马铃薯论文马铃薯CBF3基因抗氧化酶低温胁迫光合特性

1、马铃薯论文：转CBF3基因马铃薯提高抗冷性的研究【中文摘要】低温对植物造成的伤害，表现为膜的损伤，活性氧和 自由基含量增加以与一些渗透调节物质的积累等。这些现象的出现主要是由于低温对植物细胞膜系统的伤害，导致参与生命活动的各种酶 的结构被破坏，活性降低,从而使细胞的代谢系统紊乱。植物光系统对 低温胁迫非常敏感，在低温逆境条件下活性氧的大量积累，导致光合 机构因受氧化胁迫而受损伤，光化学效率下降，同时催化光合暗反响 的酶活性也因对低温敏感而降低，最终表现为光合速率的下降。本研 究以拟南芥 CBF3(CRT/DRE binding factor 3) 基因为基因，应用农杆 菌介导的转化法将35SC

2、BF痔口 rd29ACBF3导入马铃薯(Solanum tuberosum L)鲁引1号块茎,实现其在马铃薯中过量表达得到转基因 植株,对其进展了分子生物学的验证与光合生理指标的测定，研究转AtCBF3基因马铃薯对低温的抗性机理。主要结果如下:(1)短期与长期低温处理均导致马铃薯叶片光合速率，光合羧化效率，表观量子效 率的下降。转CBF3基因马铃薯叶片降低幅度低于野生型马铃薯，诱导 型启动子植株叶片低于组成型启动子植株。(2)低温处理过程中，转 CBF3基因马铃薯的最大光化学效率 【英文摘要】Lowtemperature maycause damageswhich in elude many

3、aspects such as the cha nge of the membra ne lipids phase, the accumulati on of some sec on dary metabolites, the level of reactive oxyge n species and so on. All these phe nomena result from the damages of some en zymes which were invo Ived in the metabolism of pla nts cells. Photo systems are also

4、 very sensitive to low temperature stress, under the low temperature stress Reactive Oxygen Species (ROS) accumulates a great deal, which results in photo apparatus bein 【关键词】马铃薯CBF3基因抗氧化酶低温胁迫光合特性【英文关键词】CBF3 pla nt cold-tolera nee photochemical activity potato【索购全文】联系固Q1: 138113721囚Q2: 139938848同时提供

5、论文写作一对一辅导和论文发表服务.保过包发【目录】转CBF3基因马铃薯提高抗冷性的研究符号说明4-8 中文摘要 8-10 英文摘要10-111前言12-261.1植物对低温的应答抗氧化系统对低温逆境的响应13-141.1.2 植物细胞应对低温胁迫的渗透调节 植物光合机构对低温胁迫的响应15低温应答的基因调控15-171.2 有关CBF基因家族17-221.2.1 植物CBF基因家族的发现17-181.2.2 植物CBF的序列特征 18-191.2.3 CBF转录因子对COR基因的表达调控植物CBF冷应答通路20-221.3启动子的类型22-241.3.1 组成型启动子221.3.2 诱导型启动

6、子 22-231.3.3 组织特异型启动子23-241.4研究目的与存在的问题 24-262材料与方法26-392.1实验材料与处理 262.1.1 实验材料 26 菌株与质粒26酶和生化试剂262.1.4 PCR引物262.2 实验方法 26-302.2.1 总 RNA的提取 PCR扩增28连接反响28-292.2.4 大肠杆菌感受态细胞的制备29转化与克隆筛选29碱法小量提取质粒质粒DNA的酶切鉴定302.2.8 回收302.3原核表达载体的构建获得目的基因302.3.2 构建重组表达载体30-312.3.3大肠杆菌BL21原核表达的诱导31 聚丙烯酰胺凝胶电泳 重 组蛋白的纯化原核表达马

7、铃薯CBF3重组蛋白抗体制备332.4蛋白杂交分析植物总蛋白的提取33聚丙烯酰胺凝胶电泳 33半干法蛋白转移33-342.4.4 封闭与杂交34显色反响342.4.6 尿素-SDS-PAGE342.5农杆菌介导的马铃薯转化34-362.5.1 侵染用根癌农杆菌的制备 马铃薯转化、再生体系的建立35培养基配方35马铃薯的栽培与繁种35转基因马铃薯的鉴定 35-362.6生理指标的测定光合速率的测定调制式荧光仪荧光参数的测定37快速叶绿素荧光诱导曲线的测定37 丙二醛含量和相对电导率的测定 37 抗氧化酶 活性测定37 叶片中叶绿素含量变化测定 37-38 2.7统 计分析38-393结果与分析3

8、9-603.1马铃薯CBF3基因原核表达原核表达载体的构建 39重组蛋白的表达与诱导条件的优化 39-403.1.3 pET30a-CBF3重组蛋白的亲和纯化与抗体的制备40-413.2马铃薯转化与分子鉴定41-43马铃薯转化41转基因植株的分子鉴定41-433.3短期低温处理条件下转基因植株的生理指标测定43-54转CBF3基因马铃薯外部形态的变化43-45低温处理条件下转CBF3基因马铃薯叶片光合速率的变化低温处理对PSH相关参数的影响46-503.3.4 低温处理对MDA含量和电导率的影响50-51低温处理对AtCBF3转基因马铃薯的活性氧水平的影响51低温处理对转CBF3基因马铃薯抗氧化酶活性的影响低温处理对转CBF3基因马铃薯卡尔文循环关键酶活性的影响低温胁迫对烟草叶片脯氨酸和可溶性糖含量的影响543.4长期低温处理条件下转基因植株的生理指标测定低温处理条件下转CBF3基因马铃薯叶片光合速率的变化 54-563.4.2 低温处理对Fv/Fm