时，重复获得二纯的方法进行培养，获得纯化的菌株后进行后续实验。设置空白对照组对比鉴定由实验结果看出，有三种菌的菌落有差异：1.

9、病原菌在25PDA培养基上生长迅速，4d即长到大约6cm，6d即长满整个平板，生长初期呈白色絮状菌丝体，菌落边缘不清晰，有大量新生的菌丝，呈绒毛状，大约5d后菌落转变为灰白色絮状。气生菌丝有隔，分生孢子单胞，无色，椭圆形，培养期间未见有性孢子产生。经查阅参照真菌鉴定手册得知，此种菌有可能为草茎点霉。2. 另一种在PDA培养基上培养5天的菌落呈粉红色，边缘呈毛绒状。初生菌丝为黄色，慢慢均转变为红色。显微镜下可观察到菌丝的形态为丝状。光学显微镜下可以观察到菌丝的形态为长丝状。经查阅参照真菌鉴定手册，此种菌可能为三线镰刀菌。3. PDA培养基上培养5天的菌落正面中央部分呈灰黑色，边缘为白色。背部中央

10、部分色素为墨黑色，边缘为色素淡黄，边缘蓬松呈毛绒状。光学显微镜下可观察到孢子的形态为手榴弹状。根据菌落和孢子形态，参照真菌鉴定手册，初步判断此菌可能属于链格孢菌。进度安排2015年3月-2015年4月 利用数据库进行数据整理与分析2015年5月-2015年8月 进行平板培养对照试验，并对比得出结论2015年9月-2015年10月 统计数据，整理论文实验开展的措施 课题组成员进行合理分工，明确课题研究的具体内容，探究实验方案，制定实验步骤。指导老师负责对实验方案的认真审阅，提出不足和建议并与学生讨论，制定出更加合理的实验方案：指导老师参与到实验过程，随时进行指导。课题组成员在完成自己工作的同时，要协助其他同学，加强团队合作，对实验过程、实验结果的记录和分析以及出现的问题探讨出有效的解决方法，使实验顺利完成，达到预期的目的。预期目标 本项目的完成将对周口水果市场猕猴桃的储存销售提供一定的理论依据。通过本项目的研究，可以延长猕猴桃的储存时间，获得更大利润，并在核心期刊上发表研究性论文1篇。实 验 条 件主要仪器设备名称场 地主要实验耗材名 称数 量恒温培养箱微生物实验室猕猴桃10斤无菌操